1、食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素M族的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中黃曲霉毒素M1和M2（以下簡(jiǎn)稱AFT M1和AFT M2）的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，適用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)第二法為免疫親和層析凈化高效液相色譜法，適用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)第三法為試紙條法，適用于生鮮乳中AFT M1的測(cè)定。第一法 同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法2 原理試樣中的AFT M1和AFT M2用水和乙腈的混合溶液提取，上清液的濃縮液用磷酸鹽緩沖液稀釋后，經(jīng)免疫親和柱凈化，去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素

2、及碳水化合物等干擾物質(zhì)。凈化液經(jīng)液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。3 試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為優(yōu)級(jí)純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。3.1.2 甲醇（CH3OH）：色譜純。3.1.3 醋酸銨（CH3COONH4）。3.1.4 氯化鈉（NaCl）。3.1.5 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。3.1.6 磷酸二氫鉀（KH2PO4）。3.1.7 氯化鉀（KCl）。3.1.8 濃鹽酸（HCl）。3.1.9 氮?dú)猓∟2）：純度 99.9 %。3.1.10 石油醚（C2H2n+2）：沸程為30-603.2 試劑配制3

3、.2.1 5 mmol/L醋酸銨水溶液：稱取0.39 g醋酸銨，溶于1000 mL水中。3.2.2 乙腈-水溶液（25+75）：取250 mL乙腈加入750 mL水。3.2.3 乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500 mL乙腈加入500 mL甲醇。3.2.4 磷酸鹽緩沖溶液（以下簡(jiǎn)稱PBS）：稱取8.00 g氯化鈉，1.20 g磷酸氫二鈉（或2.92 g十二水磷酸氫二鈉），0.20 g磷酸二氫鉀，0.20 g氯化鉀，用900 mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.4，再加水至1000 mL。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 AFT M1標(biāo)準(zhǔn)品（C17H12O7 ，CAS：6795-23-9）：純度 98

4、%。3.3.2 AFT M2標(biāo)準(zhǔn)品（C17H14O7 ，CAS：6885-57-0）：純度 98 %。3.3.3 13C17- AFT M1同位素溶液（C17H14O7）：0.5 g/mL。注：在測(cè)定AFT M2含量時(shí)，可通過13C17- AFT M1同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（10 g/mL）：分別稱取AFT M1 和AFT M2 1 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg），分別用乙腈溶解并定容至100 mL。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中，在- 20 下避光密封保存。臨用前進(jìn)行濃度校準(zhǔn)（校準(zhǔn)方法參見附錄A.1）。3.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0 g/mL）：分別準(zhǔn)

5、確吸取10 g/mLAFT M1 和AFT M2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.00 mL于同一10 mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，得到1.0 g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)液。此溶液密封后避光4 保存，三個(gè)月有效。3.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（100 ng /mL）：準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0 g/mL）1.00mL至10 mL容量瓶中，乙腈定容。此溶液密封后避光4 下保存，三個(gè)月內(nèi)有效。3.4.4 50 ng /mL同位素內(nèi)標(biāo)工作液1（13C17- AFT M1）：取AFT M1同位素內(nèi)標(biāo)（0.5 g/mL）1 mL， 用乙腈稀釋至10 mL。在-20 下保存，供測(cè)定液體樣品時(shí)使用。3.4.5 5 ng /mL

6、同位素內(nèi)標(biāo)工作液2（13C17- AFT M1）：取AFT M1同位素內(nèi)標(biāo)（0.5 g/mL）100 L，用乙腈稀釋至10 mL。在 -20 下保存，供測(cè)定固體樣品時(shí)使用。3.4.6 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.4.3）50、100、200、500、800、1000L至10 mL容量瓶中，加入100 L 50 ng/mL的同位素內(nèi)標(biāo)工作液（3.4.4），用初始流動(dòng)相定容至刻度，配制AFT M1和AFT M2的濃度均為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 ng /mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。4 儀器和設(shè)備4.1 天平：感量0.01 g、0.001g和0.0

7、0001 g。4.2 水浴鍋：溫控50 2 。4.3 渦旋混合器。4.4 超聲波清洗器。4.5 離心機(jī)： 6000 轉(zhuǎn)/分。4.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.7 真空泵。4.8 氮吹儀。4.9 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：帶電噴霧離子源。4.10 圓孔篩：20目。4.11 50 mL具塞PVC離心管。4.12 玻璃纖維濾紙：GF/A 110 mm。4.13 250 mL玻璃分液漏斗。4.14 帶刻度的磨口玻璃試管：10 mL。4.15 刻度移液管：1.0 mL，5.0 mL。4.16 100 mL圓底燒瓶。4.17 50 mL一次性注射器（使用注射器筒部分）。4.18 一次性微孔濾頭：帶0.22 m微孔濾膜。

8、4.19 免疫親和柱：柱容量 100 ng。（柱容量驗(yàn)證方法參見附錄A.2）注：對(duì)于每個(gè)批次的親和柱在使用前需質(zhì)量驗(yàn)證。5 分析步驟使用不同廠商的免疫親和柱，在樣品上樣、淋洗和洗脫的操作方面可能略有不同，應(yīng)該按照說明書要求進(jìn)行操作。5.1 樣品提取5.1.1 液態(tài)乳、酸奶在50 mL離心管中稱取10 g經(jīng)混合均勻的試樣（精確到0.01 g），加入100 L 13C17- AFT M1內(nèi)標(biāo)溶液（3.4.4）振蕩混勻后靜置30min，加入5 mL乙腈，渦旋1 min，繼續(xù)加入10 mL乙腈，渦旋1 min，再加入10 mL乙腈，渦旋1 min。置于4 、6000 轉(zhuǎn)/min下離心10 min或經(jīng)玻

9、璃纖維濾紙過濾，將全部上清液或?yàn)V液轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至10 mL以下，用PBS稀釋至30 mL。5.1.2 乳粉、特殊膳食用食品在50 mL離心管中稱取1 g樣品（精確到0.001 g），加入100 L 13C17- AFT M1內(nèi)標(biāo)溶液（3.4.5）振蕩混勻后靜置30min，加入10 mL 50 熱水，渦旋混勻。如果乳粉不能完全溶解，將離心管置于50 的水浴中，將乳粉完全溶解后取出。待樣液冷卻至20 后，加入5 mL乙腈，渦旋1 min，繼續(xù)加入5 mL乙腈，渦旋1 min，再加入10 mL乙腈，渦旋1 min，置于4 、6000 轉(zhuǎn)/min下離心10 min或經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾，將

10、全部上清液轉(zhuǎn)或?yàn)V液移至圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至10 mL以下，用PBS稀釋至30 mL。5.1.3 奶油在50 mL離心管（4.21）中稱取 1 g樣品（精確到0.001 g），加入100 L 13C17- AFT M1內(nèi)標(biāo)溶液（3.4.5）振蕩混勻后靜置30min，加入8 mL石油醚，待奶油溶解，再加9 mL水和11 mL甲醇，振蕩30 min，將全部液體移至分液漏斗中。加入0.3 g氯化鈉充分搖動(dòng)溶解，靜置分層后，將下層移到圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至10 mL以下，用PBS稀釋至30 mL。5.1.4 奶酪在50 mL離心管（4.11）中稱取1 g已切細(xì)、過10目圓孔篩混勻樣品（精確到0.001

11、 g），加100 L 13C17- AFT M1內(nèi)標(biāo)溶液（3.4.5）振蕩混勻后靜置30min，加入1 mL水和18 mL甲醇，振蕩30 min，置于4 、6000 轉(zhuǎn)/min下離心10 min或經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾，將全部上清液或?yàn)V液轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2 mL以下，用PBS稀釋至30 mL。5.2 凈化5.2.1 免疫親和柱的準(zhǔn)備將50 mL注射器筒與親和柱的頂部相連。5.2.2 凈化免疫親和柱內(nèi)的液體放棄后，將上述樣液移至50 mL注射器筒中，調(diào)節(jié)下滴流速為1-3 mL/min。待樣液滴完后，往注射器筒內(nèi)加入10 mL水，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后，用真空泵抽干親和柱。脫

12、離真空系統(tǒng)，在親和柱下放置10 mL刻度試管，取下50 mL的注射器筒，加入22 mL乙腈（或甲醇）洗脫親和柱，控制1-3 mL/min下滴速度，收集全部洗脫液至刻度試管中，用真空泵抽干親和柱。在50 下用氮?dú)饩従彽貙⑾疵撘捍抵两?，用初始流?dòng)相定容至1.0 mL，渦旋30 s溶解殘留物，0.22 m濾膜過濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。注：全自動(dòng)（在線）或半自動(dòng)（離線）的固相萃取儀器可優(yōu)化操作參數(shù)后使用.5.3 液相色譜參考條件液相色譜柱：C18柱（柱長(zhǎng)100 mm，柱內(nèi)徑2.1 mm，填料粒徑1.7 m），或相當(dāng)者。流動(dòng)相：A相，5 mmol/L醋酸銨水溶液；B相，乙腈-甲醇（50+50）

13、。梯度洗脫：參見附錄A中的A.3。流速：0.3 mL/min。色譜柱柱溫：40 。進(jìn)樣體積：10 L。5.4 質(zhì)譜參考條件檢測(cè)方式：多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。離子源控制條件：參見附錄A.4。離子選擇參數(shù)見表1。液相色譜-質(zhì)譜圖和子離子掃描圖見附錄A.5。表1 質(zhì)譜條件參數(shù)化合物名稱母離子（m/z）定量子離子（m/z）碰撞能量（eV）定性子離子（m/z）碰撞能量（eV）離子化 方 式AFT M132927323258.923ESI+13C-AFT M13463172328824ESI+AFT M233127523260.922ESI+5.5 定性測(cè)定試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜

14、峰的保留時(shí)間相比較，變化范圍應(yīng)在2.5 之內(nèi)。待測(cè)化合物的定性離子的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比應(yīng)大于等于3（S/N 3），定量離子的重構(gòu)離子色譜峰的信噪比應(yīng)大于等于10（S/N 10）。每種化合物的質(zhì)譜定性離子必須出現(xiàn)，至少應(yīng)包括一個(gè)母離子和兩個(gè)子離子，而且同一檢測(cè)批次，對(duì)同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的兩個(gè)子離子的相對(duì)豐度比與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍。表2 定性時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度50 %20 至50 %10 %至20 %10 %允許相對(duì)偏差20 %25 %30 %50 %各檢測(cè)目標(biāo)化合物以保留時(shí)間和兩對(duì)離子（特征離子對(duì)/定量離子對(duì)）所對(duì)應(yīng)的LC-

15、MS/MS色譜峰面積相對(duì)豐度進(jìn)行定性。要求被測(cè)試樣中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間一致（一致的條件是偏差小于20 %），同時(shí)要求被測(cè)試樣中目標(biāo)化合物的兩對(duì)離子對(duì)應(yīng)LC-MS/MS色譜峰面積比與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的面積比一致。5.6 定量測(cè)定在5.3、5.4項(xiàng)液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析條件下，用系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.4.6）分別進(jìn)樣，以目標(biāo)物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)的系列濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，建立線性回歸方程，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。取5.2項(xiàng)下處理得到的待測(cè)溶液進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法計(jì)算待測(cè)液中目標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量濃度，按6項(xiàng)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量

16、。5.7 空白試驗(yàn)不稱取試樣，按5.1和5.2的步驟做空白實(shí)驗(yàn)。應(yīng)確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。5.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（3.4.6）由低到高濃度依次進(jìn)樣檢測(cè)，以相對(duì)峰面積-濃度作圖，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。6 分析結(jié)果的表述按式（1）計(jì)算AFT M1或AFT M2的殘留量。（1）式中：X試樣中AFT M1或AFT M2的含量，單位為微克每千克，g/kg；A根據(jù)試樣中AFT M1或AFT M2的色譜峰與對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)色譜峰的峰面積關(guān)系，經(jīng)計(jì)算所得的濃度，單位為納克每毫升，ng/mL；V樣品洗脫液的最終定容體積，單位毫升，mL；f樣液稀釋因子；m試樣的稱樣量，單位克，g；以重復(fù)性條件下

17、獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的算術(shù)平均值表示。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。其他本方法AFT M1檢出限為0.017 g/kg，定量限為0.05 g/kg；AFT M2檢出限為0.017 g/kg，定量限為0.05 g/kg。第二法 免疫親和層析凈化高效液相色譜法原理試樣中的AFT M1和AFT M2用水和乙腈的混合溶液提取，上清液的濃縮液用磷酸鹽緩沖液稀釋后，經(jīng)免疫親和柱凈化，去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物質(zhì)。凈化液經(jīng)液相色譜分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)。外標(biāo)法定量。試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為優(yōu)

18、級(jí)純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。10.1 試劑10.1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。10.1.2 甲醇（CH3OH）：色譜純。10.1.3 氯化鈉（NaCl）。10.1.4 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。10.1.5 磷酸二氫鉀（KH2PO4）。10.1.6 氯化鉀（KCl）。10.1.7 濃鹽酸（HCl）。10.1.8 氮?dú)猓杭兌?99.9 %。10.1.9 石油醚。10.2 試劑配制10.2.1 乙腈-水溶液（25+75）：取250 mL乙腈加入750 mL水。10.2.2 乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500 mL乙腈加入500 mL甲醇。10.2.3 磷酸鹽緩沖溶液（以

19、下簡(jiǎn)稱PBS）：稱取8.00 g氯化鈉，1.20 g磷酸氫二鈉（或2.92 g十二水磷酸氫二鈉），0.20 g磷酸二氫鉀，0.20 g氯化鉀，用900 mL水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.4，再加水至1000 mL。10.3 標(biāo)準(zhǔn)品10.3.1 AFT M1標(biāo)準(zhǔn)品（C17H12O7 ，CAS：6795-23-9）：純度 98 %。10.3.2 AFT M2標(biāo)準(zhǔn)品（C17H14O7 ，CAS：6885-57-0）：純度 98 %。10.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制10.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（10 g/mL）：分別稱取AFT M1 和AFT M2 1 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg），分別用乙腈溶解并定容至100

20、mL。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中，在- 20 下避光密封保存。臨用前進(jìn)行濃度校準(zhǔn)（校準(zhǔn)方法參見附錄A.1）。10.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0 g/mL）：分別準(zhǔn)確吸取10 g/mLAFT M1 和AFT M2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.00 mL于同一10 mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，得到1.0 g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)液。此溶液密封后避光4保存，三個(gè)月有效。10.4.3 100 ng /mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（AFT M1和AFT M2）：準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0 g/mL）1.0 mL至10 mL容量瓶中，乙腈定容。此溶液密封后避光4 下保存，三個(gè)月內(nèi)有效。10.4.4 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)

21、確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液（10.4.3）50、100、200、500、800、1000L至10 mL容量瓶中，用初始流動(dòng)相定容至刻度，AFT M1和AFT M2的濃度均為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 ng /mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。11 儀器和設(shè)備11.1 天平：感量0.01 g、0.001g和0.00001 g。11.2 水浴鍋：溫控50 士2 。11.3 渦旋混合器。11.4 超聲波清洗器。11.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速 6000 轉(zhuǎn)/min。11.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。11.7 真空泵。11.8 氮吹儀。11.9 圓孔篩：20目。11.10 液相色譜儀（帶熒光檢測(cè)器）。11.

22、11 50 mL具塞PVC離心管。11.12 玻璃纖維濾紙：GF/A 110 mm。11.13 250 mL玻璃分液漏斗。11.14 帶刻度的磨口玻璃試管：10 mL。11.15 刻度移液管：1.0 mL，5.0 mL。11.16 100 mL圓底燒瓶。11.17 50 mL一次性注射器（使用注射器筒部分）。11.18 一次性微孔濾頭：帶0.22 m微孔濾膜。11.19 免疫親和柱：柱容量 100 ng。（柱容量驗(yàn)證方法參見附錄A.2）注：對(duì)于每個(gè)批次的親和柱在使用前需質(zhì)量驗(yàn)證。12 分析步驟使用不同廠商的免疫親和柱，在樣品上樣、淋洗和洗脫的操作方面可能略有不同，應(yīng)該按照說明書要求進(jìn)行操作。1

23、2.1 試液提取除不加同位素內(nèi)標(biāo)溶液，方法同5.1。凈化除不加同位素內(nèi)標(biāo)溶液，方法同5.2。注：全自動(dòng)（在線）或半自動(dòng)（離線）的固相萃取儀器可優(yōu)化操作參數(shù)后使用.12.3 液相色譜參考條件液相色譜柱：C18柱（柱長(zhǎng)150 mm，柱內(nèi)徑4.6 mm；填料粒徑5 m），或相當(dāng)者。流動(dòng)相：A相：水，B相：乙腈-甲醇（3.3.3）。等梯度洗脫條件：A：70 %，B：30 %。流速；1.0 mL.min-1。色譜柱柱溫：40 。進(jìn)樣量：50 L。液相色譜圖見附錄B-112.4 測(cè)定12.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 將系列標(biāo)準(zhǔn)溶液由低到高濃度依次進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。12.4.2

24、定量測(cè)定待測(cè)樣液中的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)重新按5.1和5.2進(jìn)行處理后再進(jìn)樣分析。12.4.3 空白試驗(yàn)不稱取試樣，按12.1和12.2的步驟做空白實(shí)驗(yàn)。確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。13 計(jì)算結(jié)果 按式（2）計(jì)算AFT M1或AFT M2的殘留量。（2）式中：X試樣中AFT M1或AFT M2的含量，單位為微克每千克，g/kg；A試樣中AFT M1或AFT M2的色譜峰相對(duì)峰面積對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)AFT M1或AFT M2的濃度，單位納克每毫升，ng/mL；V樣品洗脫液的最終定容體積，單位毫升，mL；f樣液稀釋因子；m試樣的稱樣量，單位克，g；以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)X

25、X果的算術(shù)平均值表示。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。15 其他本方法AFT M1檢出限為0.017 g/kg，定量限為0.05 g/kg；AFT M2檢出限為0.017 g/kg，定量限為0.05 g/kg。第三法 試紙條法16 XX向酶聯(lián)免疫法16.1 原理應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)原理，樣品中的AFT M1與定量特異性酶標(biāo)抗體反應(yīng)，多余的抗體則與酶標(biāo)板內(nèi)的包被抗原結(jié)合，與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生有色斑點(diǎn)。斑點(diǎn)的顯色強(qiáng)度與AFT M1的含量成反比。16.2 試劑和材料 按照試劑盒說明書所述，配制所需溶液。配制溶液所需試劑均為分析

26、純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。所用商品化的XX向酶聯(lián)免疫試劑盒需按照附錄C中C.2所述方法驗(yàn)證后方可使用16.3 儀器和設(shè)備16.3.1 酶聯(lián)免疫檢測(cè)加熱器，455。16.3.2 XX向酶聯(lián)免疫檢測(cè)讀數(shù)儀。16.3.3 測(cè)定時(shí)所要求的其他儀器。16.4 分析步驟 取100 g生鮮乳試樣，搖勻后按XX向酶聯(lián)免疫說明書所述方法對(duì)樣品進(jìn)行定性檢測(cè)。16.5 分析結(jié)果的表述16.5.1 目測(cè)判讀結(jié)果 試樣點(diǎn)的顏色淺于質(zhì)控點(diǎn)，判定檢測(cè)結(jié)果為陽性。16.5.2 XX向酶聯(lián)免疫檢測(cè)讀數(shù)儀判讀結(jié)果 讀數(shù)1.05，顯示Negative，判定檢測(cè)結(jié)果為陰性； 讀數(shù)1.05，顯示Positive，判定檢測(cè)

27、結(jié)果為陽性。16.5.3 結(jié)果確認(rèn)本方法為篩選法。利用本方法測(cè)得的陽性樣品必須經(jīng)過方法一或方法二進(jìn)行確認(rèn)。16.6 其他 生鮮乳中的檢出限是0.5 g/kg。17 試紙條掃描法17.1 原理應(yīng)用AFT M1與特異性抗體之間的親合反應(yīng)，將樣品中的AFT M1與膠體金標(biāo)記的抗體結(jié)合。多余的膠體金標(biāo)記的抗體與固定在試紙條顯色區(qū)域中的AFT M1結(jié)合，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。經(jīng)試紙條掃描讀數(shù)儀讀數(shù)，試紙上的顯色強(qiáng)度與AFT M1的含量成反比。17.2 試劑和溶劑按照試紙條說明書所述，配制所需溶液。配制溶液所需試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。所用商品化的試紙條需按照附錄C中C.2所述方法驗(yàn)證后

28、方可使用。17.3 儀器和設(shè)備17.3.1 加熱器，可設(shè)定在35。17.3.2 試紙條掃描讀數(shù)儀。17.3.3 測(cè)定時(shí)所要求的其他儀器。17.4 分析步驟取100 g生鮮乳試樣，搖勻后按試紙條說明書所述方法對(duì)樣品進(jìn)行定量檢測(cè)。17.5 分析結(jié)果的表述17.5.1 結(jié)果測(cè)定試紙條上方的控制線（C）顯現(xiàn)，說明試紙條有效。試紙條下方的檢測(cè)線（T）為檢測(cè)結(jié)果。無效結(jié)果: 如果試紙條沒有顯現(xiàn)控制線，說明本次檢測(cè)無效，應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢。有效結(jié)果: 顯現(xiàn)兩條線，線顯色的程度取決于待檢物濃度，可使用試紙條讀數(shù)儀進(jìn)行判讀。17.5.2 結(jié)果確認(rèn)本方法為篩選法。應(yīng)用本方法測(cè)定的陽性樣品必須經(jīng)過方法一或方法二進(jìn)行確認(rèn)。1

29、7.6 其他 生鮮乳中的檢出限是0.1 g/kg。附錄AA.1 AFT M1、AFT M2的標(biāo)準(zhǔn)濃度校準(zhǔn)方法用苯-乙腈（9+1）或乙腈溶液配置8-10 g/mL的AFT M1、AFT M2的標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)下面的方法，在最大吸收波段處測(cè)定溶液的吸光度，確定AFT M1、AFT M2的實(shí)際濃度。用分光光度計(jì)在340 nm370 nm處測(cè)定，扣除溶劑的空白本底，讀取標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值。在接近360 nm最大吸收波段max處，測(cè)得吸光度值為A，根據(jù)式（1）計(jì)算出濃度值（1）式中：A在max處測(cè)得的吸光度值；Mg/mol，AFT M1摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾（g/mol）；AFT M1、AFT M2的吸光系數(shù)，單位為平方米每摩爾（m2/mol）。表A.1-1 AFT M1的摩爾質(zhì)量及摩爾吸光系數(shù)黃曲霉毒素名稱摩爾質(zhì)量（g/mol）溶劑摩爾吸光系數(shù)（m2/mol）AFT M1328苯-乙腈（9/1，v/v）18815乙腈19000AFT M2330乙腈21400A.2 免疫親和柱的柱容量驗(yàn)證方法柱容量驗(yàn)證：在30 mL的PBS中加入300 ng AFT M1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，充分混勻。分別取同一批次3根免疫親和柱，每根柱的