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文檔簡介

1、熒光顯微技術和應用12級生物科學邱修明原理 普通光學顯微鏡 通過普通光源的照明觀察標本熒光顯微鏡(fluorescence microscope)： 利用較短波長的光(激發光)照射樣品，使樣品受到高能量激發，產生較長波長的熒光(發射光)，用來觀察和分辨樣品中產生熒光的物質的成分和位置。透射式落射式落射式透射熒光顯微鏡原理圖落射熒光顯微鏡原理圖 透射式 落射式分色鏡 反射激發光，透過熒光暗場聚光鏡 來自下面光源的光線經過暗場聚光鏡，形成了橫過顯微鏡視野而不進入物鏡的強烈光束。因此視野是暗的 熒光圖像的記錄方法熒光顯微鏡所看到的熒光圖像具有： 形態學特征和熒光的顏色、亮度判斷結果時，必須將二者結合

2、起來綜合判斷 記錄結果：主觀指標（即工作者目力觀察） 客觀指標（細胞分光光度計、圖像分析儀等）熒光顯微鏡應用技術1. 對細胞結構或組分的定性位、半定量研究 免疫熒光技術 用熒光標記的抗體或抗原與樣品(細胞、組織或分離的物質等)中相應的抗原或抗體結合，以適當檢測熒光的技術對其進行分析的方法。將抗原或抗體與熒光染料連接，用于檢測相應特異性的抗體或抗原的方法稱“直接免疫熒光技(directimmunofluorescent technique)”。用熒光染料標記的第二、第三抗體等檢測相應抗原抗體復合體的方法則稱“間接免疫熒光技術(indirect immunofluorescent techniqu

3、e)”。 由于熒光素所發的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對抗原進行細胞定位2.作為生物大分子篩選與鑒定的標記物。 綠色熒光蛋白 綠色螢光蛋白(green fluorescent protein)，簡稱GFP，其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光，在生物學研究中綠色熒光蛋白具有廣泛用途，包括有 1.分子標記 利用綠色熒光的發光機制，可將GFP作為蛋白質標簽(protein tagging)，即利用DNA重組技術，將目的基因與GFP基因構成融合基因，轉染合適的細胞進行表達，然后借助熒光顯微鏡便可對標記的蛋白質進行細胞內活體觀察2.藥物篩選 熒光探針分布是利用信號傳導中信號分子的遷移功能，將一熒光蛋白與信號分子相偶聯，根據熒光蛋白的分布情況即可推斷信號分子的遷移狀況，并推斷

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