1、 廈門大學遺傳與分子生物學實驗課程試卷生命科學學院生物學系 2002 年級 各 專業(yè)主考教師： 章 軍試卷類型：（a 卷/b 卷）一、填空題（每題 2 分，共 50 分）1. 果蠅具有豐富的外表型態(tài)差異，包括_、_、_，_與_。2. fish 技術的全稱是_。3. 細菌轉導實驗中所用的菌株分別是：_和_ ,用的培養(yǎng)基是_培養(yǎng)基。4. 轉座子引起的插入突變實驗中所用的菌株分別是：_ 和_。5. 在 提 基 因 組 dna 時 ， 為 保 證 dna 的 完 整 性 應 該 采 取 的 步 驟有，。6. dna 凝膠電泳可以以和為凝膠介質，當 dna 為bp 時， 用 作為介質。抽提，采用 體積；

2、沉淀 dna 用bp 時,用作為介質，當 dna 為7. 抽提 dna 純化時，一般采用體積 ；洗滌沉淀時用，。8. dna 純度一般用比值來衡量，當比值在表示 dna 很純，當表示不干凈，當表示含過多。9. 衡量 dna 得率或濃度時應該用10. 進行電泳加樣時，要將 dna 樣品與值來進行計算，公式表示為混合，其主要成分為。，如要加樣10ldna 要加l 混合。11. 在提取 dna 時，酚氯仿的作用是，其比例應為，可選擇使用酚，在使用酚時應注瓶子來裝。氯仿異戊醇意，酚的飽和是用，一般用的酚需要 酚，要用12. 酚是蛋白變性劑，用酚抽提細胞 dna 時，具有兩方面的作用：(1)(2)13.

3、 提質粒 dna 時，加入 ste 的作用是。；加入溶液的作用是，現(xiàn)，象；加入溶液作用，現(xiàn)象，成分主要為，現(xiàn)象提供環(huán)境；加入溶液作用是，成分主要是，目的是。14. 質粒 dna 有以下狀態(tài)、，進行電泳時，最后為色槍頭， l 用跑的最快在最前面，其次為、。15. 實驗過程中常用的槍頭有以下幾種：l 用色槍頭，l 用_色槍頭。處理，轉化細菌時需要進行16. 轉化時用的感受態(tài)細菌需要用秒，目的是， 時間為。17. 膠回收 dna 時需注意，應盡量將足夠小徹底， 其中加入與，質量比應為，。洗滌液中含有，洗脫液可以用代替。18. 酶切 dna 時，如 dna 不純可通過，進行克服。，連接反應時體系常19

4、. 連接反應時，外源 dna 與質粒 dna 的摩爾比例應為用。20. 在 酶 切 反 應 管 加 完 各 種 反 應 物 后 ， 需 要 離 心 2 秒 鐘 ， 其 目 的 是_和_。21. 用乙醇沉淀 dna 時，通常要在 dna 溶液中加入單價的陽離子，如 nacl 和 naac，其目的是。22. pcr 反應過程分為三個步驟，即23. pcr 反應受24. 部分酶切可采取的措施有：(1)(3) 等。，和。，等因素的影響。(2)25. 限制性內(nèi)切核酸酶通常保存在二、簡答題（每題 5 分，共 40 分）26. 請列出雌雄果蠅主要特征。濃度的甘油溶液中。27. 簡述染色體組型分析的分組排隊原

5、則。28. 噬菌體效價和轉導頻率如何計算？如何計算tn5 易位插入突變總頻率？29. 為了選擇下面兩種突變型，應對只含有葡萄糖、硫酸銨以及無機離子的基本培養(yǎng)基作何調(diào)整?leu，亮氨酸營養(yǎng)缺陷型；gal，不能以半乳糖作為唯一碳源的突變型。30. 請你用 hind設計一個質粒的 dna 酶切反應體系。31. 簡述一個完整外源 dna 的克隆過程。32. 一個攜帶有氨芐和卡那霉素抗性基因的質粒被僅在卡那霉索基因中有識別位點的消化。消化物與酵母 dna 連接后轉化對兩種抗生索都敏感的e coli菌株。(l)利用哪一種抗生素抗性選擇接受了質粒的細胞?(2)怎樣區(qū)分接受了插入酵母 dna 的質粒的克隆?e

6、cor33. 你打算擴增下圖所示的兩段序列之間的 dna，請設計一對引物序列。5-gacctgtggaagc-catacgggattg-33-ctggacaccttcg-gtatgccctaac-5三、實驗設計（10 分）種子在儲藏過程中發(fā)生了某種變化，使得長成的水稻很容易被一種病原菌感染。據(jù)推測可能是某一化學誘導的突變導致一個具有抗菌功能的關鍵酶丟失。請設計一個實驗驗證這種推測是否正確，如何使種子重新獲得對這種病的抗性?提示：根瘤農(nóng)桿菌(agrobacterium tumefaciens)具有通過其 ti 質粒將細菌 dna 帶入植物基因組的獨特功能。附加題：談談你對該門實驗課的建議或意見。

7、 參考答案：一、 填空題1眼色、眼形、翅形、剛毛的形狀和數(shù)目2熒光原位雜交技術3gal 、gal 、 emb+-4tn5、 fd10065低溫、動作輕柔、抑制酶活6瓊脂糖、聚丙烯酰胺，100、瓊脂糖、100、聚丙烯酰胺7苯酚、一倍、無水乙醇、兩倍、70%乙醇8od /od 、1.8-2.0、1.8、dna、1.6、蛋白質2602809od、dna 濃度（g/ml）=（od260-od330）50g/ml稀釋倍數(shù)（100）10 上樣緩沖液、溴酚蘭、111 蛋白質變性、24：1、25：24：1、tris、防止氧化、飽和、棕色12 蛋白質變性、細胞破壁13 緩沖液、溶菌、溶液渾濁、細胞破壁蛋白變性、

8、溶液變粘稠、sds、堿性、中和、絮狀沉淀、乙酸、使染色體和蛋白質變性沉淀，使質粒 dna 析出14 ccc、oc、lc、l、ccc、oc、lc、l15 1000、藍、200、黃、10、白16 cacl 、42熱激、90、使質粒 dna 轉化入細胞217 去除雜質、提高得率、dna 膠切塊、溶解、膠塊、溶解液、1：3、70%乙醇、無菌水18 酚抽提、乙醇沉淀、加 rna 酶19 1：1、t dna 連接酶420 混勻、濃縮21 中和 dna 電荷促沉淀22 變性、退火、延伸23 溫度、mg 、dntp、模板、引物+24 降低反應溫度、縮短時間、減少用量25 50%二、 簡答題26雌果蠅 個體較大

9、 腹部末端較尖 腹部背面有五條黑條紋 外生殖器較簡單，有陰道板和肛上板等結構 腹部腹面有 6 個腹片 無性梳雄果蠅 個體較小 腹部末端較鈍 腹部背面有三條黑條紋，最后一條極寬，并延伸到腹面 外生殖器較復雜，有生殖弧、肛上板、陰莖等結構 腹部腹面有 4 個腹片 前腿跗節(jié)上有性梳27分組排隊原則l 著絲粒類型相同，相對長度相近的分一組l 同一組的按染色體長短順序配對排列l(wèi) 各指數(shù)相同的染色體配為一對l 可根據(jù)隨體的有無進行配對l 將染色體按長到短排隊，短臂向上28效價(單位/ml)=斑數(shù) x 稀釋倍數(shù) x 取樣量轉導頻率=(轉導子數(shù)/ml)/(噬菌體數(shù)/ml)x100%tn5 易位插入突變總頻率=f因子上 lac 基因插入突變數(shù)（b 板上菌落數(shù)）/f因子轉移數(shù)（a 板上菌落數(shù)）x100%29在培養(yǎng)基中添加亮氨酸進行負篩選；在培養(yǎng)基中以半乳糖代替葡萄糖進行負篩選305-gacc