1、短串聯重復系列在胎兒性別鑒定中的應用Y 染色體大部分不與 X 染色體重組， 這些非重組區只 能由父親傳給兒子。 現已發現了一些 Y 染色體特異短串聯重 復序列( Y chromosome specific short tandem repeat ，簡稱 Y 染色體特異STR),為研究群體親緣關系提供了新型的遺傳 標記來源 1-2 。因此，檢測孕婦外周血中是否存在某些 Y 染 色體特異重復系列就可能預測胎兒性別，這為胎兒伴性遺傳 病的風險估計提供可能，為優生優育提高人口質量有重要意 義。筆者對 20 位孕婦及其丈夫外周血漿進行 Y 染色特異短 串聯重復系列的檢測，將預判結果與產后隨訪結果比較，旨

2、 在探索一種簡便可靠的早期胎兒性別鑒定方法。1 材料與方法1.1 模板 DNA 片段提取從 20 名孕婦及其丈夫抽取外周血 5 mL ，EDTA-K2 抗凝， 4C低溫離心分離血漿，以蔗糖為介質進行密度梯度離心， 然后純化 DNA 并配成一定濃度范圍。1.2 實時熒光 PCR 檢測 Y 染色體特異短串聯重復系列 擴增的特異短串聯重復系列見表 1，引物及探針由美國Promega公司生產提供。總反應體積為25卩L,含有1X PCR 緩沖液(10 mmol/L Tris-HCI , 50 mmol/L KCI ), 100 卩 mol/LdNTP , 1.5 mmol/L MgCI2 ,0.4 卩

3、mol/L 引物，和 5U TaqDNA 聚合酶，每個反應里有提取DNA 5卩L,在Gene Amp 9700進行熱循環，條件如下：起始變性溫度T為90 C 10 min ,接下來進行 30個循環，90C 30 s, 58C 15 min，和72C 15 s,最終60C延伸1 min。每個血漿樣本進行測試2次，雙蒸水作為空白對照。2 結果20 例孕婦標本查出有 DYS19 產物 9 例, DYS389 產物12 例, DYS390 產物 12 例, DYS393 產物 10 例,孕婦中擴 增到的短串聯重復系列在丈夫標本內都檢測到。根據檢測到 其中一種系列者為男性標準, 20 例孕婦有 13 例

4、懷男性胎兒, 其結果與產后隨訪完全一致。見表 2。3 討論目前有 200 多種伴性遺傳病,杜絕或減少遺傳病患兒的 出生是關系到家庭幸福與社會人口質量的重要問題。對胎兒 進行早期性別鑒定,對有患病風險者進行人工終止妊娠是減 少此類患兒發生重要手段。目前關于胎兒性別鑒定的方法有 多種。它們存在各種各樣的缺陷,有的要求妊娠時間過長, 實行終止妊娠手術給孕婦帶來身體上和精神上負擔過大；有 的標本取材較難有一定的風險,或實驗時間過長不方便患 者；有的準確度尚不能達到臨床要求。筆者以孕婦和其丈夫 外周血漿為標本,采用實時熒光 PCR 技術進行 Y 染色體特異重復序列分析，基本克服了以上諸多缺點現已有研究發

5、現， 母 -胎之間存在微量血液交換， 母親體 內存在極少的胎兒紅細胞和核酸片段，胎兒來源的核酸片段 較母親自身的片段短 3-4 。所以，通過密度梯離心技術可以 濃集核酸的同時也可以區分不同來源的核酸，可以得到更純 的胎兒 DNA 模板。實時熒光 PCR 技術操作簡便，封閉操作 污染少，背景干擾小，結果判斷客觀。 Y 染色體短串聯重復 系列只能由父傳給兒子，所以本方法特異性好，同時串聯重 復系列備份多，所以較其他系列更易得到擴增產物，加之測 定多個短串聯重復序列，使得方法靈敏度較高。以父親血漿 標本擴增結果作為對照，防止親代不存在所選特異短串聯重 復系列所致假陰性的可能。本研究結果顯示，懷男性胎兒孕 婦查出 Y 染色體短串聯重系列數平均為 3.31±0.63，4 種或 任何 3 種組合短串聯重復系列至少檢出其中一種的概率為 100%（ 13/13），即準確度為 100%。這說明孕婦外周血中確 實存在胎兒核酸片斷，以此模板擴增性別決定基因進行胎兒 性別鑒定是完全可行。但不同個體檢出的系列有微小差別， 這可能是因為短串聯系列在群體間存在突變5 ，此突變對性別判斷的影響可被多重 PCR 檢測多個短串聯重復系列所克