1、項目二十二變態反應的檢驗技術一變態反應的類型及檢驗原則變態反應（allergy）是由免疫炎癥或其他免疫應答機制所致的組織損傷或功能障礙，也稱為超敏反應（hypersensitivity）。誘發變態反應的抗原稱為變應原，可以是完全抗原，也可以是半抗原；可以是外來抗原，也可以是自身抗原。自身抗原引起的病理狀態又稱自身免疫病。按照發生機制的不同，變態反應可分為4型（表16-1）。表16-1 變態反應的分類比較型別別名發生機制主要相關疾病型即刻型、反應素型、過敏反應IgE/肥大細胞和嗜堿性粒細胞介導的血管和平滑骨反應支氣管哮喘、藥物過敏蕁麻診、過敏性鼻炎、過敏性休克等型細胞毒型，細胞結合抗原型IgG，

2、IgM/補體或粒細胞介導的靶細胞溶解和吞噬等新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血、特發性血小板減少性紫癜等型免疫復合物型免疫復合物/補體介導的組織炎癥血清病、皮膚血管炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等型遲發型（細胞介導型）超敏反應TH細胞介導的浸潤性炎癥接觸性皮炎、移植排斥反應、結核病等（一）型變態反應誘導型變態反應的抗原多是外源性的，例如花粉、塵螨、青霉素、食品等，可經呼吸道、消化道或皮膚等途徑進入機體，刺激機體產生IgE或IgG4，結合到肥大細胞和嗜堿性粒細胞上，使宿主進入致敏狀態。變應原再次進入機體時，可與細胞表面的IgE或IgG4結合，誘導細胞脫顆粒，釋放炎癥介質，引起一定部位的血管和

3、平滑肌反應。相關疾病有：支氣管哮喘、過敏性鼻炎、過敏性胃炎、蕁麻疹、過敏性休克等。型變態反應發生迅速，臨床常見的嚴重病例是青霉素引起的過敏性休克，如不及時搶救患者會很快死亡。但型變態反應一般不引起組織損傷，所以刺激因素解除后康復也快。型變態反應的檢驗有多種方法：皮膚試驗，例如青霉素皮試；激發試驗，例如支氣管激發試驗；血清IgE測定。型變態反應的臨床診斷并不困難，實驗室檢查的主要目是明確過敏原，以采取適當的回避措施，或者必要時進行特異性脫敏治療。（二）型變態反應型變態反應涉及的抗原比較復雜，藥物、病毒或自身抗原都可成為變應原，刺激機體產生IgG或IgM類抗體，抗體可特異性地結合到位于細胞表面的抗

4、原上，活化補體、溶解靶細胞、誘導粒細胞浸潤及吞噬作用。涉及的疾病有新生兒溶血癥、自身免疫性血性貧血、特發性血小板減少性紫癜、重癥肌無力、部分腎小球腎炎、肺出血腎炎綜合征等。少數情況下，某些抗體與靶細胞結合可刺激靶細胞興奮，導致非常特殊的效果。例如抗體促甲狀腺素受體的抗體可使甲狀腺細胞過度分泌甲狀腺素而引起甲狀腺功能亢進；有些抗體誘導ADCC作用引起慢性淋巴細胞性甲狀腺素等。這兩型特殊的型變態反應曾被命名為型和型變態反應。型變態反應的檢驗主要是針對引起反應的特異性抗體；但型變態反應主要涉及血液系統疾病和自身免疫病，有關內容參見血液學檢驗教材和本書第二十五章。（三）型變態反應型變態反應的抗原多是蛋

5、白質分子，刺激機體產生大量IgG和IgM類循環抗體，抗原與抗體結合形成的免疫復合物（immunecomplex，IC）在一定條件下可沉淀于局部組織，激活補體引起炎癥反應。涉及的疾病有血清病、結締細胞病及局部Arthus反應等。型變態反應的檢驗主要是檢測循環免疫復合物或組織固定的免疫復合物；還可進一步檢測免疫復合物中的抗體特異性；有時候也可用皮膚試驗進行測定。（四）型變態反應型變態反應是細胞免疫介導的炎癥，沒有抗體和補體參與，發生較為緩慢，所以又稱為遲發型超敏反應（DTH）。涉及的疾病有接觸性皮炎、結核病、移植排斥性反應等。型變態反應的檢驗可從多方面進行。要以用促有絲分裂原或結核菌素檢測T細胞的

6、敏感狀態；也可用抗原檢測機體的特異性致敏狀態；還可通過檢測細胞因子或者皮膚試驗的辦法進行檢驗。二 動物實驗性過敏反應豚鼠過敏反應(Anaphylactic hypersensitivity of guinea-pig)【實驗原理】豚鼠過敏反應屬于型變態反應。先給動物注射小劑量異種蛋白，經過一定的潛伏期，動物處于致敏狀態。當第二次用較大劑量的相同抗原注射時，即激活肥大細胞和嗜堿性粒細胞脫顆粒釋放多種生物活性介質，使動物迅速產生嚴重的過敏反應及至過敏性休克或死亡。【試劑和器材】1動物體重200g左右的健康豚鼠。2馬血清、雞蛋清。3無菌注射器、針頭、酒精棉球等。【步驟和方法】1取豚鼠2只，經腹腔或皮

7、下注射10%馬血清(用生理鹽水稀釋)0.1ml。223周后，在上述2只豚鼠心臟內注射，一只注射馬血清原液(不稀釋)，另一只注射雞蛋清，各2ml。 3注射后數分鐘內密切觀察其反應現象。 【結果判定】注射馬血清的豚鼠出現煩躁不安、抓鼻、聳毛、咳嗽、打噴嚏、氣急、呼吸困難、痙攣性跳躍、大小便失禁、站立不穩等現象，重者在數分鐘內死亡。將死亡豚鼠解剖，可見肺臟極度氣腫，脹滿整個胸腔。由于動物個體反應性不同，有的反應較輕，可幸免死亡。如果再注射馬血清也不出現反應，此稱為脫敏狀態。但脫敏狀態是暫時的，大約2周后又處于致敏狀態。注射雞蛋清的豚鼠不出現任何反應。【注意事項】心臟內注射時，要固定好動物，以免劃破心

8、臟；當見到注射器內有回血時再注入抗原。【方法評價】豚鼠過敏試驗是一個經典的動物過敏性休克試驗，方法簡單、重復性較好、穩定、過敏現象明顯。【臨床意義】豚鼠過敏反應現象與人類過敏性休克反應相似。通過試驗加深學生對型變態反應現象及發病機理的理解，提高對人類過敏反應防治重要性的認識。另外，也可用于抗過敏藥物的篩選。【思考題】1上述試驗的兩只豚鼠為什么會出現完全不同的反應現象？2型變態反應是如何發生的？ 四 血清總IgE的測定ELISA雙抗體夾心法(Total serum IgE assay) 【實驗原理】 將特異性羊抗人IgE抗體包被固相載體，然后與待檢血清中IgE結合，洗滌后再加入酶標羊抗人IgE抗

9、體，經洗滌，加底物顯色，其吸光度值與樣品中IgE含量成正比。待檢血清IgE的含量可從標準IgE測定制作的標準曲線上查得。【試劑和器材】1標本待檢血清2羊抗人IgE純化抗體(包被用)。3羊抗人IgE-HRP 用方陣滴定法確定最適濃度。4IgE標準參考品混合人血清，經WHO國際IgE標準參考品標定IgE含量。 5底物緩沖液取0.1mol/L Na2HPO4·12H2O(35.8g/L) 5.14ml、0.05mol/L檸檬酸(10.5g/L) 4.86ml，混勻，加入鄰苯二胺(OPD)4mg，置棕色小瓶中，臨用時加30% H2O2 4.0l，混勻。6包被液pH9.5 0.05mol/L

10、CB (Na2CO3 1.59g、NaHCO3 2.93g、NaN3 0.2g，加蒸餾水至1000ml)。7稀釋液pH7.4 0.02mol/L Tris-HCl緩沖液(Tris 2.42g、1mol/L HCl 13ml，加蒸餾水至1000ml)。 8洗滌液含0.1% Tween-20的pH7.4 0.02mol/L Tris-HCl緩沖液。 9終止液2mol/L H2SO4。 10器材溫箱(或水浴箱)、酶標測定儀、酶標反應板、微量加樣器、小吸頭等?！静襟E和方法】1包被將羊抗人IgE純化抗體用包被液稀釋成10g/ml，加到酶標反應板各孔中，每孔200l，加蓋放4 24h。次日用洗滌液洗滌3次

11、，每次3min(下同)。甩干。2加樣A排孔依次加入連續倍比稀釋的IgE標準參考品200l(濃度為200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05IU/ml)。B排孔依次加入1:10、1:100的待檢血清200l，各設兩個復孔。同時設陰性、陽性血清對照，各加200l；空白對照加入稀釋液200l。加蓋置37 2h。洗滌，甩干。3加酶標抗體 每孔加已稀釋的羊抗人IgE-HRP 200l，加蓋置372h。洗滌，甩干。4加底物每孔加底物液200l，置37暗處20min。5終止反應 每孔加終止液50l。6測定結果 測定各孔A492值。 圖4-1

12、IgE標準曲線【結果判定】以標準參考品IgE含量(IU/ml)為橫對數坐標，以各濃度的A值為縱算術坐標，在半對數坐標紙上繪制標準曲線(圖4-1)。由標準曲線查出樣品中IgE的相對含量，再乘以稀釋倍數，即為樣品中IgE的含量。IgE 1 IU=2.4ng 參考值范圍：男631±128 IU/ml (315535ng/ml) 女 337±60 IU/ml (312000ng/ml) 【注意事項】1本法的靈敏度為0.2IU/ml，最敏感且呈線性關系的范圍是3.1350IU/ml，如所測結果不在此范圍內，可增減濃度后再行測定，以求得準確結果。2包被用羊抗人IgE抗體、待檢血清稀釋度

13、、羊抗人IgE-HRP濃度及溫育時間均可影響本法結果，故需選擇其最適條件。3其它注意事項參見ELISA間接法。【方法評價】ELISA雙抗體夾心法測血清IgE簡便、快速，特異性強，敏感性高于血凝法， 是檢測抗原最常用的方法?！九R床意義】 血清IgE水平升高常與過敏性疾病和寄生蟲感染等疾病有關，可見于過敏性哮喘、過敏性鼻炎、特應性皮炎、寄生蟲感染、支氣管肺曲菌病、IgE骨髓瘤、急性或慢性肝炎、SLE、類風濕關節炎等疾病。血清IgE降低可見于低丙球蛋白血癥、IgE以外的骨髓瘤、惡性淋巴細胞性白血病、免疫缺陷病等?！舅伎碱}】 1ELISA雙抗體夾心法測定血清IgE時應注意哪些問題? 2測定血清總IgE

14、有何臨床意義? 五循環免疫復合物的測定(Detection of circulating immune complex)(一)PEG比濁法【實驗原理】不同濃度的聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG，常用PEG 6000)能選擇性地沉淀不同的蛋白質。當其終濃度為3040g/L 時，能選擇性地沉淀循環免疫復合物 (circulating immune complex, CIC)。然后用分光光度計測定其吸光度，即可反映沉淀物的相對含量?！驹噭┖推鞑摹?1標本 待檢血清 2pH8.4 0.1mol/L硼酸鹽緩沖液(BBS) 稱取硼砂(Na2B4O7·10H2O) 0.42

15、9g、硼酸(H3BO3) 0.340g，溶于100ml蒸餾水中。341g/L PEG溶液取4.1g PEG、10g NaF溶于100ml pH8.4 0.1mol/L BBS中。4器材分光光度計、離心機、試管、吸管等?！静襟E和方法】1待檢血清用pH8.4 0.1mol/L BBS作1:3稀釋( 0.2ml血清+0.4ml BBS )。 2按表4-1加樣，此時PEG最終濃度為37.3g/L。表4-1 PEG比濁法測CIC方法測定管對照管稀釋血清(ml)0.20.241g/L PEG(ml)2.0PH8.4 BBS(ml)2.0 3按上表加好后混勻，置4冰箱1h后取出，置室溫1015min。4用分

16、光光度計測定，以BBS調零，測兩管A495值。5同法測定不同濃度AHG (聚合人IgG) A495值，制作標準曲線。【結果判定】待檢血清A值=測定管A值-對照管A值 正常血清CIC的A值為0.043±0.020(X±SD) 由標準曲線查出待檢血清中CIC的含量(相當于AHG)，再乘以稀釋倍數，即為樣品中CIC的含量。【注意事項】1不同濃度PEG可沉淀不同分子量的免疫復合物。20g/L PEG能沉淀較大的CIC、40g/L PEG則沉淀較小的CIC，但濃度大于50g/L 時PEG選擇性沉淀CIC的特性即行消失，可能導致假陽性結果。 24時CIC沉淀最佳，室溫每升高1，A值下降

17、0.2。因此應注意溫度變化對結果的影響。3低密度脂蛋白、高球蛋白血癥或脂肪含量過高可引起濁度增加，故應空腹采血。4標本陳舊或反復凍融等均可影響檢測效果，故受檢血清一定要新鮮。4保存不能超過3天，-20保存有效期可適當延長。【方法評價】 此法快速、簡便、敏感度AHG達20g /ml，但不能反映小分子免疫復合物的情況，重復性差，一般可用作CIC的篩選。CIC檢測方法較多，原理各不相同，結果也不盡一致， 最好采用多種方法同時進行，以提高陽性檢出率。 【臨床意義】1對免疫復合物疾病有輔助診斷價值，如血清病、SLE、慢性活動性肝炎時CIC往往升高。 2對CIC的動態觀測有助于監測某些疾病的發展，協助判斷

18、療效和預后。 3有助于探討研究型超敏反應病的發病機理?！靖健?聚合人類-球蛋白(AHG)的制備 1將粗制人IgG 6.5mg溶于1ml PBS(PH7.4)中，置63作用20min。2取出，4 10000r/min離心30min，吸取上清液，分裝，-70保存。3如需制作標準曲線，將上清液置于冰浴中融化，2000r/min離心15min，用 Lowry蛋白測定法定量測定AHG的濃度。在應用標準曲線之前應將制備的AHG制劑同WHO標準試劑進行比較。 (二)抗補體法【試驗原理】血清中有CIC存在時，可與本身C1結合，當將此待檢血清56加熱1h，能破壞結合的C1，空出補體結合點。在加入豚鼠血清(補體)

19、時便可與之結合，致使后加入的致敏紅細胞不發生溶血或溶血程度減弱?！驹噭┖推鞑摹?標本待檢血清。2補體經補體滴定，求出其5CH50時的最適稀釋度，以此稀釋度稀釋補體。 (滴定方法見補體結合試驗)。 3熱聚合IgG 制備見PEG比濁法。4試劑pH7.37.4工作BBD、2.8%溶血素致敏SRBC(制備方法見補體結合試驗)。5器材冰箱、離心機、分光光度計、水浴箱、1ml吸管、試管等?！静襟E和方法】1將待檢血清56滅活60min，按表4-2操作。表4-2 抗補體法試驗測定管空白對照管冷工作BBD(ml)0.20.4待檢血清(ml)0.2補體(ml)0.40.4混勻，4作用60min。2.8%致敏血球(

20、ml)0.20.2混勻，置37水浴作用15min 2然后各加入3.0ml工作BBD，2500r/min離心5min，取上清，以工作BBD調零，測兩管A541值?！窘Y果判定】測定管A值比空白對照管A值小50%為陽性。若定量測定，將待檢血清和AHG分別作系列稀釋，按上表操作，分別確定待檢血清CH50時的稀釋度及AHG CH50時的含量。以下式計算血清中CIC的含量。CIC含量/ml=CH50時AHG含量/ml×待檢血清CH50時的稀釋倍數?！咀⒁馐马棥?待檢血清需加熱滅活后再測定，以破壞結合的C1，空出補體結合點，并破壞其中的補體。但需避免產生熱變性蛋白質而造成人為假陽性。故需嚴格控制加

21、熱的溫度和時間。2豚鼠血清易受溫度影響而失活，應分裝凍存于-20，一周內使用，過期作廢。最好-70保存。切忌反復凍融。3補體在實驗前必須經過認真滴定，不然補體用量過大會出現假陰性，用量過小會出現假陽性。4工作BBD、致敏SRBC均應新鮮配制。5待檢血清要新鮮，抽血后即行分離，應防止細菌污染、溶血。如不在當日檢測應-20凍存。6本法只能檢出能與補體結合的CIC，抗補體的任何因素均能干擾本試驗。 【方法評價】此法簡便、靈敏度高，易在一般實驗室進行。 【臨床意義】同CIC測定的PEG比濁法。 【附】CH50溶血標準管的制備取1ml 2.8% SRBC懸液，加7ml蒸餾水，使SRBC完全溶解，再加入2

22、.0ml 貯存BBD(見補體結合試驗)。取上述溶液0.5ml加入0.28% SRBC(用工作BBD將2.8% SRBC稀釋10倍即可)0.5 ml、工作BBD3.0 ml，離心后測A541值，即為CH50標準值。 【思考題】1抗補體法測CIC，待檢血清為什么需加熱滅活？2CIC的測定方法主要有哪些種類？各有什么特點？ 六 類風濕因子的測定玻片膠乳凝集試驗(Rheumatoid factor assaylatex slide agglutination) 【實驗原理】 類風濕因子(RF)是一組IgM類為主的抗變性IgG的自身抗體，它能與人或動物的變性IgG結合，而不與正常人IgG發生反應。用聚苯

23、乙烯膠乳顆粒吸附人類變性IgG，成為致敏膠乳顆粒，然后檢測血清中的RF，據此有助于類風濕性關節炎(RA)的臨床診斷。本處只介紹玻片法。 【試劑和器材】 1標本待檢血清、陽性血清、陰性血清。 2膠乳抗原 人變性IgG致敏的膠乳試劑。3pH8.2 0.1mol/L甘氨酸緩沖鹽水取甘氨酸0.75g、NaCl 0.85g加蒸餾水至100ml，再加1mol/L NaOH 0.20.3ml，調至pH8.2。4器材黑色方格反應板、滴管、牙簽等。 【步驟和方法】1將待檢血清、陽性血清、陰性血清經5630min滅活，用pH8.2 0.1mol/L甘氨酸緩沖鹽水作1:20稀釋，備用。2在黑色方格反應板上依次分別加

24、入稀釋的待檢血清、陽性血清、陰性血清各 1滴(約50l)，然后每格加入膠乳抗原各1滴 (約50l)。3用牙簽分別充分混勻，23min后觀察結果。 【結果判定】1如出現凝集顆粒且液體澄清者為陽性，即RF陽性；如仍保持均勻膠乳狀為陰性反應，即RF陰性。2若先在試管中將待檢血清作倍比稀釋，然后分別加在玻片上作上述試驗，可作半定量測定。【注意事項】1試劑應保存在4，切勿凍存。使用前應使試劑接近室溫并搖勻。2測定時需同時作陰性、陽性對照，觀察時應注意排除非特異性凝集。3所加液滴大小應一致。4假陰性的出現：(1)存在非IgM類抗IgG抗體，其凝集效價較IgM類RF差，很可能被忽視。(2)IgM類RF與內源

25、性IgG結合，形成可溶性免疫復合物，如它們親合力高，二者仍保持結合狀態。【方法評價】此法操作簡便，結果清晰容易判斷，敏感性高于血凝試驗，但特異性低于血凝試驗。主要用于檢測IgM類RF，對于其它Ig類RF不能檢出。【臨床意義】RA時RF的陽性檢出率為6090%，當RA持續存在時陽性率增高, 類風濕結節病人陽性率可達100%。但是RF檢測不是診斷RA的特異性試驗，許多疾病及少數正常人(尤其老年人)也存在RF，應注意鑒別診斷?！舅伎碱}】1RF陽性有何臨床意義？2用此法檢測RF如何排除假陽性、假陰性的影響？ 七皮膚試驗皮膚試驗（skintest）簡稱皮試，是在皮膚的體內免疫學試驗。當試驗抗原進入致敏者

26、皮膚時，皮膚中結合有IgE的肥大細胞或致敏T細胞就會與試驗抗原結合，引發即刻型或遲發型的皮膚超敏反應。試驗抗原也可從注射部位進入微血管，與循環中的相應抗體結合，形成的免疫復合物可在局部沉積，激活補體引起炎癥。所以皮膚試驗主要用于檢測型和型變態反應，有時也用于檢測型變態反應。一、試驗準備首先應當制備試驗用抗原，如有合格商品可直接購買?？梢宰鳛樽儜奈镔|種類繁多，例如動物皮毛、家禽羽毛、鴿糞、昆蟲、螨類、真菌、花粉、雜草、物理粉塵和各種食品等都可能成為變應原。不同抗原的制備方法不同，但一般包括以下幾個步驟：收集原料；粉碎與勻漿；脫脂與提??；過濾與分離；分裝保存。分裝保存之前應對提取產物進行鑒定。

27、首先必須經過無菌試驗、急性毒性試驗和熱原檢查，保證提取產物無明顯的毒副作用；還要測定產物的蛋白含量，用凱氏定氮法或磷鎢酸沉淀法標定出總氮單位或蛋白氮單位。變應原的范圍很廣，難以做得完全，所以查找變應原需依靠患者的病史和醫師的經驗以將可疑范圍縮小,學樣成功的機會就大得多。一般醫院和衛生所都能做藥物過敏試驗，多在注射室完成；防疫部位在一些免疫接種之前有時也要做皮膚試敏；其余的均在變態反應科或檢驗科的專門實驗室。實驗室應有專人負責，除具備各種專用試驗器材之外，還應備有意外搶救的藥品及設施。試驗部位應清洗干凈，嚴格消毒，以免皮膚的不潔物引起非特異性反應或感染。當皮膚患濕疹、感染、皮炎或外傷時不宜進行皮

28、膚試驗。正在或近日服用免疫抑制劑或抗組胺藥物者也不宜進行皮膚試驗。二、試驗類型及方法皮膚試驗的最常用部位是前臂曲側，因此處皮膚較為光滑細膩，而且便于試驗操作和結果觀察。按正規作法，左右兩臂一側作試驗，另一側作對照。需要時也可選用上臂或背部皮膚。具體試驗方法可分為皮內試驗（intracutaneoustest）、挑刺試驗（pricktest）和斑貼試驗（patchtest）。1皮內試驗將試驗抗原與對照液各0.020.03ml用皮試針頭分別注入皮內（不是皮下），使局部產生一個圓形小丘。當同時試驗多種抗原時，相互間至少間隔4cm，以免強烈反應時互相混淆結果。皮內試驗的敏感性比其他皮膚試驗高，所用抗原

29、應適當稀釋，以免出現嚴重反應；當高可疑性抗原出現陰性結果時，應逐漸加大抗原濃度進行重復試驗。皮內試驗是最常用的皮膚試驗，應用范圍也很廣，幾乎各類抗原及各型反應都可用皮內試驗進行測定，只是不同類型的反應觀察結果的時間和判定結果的標準不所不同。2挑刺試驗也稱點刺試驗或刺痕試驗。將試驗抗原與對照液分別滴于試驗部位皮膚上，用針尖透過液滴或在皮膚上輕輕地挑刺一下，以刺破皮膚但以不出血為度；1min后拭（吸）去抗原溶液。同時試驗多腫抗原時，千萬注意不要將不同的抗原液交叉混合，以免出現假陽性。挑刺試驗主要用于型變態反應，該法雖比皮內試驗法敏感性稍低，但假陽性較少，與臨床及其他試驗的相關性較強。劃痕試驗（sc

30、ratchtest）是挑刺試驗的一個變型，用三棱針或注射器針頭在皮膚劃一條或多條約1cm長的創痕。因為劃痕的輕重與長短難于掌握一致，故不常用。3斑貼試驗將試驗抗原直接貼敷于皮膚表面的方法。試驗抗原為軟膏時可直接涂沫在皮膚上；如為固體物時可用蒸餾水混合或浸濕后涂敷于皮膚上；如為水溶液則浸濕紗布后敷貼于皮膚上。所用抗原濃度以不刺激皮膚為原則，涂敷范圍以0.51cm為宜。涂敷后蓋以油紙或玻璃紙，用紗布或繃帶固定；如有明顯不適感可隨時打開查看，并進行適當處理。斑貼試驗主要是檢測型變態反應，敏感程度雖然不太高，但假陽性較少，結果的可信度大。三、結果判定及分析1型變態反應在抗原刺激后2030min內觀察結

31、果。挑刺試驗的陽性反應以紅暈為主，皮內試驗的陽性反應則以風團為主，判定標準見表16-2。表16-2 速發型皮膚試驗的結果判定標準反應程度皮內試驗挑刺試驗無反應或小于對照無反應或小于對照風團35min，紅暈20mm紅暈對照，20nm風團69mm，伴紅暈紅暈20mm，無風團風團1015mm，伴紅暈紅暈伴有風團風團15mm，紅暈伴偽足紅暈伴偽足和風團2型變態反應在接觸抗原后4872h內觀察結果。皮內試驗的陽性結果以紅腫和硬結為主，斑貼試驗的陽性結果以紅腫和水皰為主。判定標準見表16-3。表16-3 遲發型皮膚反應試驗的結果判定標準反應程度皮內試驗斑貼試驗無反應或小于對照無反應或小于對照僅有紅腫輕度經

32、腫，搔癢紅腫伴硬結明顯紅腫，時有紅斑紅腫，硬結，水皰紅腫伴豆疹，水皰大皰或（和）潰瘍紅腫，水皰伴潰瘍有時候，機體對某變應原可能同時存在多種類型的反應。例如在做青霉素皮內試驗時，30min內觀察呈陰性反應，但在58h可能會出現型變態反應，反應的外觀現象介于型與型變態反應之間；甚至還可能出現型變態反應。3假性結果在一定條件下，皮膚反應的結果可能與機體的實際情況不符，即出現假陽性或假陰性等不真實的結果。出現假陰性的常見原因有：試驗抗原的濃度過低，或者因各種原因失效；試驗時正服用免疫抑制劑或抗組胺藥物（后者可通過設立組胺陽性對照而判斷出來；操作誤差，例如皮內試驗時注射過深進入皮下，注入抗原量過少等；皮

33、試季節選擇不當，例如花粉季節過后，抗花粉抗體水平可下降。出現假陽性的常見原因有：試驗抗原不純，在提取、配制，甚至在試驗過程中被其他抗原污染，引起交叉反應；試驗溶液配制不當，過酸或過堿都會對皮膚產生非特異性刺激；皮膚反應性過強，例如被試者患有皮膚劃痕癥，或者有既往過敏的痕跡等；操作不當，例如注入少量空氣也可出現假陽性。四、應用與評價皮膚試驗屬于活體試驗，雖然影響因素眾多，卻能反應機體各種因素綜合作用的實際免疫狀態；并且簡單易行，結果的可信度大；這些優點是其他方法難以替代的，所以在臨床和防疫工作中都經常應用。1尋找變應原變態反應防治的重要原則之一是回避變應原，而回避的前提是明確變應原，確定變應原的

34、常用方法便是各種類型的皮膚試驗。例如支氣管哮喘和蕁麻疹等均可用皮膚試驗來。但食物過敏與皮膚試驗的相關性較差，這可能是因為食物的抗原提取液與腸吸收的物質有所不同，或食物過敏并非IgE所介導；而且，食物過敏的變應原容易發現，一般不必作皮膚試驗。2預防藥物或疫苗過敏對患者首次注射某批號的青霉素、鏈霉素或其它易過敏藥物之前，必須做過敏試驗；如果患者呈陽性反應（即使是可疑陽性），就應更換其他抗生素。注射導種抗血清（例如抗破傷風血清和抗狂犬病血清）前也必須做過敏試驗，如果呈陽性反應就需要換用精制抗體；或進行脫敏治療（少量多次注射，使抗原逐漸中和血液中的抗體）。3評價宿主細胞免疫狀態在可疑免疫缺陷病、腫瘤或

35、器官移植進，了解患者的細胞免疫狀態對疾病診斷和預后判斷都有重要意義。這種情況下可以使用共用抗原結核菌素（OT或PPD）或雙鏈酶（SD-SK）進行皮膚試驗；或使用人工合成的二硝基氯苯（DNCB）或二硝基氟苯（DNFB）等先進行致敏再作皮膚試驗，這樣可消除抗原接觸史不同所致的誤差。4傳染病的診斷對某些可疑的傳染病，用某種病原體的特異性抗原進行皮膚試驗可以起到診斷或鑒別診斷的作用。例如對布氏菌病和軟下疳等細菌感染、對某些病毒感染和真菌感染、以及某些寄生蟲感染均有一定的意義。另外，還有一些反應機制不同于變態反應的中和性皮膚試驗，例如診斷白喉的錫克（Schick）試驗和診斷猩紅熱的狄克（Dick）試驗等

36、。八激發試驗激發試驗（provocation test）是模擬自然發病條件、以少量致敏原引起一次較輕的變態反應發作、用以確定變應原的試驗。主要用于型變態反應，有時也用于型變態反應的檢查，尤其在皮膚試驗或其他試驗不能獲得肯定結果時，此法可排除皮膚試驗中的假陽性反應和假陰性反應。激發試驗或分為特異性激試驗和非特異性激發試驗。非特異性激發是用組胺或甲基膽堿做霧吸入，以觀察患者對型變態反應的敏感性，從而進行病因分析或療效判定；特異性激發是用抗原做試驗，對明確變應原有一定價值。根據患者發病部位的不同，可以進行不同器官的激發試驗，常做的是支氣管激發試驗（BPT）、鼻粘膜激發試驗和結膜激發試驗。一、支氣管激

37、發試驗1試驗方法 先用肺量計測定BPT前的肺通氣功能，常用指標為第一秒用力呼氣量（FEV-1）和肺活量；然后用噴霧器將對照液和抗原液或者非特異性刺激劑輸出，患者直接經口或用面罩吸入；吸入抗原后1520min復查FEV-1。無反應者可加大抗原量繼續試驗。2結果判定 陽性結果的判定標準如下：明顯自覺癥狀，如胸部緊迫感和喘息等；肺部聞及哮鳴音；FEV-1下降20以上。反應類型包括以下幾種：速發型，在十幾分鐘出現癥狀，為型變態反應；緩發型，在612小時出現癥狀，為型變態反應；遲發型，在24小時以后出現，為型變態反應；多相反應，速發反應后又出現緩發及遲發反應。3應用及評價 BPT較皮膚試驗的特異性高，與

38、患者的病史、癥狀和過敏原吸附試驗的相關性較強。常用于確定支氣管哮喘的過敏原、檢驗新制劑的抗原性、評價平喘藥療效以及觀察脫敏治療的結果等方面。本法的缺點是每次只能測試一種抗原，要求有一定專門設備和技術，并需取得病人合作。4注意事項 BPT偶可引起嚴重的反應，所用抗原濃度不宜過高，應該由小到大遞增；試驗前必須做好系列搶救準備，對反應較重者，需及時吸入舒喘靈等氣管解痙劑或皮下注射腎上腺素。二、其他激試驗1結膜激發試驗 球結膜背景明亮、毛細血管組織排列整齊，反應結果容易觀察，是一個較為理想的變態反應試驗場所。將適當濃度的變應原浸液滴入患者一側眼結膜，另一側滴入生理鹽水作對照；1520min觀察結果。試驗側結膜充血、水腫、分泌增加、癢感，甚至出現眼瞼紅腫等現象者為陽性反應。該試驗主要用于眼部變態反應病的過敏原檢查。注意抗原液中任何