1、子宮內(nèi)膜癌子宮內(nèi)膜癌、MLDMLD 的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系的關(guān)系 作者：董莉，黎衛(wèi)平，閆文靜，吳素香 【摘要】【摘要】 目的 探討子宮內(nèi)膜癌組織中血管內(nèi)皮生長因子 D（）和微淋巴管密度（MLD）的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 選取子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本 53例，正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本 20 例，以淋巴管特異性標(biāo)記物標(biāo)記淋巴管并計數(shù) MLD，運用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測和 MLD 在子宮內(nèi)膜癌、正常內(nèi)膜組織中的表達(dá)。結(jié)果 和 MLD 在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率及密度值(39/53，23.547.84)均顯著高于正常內(nèi)膜組織(5/20，10.481.62)(P0.05)；兩者在淋巴結(jié)

2、轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率及密度值(33/38，32.053.27)也明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(6/15，20.234.57)(P0.05)，在臨床分期的表達(dá)中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2) 子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)與 MLD 存在相關(guān)性，相關(guān)系數(shù) rs=0.398(P0.05)，陽性組 MLD(31.172.82)較陰性組 MLD(16.753.63)顯著增高(P0.05 respectively), but was significantly related to correlation with MLD (rs=0.398, P0.05). The MLD of the positive grou

3、p (16.753.63)(P0.05). Conclusion The positive expression of MLD and it may induce lymphangiogenesis and promote the lymph node valuable index in evaluating diagnosis, treatment and prognosis of endometrial carcinoma. Key words：Endometrial carcinoma; Vascular endothelial growth factor D; Microlymphat

4、ic density; Lymph node metastasis 子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，約占女性生殖道惡性腫瘤的 20%30%，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢1。子宮內(nèi)膜癌主要通過淋巴道轉(zhuǎn)移且直接與其預(yù)后相關(guān)。大量實驗研究表明，不但是重要的腫瘤淋巴管生成因子，而且還能促進(jìn)實驗性腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本實驗擬通過檢測子宮內(nèi)膜癌中和 MLD 的表達(dá)，判斷兩者在子宮內(nèi)膜癌淋巴管形成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用，為子宮內(nèi)膜癌的診治及預(yù)后判斷提供新的途徑。 1 1 資料與方法資料與方法 1.1 一般資料 收集蘭州軍區(qū)總醫(yī)院、甘肅省婦幼保健院 2002 年 10 月2007 年 4 月間手術(shù)切除、HE 常規(guī)病

5、理診斷的子宮內(nèi)膜癌石蠟包埋標(biāo)本 53 例，患者年齡2769 歲，中位年齡 53 歲。其中高分化 19 例，中分化 23 例，低分化 11 例；無肌層浸潤 12 例，淺肌層浸潤（1/2 肌層）34 例，深肌層浸潤（1/2 肌層）7 例；按 1988 年 FIGO 臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：期 25 例，期 17 例，期 11 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 38 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 15 例。同期選擇正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本 20 例。 1.2 試劑 為兔抗人多克隆抗體（濃縮型），購自武漢博士德生物工程公司；為鼠抗人單克隆抗體，試劑，DAB 顯色劑，PBS 緩沖液及抗原修復(fù)液均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。 1.3 方法 標(biāo)本以 1

6、0%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度 4m。所有標(biāo)本均行常規(guī) HE 染色，病理組織學(xué)確診。石蠟包埋組織脫蠟水化；微波修復(fù) 510min，重復(fù)一次，自然冷卻至室溫，3% H2O2、37孵育 10min，滴加一抗，37孵育 60min，PBS 沖洗；滴加6000 試劑，37孵育 15min，PBS 沖洗；DAB 顯色。設(shè)陽性對照（試劑公司提供的陽性片）和陰性對照（PBS 代替）各 1張。 1.4 結(jié)果判定 1.4.1 染色判斷標(biāo)準(zhǔn) 陽性物質(zhì)主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿中。按 Shimizu 等2方法，陽性強度按無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別記為 03 分；著色陽性面積按無著色、著色2/3 分別記

7、為 03 分，兩項記分之和判斷結(jié)果：3 分為(-)，3 分為(+)，4 分為(+)，56 分為(+)。 1.4.2 MLD 計數(shù) 按 Masakazu 等3報道的方法，先在低倍視野下觀察切片，確定淋巴管密度最高區(qū)域，再在 200 倍視野下選取最豐富的區(qū)域記數(shù) 5 個視野毛細(xì)淋巴管數(shù)，計算每個區(qū)域的微淋巴管數(shù)。 1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均用 SPSS 12.0 統(tǒng)計程序包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以 =0.05 作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義的檢驗標(biāo)準(zhǔn)。采用檢驗、t 檢驗及 Spearman 等級相關(guān)檢驗。 2 2 結(jié)果結(jié)果 2.1 子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)和 MLD VEG陽性物質(zhì)主要位于瘤細(xì)胞胞漿。在子宮內(nèi)膜癌組

8、織、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率均顯著高于正常內(nèi)膜組織及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P 均0.05)；MLD 在子宮內(nèi)膜癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的密度值也明顯高于正常內(nèi)膜組織及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P 均0.05）。而在不同臨床分期中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，見表 2。表 2 子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系 2.2 子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)強度與 MLD 的關(guān)系 子宮內(nèi)膜癌組織陽性組 MLD(31.172.82)較陰性組MLD(16.753.63)顯著增高(P0.05)，MLD 和表達(dá)強度呈正相關(guān)關(guān)系，隨表達(dá)的增強逐漸增高，相關(guān)系數(shù) rs=0.398(P0.05)，見表 3。表3 子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)強度與 ML

9、D 的關(guān)系 3 3 討論討論 大量臨床病理研究證實，在多種人類腫瘤中，表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；高水平表達(dá) VE的腫瘤患者較低水平表達(dá)患者的預(yù)后差4。相對而言，對于的表達(dá)及與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的報道不多，且結(jié)論存在分歧。是 1998 年在核酸數(shù)據(jù)庫中通過同源性搜索發(fā)現(xiàn)的第二個淋巴管生長因子5。可與、結(jié)合，在脈管發(fā)育上具有雙重作用：既可誘導(dǎo)血管生成(主要由介導(dǎo))又可誘導(dǎo)淋巴管生成( 主要由介導(dǎo))，其中與結(jié)合可促進(jìn)淋巴管生成。與的胞外區(qū)域高度特異性結(jié)合,使受體自身磷酸化而激活細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路，刺激淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，誘導(dǎo)淋巴管生成參與體內(nèi)多種病理生理過程。Stacker 等6報道，可在小

10、鼠腫瘤模型中誘導(dǎo)腫瘤淋巴管生成，同時腫瘤也表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)移率和生長率，且可通過誘導(dǎo)淋巴管新生加速腫瘤細(xì)胞向淋巴道播散。Onogawa 等7報道 ，高表達(dá)與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良顯著相關(guān)。在胃癌、卵巢癌中也發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，是腫瘤患者存活的獨立預(yù)后因子。但是也有一些研究得出不同的結(jié)論，如在肺腺癌8、頭頸部鱗癌9等，表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，甚至低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。推測可能是因為不同腫瘤中決定腫瘤轉(zhuǎn)移的主要因素不同，而且前體的蛋白水解程度和的表達(dá)方式也有差別，同時不同腫瘤自身生長產(chǎn)生不同的物理壓力也會對淋巴管生成起不同的阻礙作用。我們的實驗結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中陽性表達(dá)

11、率(73.58%)明顯高于正常內(nèi)膜組織(25.00%)，的這種表達(dá)提示其在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者的年齡、組織分化程度、肌層浸潤深度無關(guān)，而與臨床分期密切相關(guān)，其表達(dá)隨臨床分期升高而逐漸增高，表明臨床分期越晚侵襲性越強，的表達(dá)越強，淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率就越高。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，的陽性表達(dá)率(86.84%)明顯強于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(40.00%)，表明的高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。檢測可作為臨床判斷子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)行為及預(yù)后的重要參考指標(biāo)。 目前，腫瘤 MLD 與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系的研究受到人們的高度關(guān)注。 在乳腺癌的研究中觀察到乳腺癌淋巴管密度增加

12、與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，且 MLD 越高，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率越大10。在結(jié)腸癌的研究中也有相似報道11，癌周淋巴管密度升高與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管侵犯、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。本實驗運用單克隆抗體標(biāo)記淋巴管，是分子量為40kD 的氧連接型唾液酸糖蛋白，經(jīng)過組織超微結(jié)構(gòu)和其他淋巴管標(biāo)記物證實，只存在于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上，此抗體對淋巴管內(nèi)皮具有很強的特異性和敏感性12。本實驗結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 MLD(32.053.27)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 MLD(20.234.57)，推測子宮內(nèi)膜癌淋巴管密度增加是其淋巴道轉(zhuǎn)移過程中的一個重要步驟，是影響淋巴道轉(zhuǎn)移的重要因素。其機制可能為腫瘤內(nèi)部淋

13、巴管增殖擴(kuò)張及密度升高，增加了瘤細(xì)胞與淋巴管內(nèi)皮接觸面積13，使得進(jìn)入淋巴循環(huán)的瘤細(xì)胞數(shù)目增多。MLD 的檢測可作為預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。 有報道發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中，隨癌細(xì)胞表達(dá)強度的增加，其癌組織內(nèi)的淋巴管密度也明顯增加14 。在結(jié)腸癌的研究中亦有相似報道15，淋巴管密度的增加與癌細(xì)胞表達(dá)增高呈正相關(guān)。本實驗結(jié)果顯示，陽性組較陰性組 MLD 顯著增高，MLD 隨表達(dá)的增強具有增高的趨勢，兩者表達(dá)呈正相關(guān)，從而表明兩者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移中可能均是很重要因素。推測與 MLD 在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)可能與促進(jìn)腫瘤增生及淋巴管生成相關(guān)聯(lián)。因此，在此領(lǐng)域的繼續(xù)研究不但可能會進(jìn)一步揭示和 MLD 在子

14、宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用機制，而且可通過對兩者的抑制為防治子宮內(nèi)膜癌提供新的思路和措施。 【參考文獻(xiàn)】【參考文獻(xiàn)】 1 謝虹.子宮內(nèi)膜癌發(fā)病相關(guān)因素的分析J.臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,200 2 Shimizu M,Saitoh Y,Itoh H.Immunohistochemical staining of Haras oncogene product in normal,benign,and malignant human pancreatic 3 Ohno M,Nakamura T,Kunimoto Y,et al.Lymphagenesis correlates with cance

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16、prognosis of patients with colorectal carcinomaJ. Cancer Sci,2004,95（1） 8 Niki T,Iba S,Tokunou M,et al. Expression of vascular endothelial growth factors A, B, C, and D and their relationships to lymph node status in lung adenocarcinomaJ. Clin Cancer Res,2000, 6(6): 2 endothelial growth factor family members in head and neck squamous cell carcinoma correlates with lymph node metastasisJ. 10何建軍，任予，王柯.乳腺癌周微淋巴管密度與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究J.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志 11方義湖，黃瓊，鄧紅，等.微淋巴管和微血管密度對結(jié)腸癌