鹽酸托莫西汀膠囊在安康人體的藥動(dòng)學(xué)研究【摘要】目的建立快速、靈敏的托莫西汀人體內(nèi)血藥濃度的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定法，并對(duì)12名安康志愿者口服鹽酸托莫西汀膠囊后在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程進(jìn)展研究。方法12名安康志愿者單劑量口服給藥20g后，分別于給藥前和給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24h采集血樣。用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血漿中托莫西汀的濃度，并采用DAS藥動(dòng)學(xué)程序?qū)υ囼?yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)展處理，求算有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果單劑量口服給藥鹽酸托莫西汀膠囊20g后，其平均血藥質(zhì)量濃度-時(shí)間曲線擬合符合二室模型，T1/2、Tax、ax、AU0-24、AU0-∞分別為(4.55±0.79)h、(1.33±0.48)h、(225.18±48.53)μg·L-1、(971.34±219.52)μg·L-1·h和(992.60±229.93)μg·L-1·h。結(jié)論建立的托莫西汀人體內(nèi)血藥濃度測(cè)定方法靈敏、可靠、簡(jiǎn)便，鹽酸托莫西汀膠囊單劑量給藥后在中國(guó)安康人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道根本一致。【關(guān)鍵詞】鹽酸托莫西汀膠囊;高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法;藥動(dòng)學(xué)Keyrds:atxetinehydrhlrideapsules;HPL/S/S;pharakinetis托莫西汀(atxetine，商品名：擇思達(dá))是第1個(gè)用于治療注意缺陷多動(dòng)障礙(attentindefiithyperativitydisrder，ADHD)的非興奮性藥物，目前已經(jīng)在美國(guó)、英國(guó)、中國(guó)等多個(gè)國(guó)家上市并應(yīng)用[1]。托莫西汀是一種去甲腎上腺素再攝取抑制劑，能選擇性抑制突觸前胺泵對(duì)去甲腎上腺素的再攝取，增強(qiáng)去甲腎上腺素的翻轉(zhuǎn)效應(yīng)，從而改善多動(dòng)癥的病癥，間接促進(jìn)認(rèn)知的完成和注意力的集中[2,3]。有關(guān)托莫西汀的藥動(dòng)學(xué)研究，國(guó)內(nèi)未見中國(guó)人體內(nèi)托莫西汀藥動(dòng)學(xué)研究的文獻(xiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)對(duì)口服鹽酸托莫西汀膠囊后在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程進(jìn)展研究。1儀器與材料1.2試藥鹽酸托莫西汀膠囊(每片含托莫西汀10g，批號(hào)：20220901，有效期至2022年8月，由海南某制藥廠提供);鹽酸托莫西汀對(duì)照品(美國(guó)Siga公司，批號(hào)：1004-0801002);內(nèi)標(biāo)物為鹽酸氟西汀(浙江埃森醫(yī)藥，批號(hào)：A0907)。甲醇(默克公司，色譜純);甲酸銨(美國(guó)Siga公司，質(zhì)譜純);甲酸(迪馬公司，色譜級(jí));碳酸氫鈉(廣州化學(xué)試劑廠，分析純);水為重蒸去離子水。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)溶液分別準(zhǔn)確稱取鹽酸托莫西廷鹽酸氟西汀對(duì)照品11.7g和11.4g(分別含托莫西廷氟西汀各10g)，分別置10L容量瓶中，用流動(dòng)相溶解定容至刻度，即配制成質(zhì)量濃度為1g·L-1的貯備液，貯存于4℃冰箱避光保存?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)前按試驗(yàn)所需稀釋成相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。另稀釋配置質(zhì)量濃度為3000μg·L-1的內(nèi)標(biāo)氟西汀流動(dòng)相溶液。2.2受試者選擇試驗(yàn)前，試驗(yàn)方案和知情同意書經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批同意后，受試者簽署知情同意書，并均進(jìn)展常規(guī)體檢和實(shí)驗(yàn)室檢查(尿常規(guī)、血常規(guī)、肝功能、腎功能、心電圖和胸透等)，合格者入選為受試者。有15名志愿者簽署知情同意書，經(jīng)全面體格檢查后，胸透、心電圖、血壓、血尿常規(guī)及肝腎功能等各項(xiàng)指標(biāo)均正常者12名入組，男女各半，年齡為19～27歲，平均(25±4)歲，身高160～178，平均(168±6)，體質(zhì)量50～62kg，平均(56±6)kg。試驗(yàn)后，受試者體格復(fù)查。受試期間1個(gè)月內(nèi)未服用任何其他藥物，且在1個(gè)月內(nèi)禁煙和禁酒。2.3給藥方案12名受試者禁食12h后，于試驗(yàn)日早晨7：30空腹開場(chǎng)試驗(yàn)。受試者一次性口服受試制劑20g，用200L溫開水送服，服藥4h后給予統(tǒng)一低脂標(biāo)準(zhǔn)餐。給藥后觀察受試者的反響，記錄受試者主訴的不良反響。2.4血樣采集每例受試者均于用藥前在前臂靜脈安置留置針抽血，用藥前采空白血4L，再分別于安置留置針給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24h分別采血3L/次，置肝素抗凝的試管中，3000r/in離心5in，取血漿，分兩份于-30℃下冰柜保存，待用。整個(gè)試驗(yàn)過程均在醫(yī)師和護(hù)士監(jiān)護(hù)下進(jìn)展，并于給藥后不同時(shí)間監(jiān)測(cè)受試者的反響，及時(shí)處理和記錄試驗(yàn)過程中發(fā)生的不良反響。試驗(yàn)期間禁用其他藥物及含咖啡因類飲料、煙和酒。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.5樣品測(cè)定2.5.3方法專屬性分別取6名受試者的空白血漿0.5L置10L的帶塞錐形玻璃離心管中，除不加內(nèi)標(biāo)外，按“2.5.2〞項(xiàng)依法操作，進(jìn)樣5μL，獲得空白血漿樣品的色譜圖，如圖1(A);將一定濃度的對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液參加空白血漿中，依同法操作獲得相應(yīng)的色譜圖1(B)，托莫西廷氟西汀的出峰時(shí)間分別約為1.24in和1.26in;取安康受試者給藥后搜集的血漿樣品，依同法操作，得色譜圖1()。結(jié)果說明，空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾托莫西汀及內(nèi)標(biāo)氟西汀的測(cè)定。2.5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和最低定量限確實(shí)證取空白血漿0.5L，分別參加質(zhì)量濃度為10、20、50、100、500、1000、5000、10000和15000μg·L-1的托莫西汀對(duì)照品溶液50μL，振蕩3s，使血漿藥物質(zhì)量濃度分別相當(dāng)于1、2、5、10、50、100、500、1000和1500μg·L-1，其余按“2.5.2〞項(xiàng)處理。經(jīng)HPL/S/S分析，以托莫西汀峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比(y)為縱坐標(biāo)，以血漿托莫西汀濃度與內(nèi)標(biāo)濃度之比(x)為橫坐標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為1/x2，得回歸方程為y=0.5821x-2.5814×10-4，r=0.9975(n=9)，說明血漿中托莫西汀質(zhì)量濃度在1～1500μg·L-1范圍呈良好的線性關(guān)系。血漿樣品托莫西汀定量下限質(zhì)量濃度為1μg·L-1(S/N14)，平行對(duì)5個(gè)質(zhì)量濃度為1μg·L-1的含藥血漿樣品處理后進(jìn)展色譜分析，其方法回收率為101.82%，RSD為4.96%。2.5.5回收率及精細(xì)度試驗(yàn)按“2.5.4〞項(xiàng)方法分別配制低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)和高濃度(1000g·L-1)的托莫西汀血漿溶液各15份，分為3批，每批5份，并與每批的標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)進(jìn)展，依“2.5.2〞項(xiàng)方法處理后取5μL進(jìn)樣，測(cè)定精細(xì)度，并計(jì)算質(zhì)控樣品的測(cè)得濃度，與配制濃度對(duì)照，求得方法回收率(見表1)。同法以空白血漿，除不加標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和內(nèi)標(biāo)外，按“2.5.2〞項(xiàng)方法處理后，再參加相應(yīng)濃度的托莫西汀和氟西汀，取5μL上清液進(jìn)樣，以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計(jì)算提取回收率。結(jié)果低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)、高濃度托莫西汀(1000μg·L-1)的提取回收率分別為84.78%、85.49%和86.04%。精細(xì)度和提取回收率見表1。表1回收率與日內(nèi)、日間精細(xì)度2.5.6穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.5.4〞項(xiàng)方法分別配制低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)、高濃度(1000μg·L-1)的質(zhì)控血漿樣品，每個(gè)濃度21份樣品分析，分為3組。分別考察了樣品經(jīng)室溫放置1h和24h，凍融1次和3次，-20℃凍存1、12、24d的穩(wěn)定性。中、高2個(gè)濃度樣品3種條件檢測(cè)結(jié)果的RSD均15%，低濃度樣品3種條件檢測(cè)結(jié)果的RSD均20%。2.5.7質(zhì)控樣品的監(jiān)控按“2.5.4〞項(xiàng)方法分別配制低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)、高濃度(1000μg·L-1)的托莫西汀血漿樣品置-20℃凍存?zhèn)溆茫思礊檠獫{質(zhì)控樣品。檢測(cè)每批血漿樣品前需做隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行檢測(cè)質(zhì)控樣品低、中、高3個(gè)濃度，每個(gè)濃度至少兩樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測(cè)試順序中;結(jié)果質(zhì)控樣品檢測(cè)結(jié)果其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏向均在15%內(nèi)(低濃度在20%)。2.6血漿樣品中藥物質(zhì)量濃度的測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算2.7不良反響情況12名受試者在試驗(yàn)過程中，均未出現(xiàn)不良反響，試驗(yàn)后進(jìn)展體格復(fù)查，胸透、心電圖、血壓、血尿常規(guī)及肝腎功能等各項(xiàng)指標(biāo)均正常。表212名安康志愿者給藥后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)3討論鹽酸托莫西汀膠囊人體藥動(dòng)學(xué)研究未見國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道。單次口服20g后T1/2約為4.55h，ax約為225.18μg·L-1，Tax為1.33h，個(gè)體差異大，可能與YP2D6存在個(gè)體差異有關(guān)，與文獻(xiàn)[1-3]報(bào)道相似，用藥時(shí)應(yīng)引起