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文檔簡介

1、生物化學實驗報告姓 名： 符含敏 學 號： 3140090079 專業年級： 2014級預防醫學 組 別： 第三實驗室 生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗名稱肝糖原的提取、鑒定與定量實驗日期2015-1-8實驗地點第三實驗室合作者楊銳 指導老師 朱利娜評分教師簽名批改日期格式要求：正文請統一用：小四號，宋體，1.5倍行距；數字、英文用Times New Roman；標題用：四號，黑體，加粗。需強調的地方請用藍顏色標出。不得出現多行、多頁空白現象。1、 實驗目的：提取雞肝中的肝糖原進行肝糖原的定性以及定量實驗 2、 實驗原理：1.低濃度的三氯醋酸能使蛋白質變性，破壞肝組織中的酶且沉淀蛋白質，使

2、糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能將濾液中的糖原沉淀。2. 糖原溶液遇碘呈紅棕色，糖原水解成的葡萄糖與班氏試劑水浴加熱可變黑色。3. 糖原在濃酸中可水解為葡萄糖，濃硫酸可使葡萄糖進一步脫水生成糠醛衍生物，它再與蒽酮試劑脫水縮合生成藍色的化合物。4. 糖含量在10-100g，溶液顏色深淺與可溶性糖含量成正比。3 實驗材料：1.雞肝 乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘試劑 班氏試劑 普通離心機 室溫至100恒溫箱 可見光分光光度計 天平 剪刀 鑷子 研缽 試管架 10ml離心管 刻度吸量管 白瓷反應板2. 30%KOH 標準葡萄糖溶液 90%濃硫酸 蒽酮顯色劑 四

3、實驗步驟： 1.肝糖原的提取與鑒定： 雞肝約1.5 g，剪碎5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳狀5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝勻漿全部轉入離心管中，離心3分鐘（4000 r / min）沉淀（棄去） 上清（取3 ml）3ml 95%乙醇，混勻，靜置10分鐘離心5分鐘（4000 r / min）上清（棄去） 沉淀蒸鎦水1 ml沸水浴2分鐘，溶解沉淀白瓷板孔穴中 糖原溶液1ml濃HCl 5滴加碘試劑2滴 加碘試劑2滴 沸水浴15分鐘，冷卻糖原溶液2滴 50%NaOH 5滴呈色對比 糖原水解液2滴 糖原水解液班氏試劑4滴混勻沸水浴2分鐘，觀察變化 2.肝糖原的定量測定： 雞肝0.15 g30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分鐘冷卻，全部轉入100 ml容量瓶中加水至標線，仔細混勻，此為糖原提取液糖原的測定取3支試管，按下表操作:試劑（ml）空白管標準管樣品管標準葡萄糖溶液1.0糖原提取液1.00.2%蒽酮溶液（用吸量管）2.52.52.5混勻，沸水浴10分鐘，冷卻c。在分光光度計620 nm波長處，用空白管溶液調零，測定各管溶液的吸光度（A）。5 實驗結果的記錄與分析：1. 所測吸光度值記錄表 標準管 糖原提取液 吸光度值 0.693 0.7632. 肝糖原含量的計算： 肝糖原（g/100g肝組織）=0.763/0.693 ×0.05

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