一份很有參考價值的浙江自然基金標書重點資助Preparedon21November2021同行評議組別藥物化學與生化藥學項目編號.Z206.51O.7\\x請書申報類別：重點、重大項目項目名稱：天然來源新型抗腫瘤藥物先導的快速識別研究申請者：潘遠江電話：4依托單位：浙江大學/理學院通信地址：浙江大學化學系郵政編碼：310027E-mail申報日期：2006-5-25浙江省自然科學基金委員會二OO六年制基本信息申請者信息名姓江遠潘別性男日91X月9O年6691X士博份年位學獲4991X授教稱職學譜話電4院學rm」理學大江浙型類件證證份身O26三近否是者請申否#:曾R,者17,請80申22來一、-3爾一27n3KVE莘2Z2元國用"究應2冊中在法選費方篩經離向助分靶資譜分部包成m流性主限多於在期物聚正究植天者研化在請和氧譜申源抗質項目基本信息稱名目項別類又扌申占Z重性究研算預費經總費經請蘭寸斤因干譜太手用衣豆只夠基若色O譜應訓石尅訂癌的相矽波有帖東営纟毒中液ES他具瞬廣枕矢病物及FJ其、肌物osr的植以冏合性詁植斯m性用譜動結活炳屬O旦具上過羽此良創7」磋3邢艸通和鏈佔阿豆孚主得水,并構又為物t)g程分篩族徑穎財W植ch盼工在向碩途新磯400科le重因，靶^新有艮蘭ch究基子行*別具1H邙一S研以分進訊識列冊介W-se行擬標子心園系卯簡植en進目靶分M快叭義用ng分項質性抄的得血意藥tu成本白活fL導獲就和瘤ng性。蛋瘤曲先，3容腫wa活究為腫O物證導內抗k物研作抗瑋藥驗先、種Um主的rc的鬥瘤理物標兀1le分-S新M腫藥券目產hh腫成V的歷抗外型究江0P抗效白微矯型體新研浙lb的有蛋低15新合的目擇BB中的達量打源結景?項選{其穎表含彷來段前據X9個4過超不詞鍵關析分譜9別識速快9導先物一、留rH7腫航CSSV-

項目組主要成員編號姓名出生日期性別職稱學位單位名稱電話1潘遠江1966年09月19男教授博士浙江大學/理學院42吳曉丹女高級工程師碩士浙江大學53王丹華男博士后博士浙江大學04何山男博士生學士浙江大學05胡楠女博士生學士浙江大學06萬結平男碩士生學士浙江大學07總人數咼級中級初級博士后博士生620012說明：1.個人介紹部分申請者必須填寫，其他人員可以不填寫；2.高級、中級、初級、博士后、博士生、碩士生及參加單位數由申請者負責填報，總人數自3.第一人必須是申請者，信息從前面自動讀入，但每年工作時間必須手工錄入。個人介紹：潘遠江：學歷：—蘭州大學化學系理學學士—蘭州大學化學系理學碩士西北產藏藥翠雀花中二萜生物堿研究導師：陳耀租院士—蘭州大學化學系理學博士生物活性分子的質譜研究導師：陳耀租院士工作經歷：浙江大學化學系博士后瑞士伯爾尼大學化學與生物化學系博士后1995年11月浙江大學化學系有機與藥物化學研究所副教授1999年11月浙江大學化學系有機與藥物化學研究所教授兼任浙江大學藥學院教授――浙江大學化學系教授，博導主要學術兼職：中國化學會有機分析與生物分析專業委員會副主任中國化學會《有機化學》，《JournalofZhejiangUniversityScience》編委，中國藥學會高級會員杭州師范學院兼職教授主持的主要研究項目有：1）質譜在天然來源抗腫瘤活性成分快速篩選中的分析研究萬元2000-2002，負責人已完成2）冠心II號組成原理基礎研究38萬元2001-2003，化學負責，已完成3）質譜在天然抗腫瘤活性成分靶向篩選與分析中的應用23萬元2003-2005，負責人，在研4）生物活性植物多酚的逆流色譜分離新方法研究23萬元2003-2005，負責人，在研5）中藥活性成分快速篩選的現代組合化學研究-省自然科學基金委人才基金30萬元，2001-2003，負責人，已完成6）浙江傳統中藥抗癌生物活性成分快速篩選與結構測定-省自然科學基金項目4萬元，1999-2001，負責人，已完成。已發表學術論文120多篇，被SCI收錄100余篇，作為通訊作者的代表性SCI論文有：Lu,XingguoGong,YuwenLu,JianjunGuo,ChenhuiWang,AndYuanjiangPanMolecularCloningAndFunctionalCharacterizationOfACell-PermeableSuperoxideDismutaseTargetedToLungAdenocarcinomaCells:J.Biol.Chem.,May2006;281:13620-13627Xj,TalYp,LiXy,PanYJScreeningForPregnaneGlycosidesWithImmunologicalActivitiesFromTheStemsOfStephanotisMucronataByHigh-PerformanceLiquidChromatography/TandemMassSpectrometryRapidCommunicationsInMassSpectrometry2006,20(3):403-411Kw,SunCr,WuXd,PanYJNovelBioactiveDammaraneCaffeoylEstersFromCelastrusRosthornianusPlantaMedica2006,72(4):370-372HuangSL,PanYJ,ZhuWL,WuAXANovelThree-ComponentOne-PotReactionInvolvingAlkynes,UreaOrThiourea,AndAldehydesOrgnaicLetters2005,7(17):3797-3799LuYB,SunCR,WangY,PanIsolationAndPurificationOfTwoPhenylbutenoidsFromTheRhizomesOfZingiberCassumunarByUprightCounterCurrentChromatographyJournalOfChromatographyA2005,1089(1-2):258-262WuSH,SunCR,PanYJPreparativeCounter-CurrentChromatographyPurificationOfValrubicin(AD-32)FromCrudeSyntheticDrugUsingUprightCoilPlanetCentrifugeWithFourMultilayerCoilsConnectedInSeriesJournalofChromatographyA2005,1076(1-2):207-211ZhuYL，HuangSl,WanJP,YanLAndPanYJTwoNovelDiastereoselectiveThree-ComponentReactionsOfAlkenesOr3,4-Dihydro-(2H)-PyranWithUrea/Thiourea-AldehydeMixtures:[4+2]-CycloadditionVsBiginelli-TypeReactionOrg.Lett.,2006,ASASArticle.WuSH,SunCR,PeiSF,PanYJPreparativeIsolationAndPurificationOfAmidesFromTheFruitsOfPiperLongumL.ByUprightCounter-CurrentChromatographyAndReversed-PhaseLiquidChromatographyJournalofChromatographyA20041040(2):193-204WuSH,SunCR,WangKW,PanYJPreparativeIsolationAndPurificationOfCelastrolFromCelastrusOrbiculatusThunb.ByANewCounter-CurrentChromatographyMethodWithAnUprightCoilPlanetCentrifugeJournalofChromatographyA2004,1028(1):171-174ZhangH,GuQ,LiangXl,PanYJScreeningForTopoisomeraseIBindingCompoundsByHigh-PerformanceLiquidChromatography-MassSpectrometryAnalyticalBiochemistry2004,329(2):173-179申請經費預算萬元計劃開支項目名稱計算根據及理由金額（萬元）

1?信息費10000文獻調研，聯機檢索與查新等2?專題學術活動費15000出席國內外會議3.儀器和設備購置費15000色譜柱與進口滲析膜等4?能源材料費130000藥材采集、藥品購置、正反相材料購置、玻璃易耗品、化學試劑與NMR、MS等測試費5.計劃管理費10000按規定，用于水電補貼6.人員費20000碩、博士生勞務補貼，發表論文補貼注：開支范圍和標準參見《浙江省省級科技項目經費管理暫行辦法》（浙財教字[2002]20號）。申請者承諾：我保證：（1）申請書內容是真實的；（2）恪守科學道德，倫理道德的基本原則；（3）項目組成員知曉申請書內容，并自愿參與研究工作；（4）已如實填報申請者正在主持的國家和省部資助經費在20萬元及以上的研究項目名稱、來源和研究期限；（5）如果獲得資助，我將履行項目負責人職責，嚴格遵守浙江省自然科學基金委員會的有關規定，切實保證研究工作時間，認真開展工作，按時報送有關材料。若填報失實或違反規定，本人將承擔全部責任。簽字：日期：項目依托單位承諾:已按規定對申請人的資格和申請書內容進行了審核。申請項目如獲資助，我單位保證對計劃實施所需要的人力、物力和工作時間等條件給予保障，嚴格遵守浙江省自然科學基金委員會有關規定，督促項目組遵守科學道德和倫理道德的基本原則，督促項目負責人和本單位項目管理部門按照規定及時報送有關材料。依托單位公章.日期正文撰寫提綱1、項目名稱天然來源新型抗腫瘤藥物先導的快速識別研究2、研究工作對浙江經濟、社會和科技發展的意義中草藥（藥用植物）有效成分研究是發現與創制新藥的一條重要途徑，一直令人關注。長期以來，該研究獲得了許多極具應用價值的新型藥物如紫杉醇等或其他藥物先導化合物如鬼臼毒素等,為人類健康做出了貢獻。數十年來，我國在中草藥有效成分的研究方面取得了長足的進步，也積累了豐富的經驗，為天然藥物的創新研究奠定了良好的基礎。然而，由于中草藥化學成分一般都十分復雜，傳統的研究模式（科技條件限制）往往只關注含量較為豐富的主要化學成分，且其有效成分的分離提取與藥效驗證實驗往往是脫節的；這種方式經常會形成費時費力的無效分離；既大大降低了從中草藥有效成分出發創制新藥的效率，又往往會忽略一些含量極其低微的新型有效成分；而這些新的微量有效成分很可能是新型藥物先導的重要源泉。因此，在中草藥有效成分的研究過程中，必須充分借用現代高新技術手段，發展與建立微量水平上的生物活性成分快速識別的新方法，才能突破傳統研究模式的制約，加大尋找與發現新型藥物先導的可能性。在藥物（西藥）的研究中，曾發展通過篩選化學庫（組合庫、化合物庫）來尋找及優化藥物先導（西藥）的新技術［1］，這一研究途徑可改變傳統的逐一合成或分離提取、逐一純化及逐一識別的模式，從而加快了藥物先導化合物出現的速度，這一技術也為中草藥有效成分（天然的復雜的化合物庫中的某些特定化合物）的研究提供了新思路。在快速篩選化合物庫的新技術中，基于生物親合等分子間相互作用（力）分析的靶向篩選受到了廣泛的關注［2］，其中一些與生命活動密切相關的酶或蛋白等常常作為靶標分子而被研究；這種基于靶標分子與藥物分子（配體或抑制劑）的相互作用的體外生物活性篩選，便形成一種十分靈敏的生物活性分子的快速發現的途徑，這一研究方法的成功應用除一是要選擇合適靶標分子，二是要尋求與之匹配的活性分子定性檢測的高靈敏度的分析方法，飛速發展的現代質譜技術如電噴霧電離結合高分辨技術質譜（ESI-HRMS）等因其具有快速，靈敏度高以及易與分離手段（如HPLC）聯用等特點正成為現代藥物研究最重要的分析手段之一［3-4］。抗腫瘤藥物的研究與創制是關系到人類健康的重大課題之一，而從中草藥出發尋求與發現高效低毒的新型抗腫瘤藥物一直是醫藥行業極為關注的熱點研究領域；如前所述，在傳統的中草藥有效成分研究基礎上，盡快開展微量水平上的生物活性成分的研究，將大大豐富抗腫瘤藥物先導的新源泉，在我們前期的研究中，本課題組曾以拓撲異構酶以及微管蛋白作為靶分子，結合質譜分析對一些抗癌藥物分子進行了成功的篩選與分析［5-6］，然而由于拓撲異構酶，微管蛋白的活性保持較為困難，因此基于這些靶標分子的活性成分篩選的應用受到很大的限制，為了探討并建立更具應用前景的微量新型天然來源抗腫瘤活性成分篩選與分析一體化的新途徑，合適靶標分子的選擇與應用一直是我們極為關注的問題。近年來癌基因蛋白產物Src的發現引起人們的廣泛興趣，由于Src蛋白含有兩種主要形式即病毒癌基因表達蛋白v-Src與細胞原癌基因表達蛋白c-Src，c-Src蛋白的表達和活性異常是某些腫瘤發生、發展的原因之一，而v-Src蛋白本身就能誘導細胞的轉化與腫瘤的發生；因而研究開發Src蛋白抑制劑作為強效腫瘤抑制劑已成為目前國際醫藥界廣為關注的亮點［7-8］。為此，本項目擬以基因工程獲得的具有激酶活性的病毒癌基因表達蛋白-v-Src作為蛋白質靶標分子,在分子水平上對中草藥中的一些新的微量抗腫瘤活性分子進行靶向篩選,結合高分辨質譜及液質聯用分析手段，對這些活性分子進行分析確定，從而發展并建立微量水平上的天然來源新型抗腫瘤藥物先導的快速識別新途徑。浙江省藥用植物資源分布極其豐富，對這些藥物，除需要充分發揮傳統的天然產物化學的研究方法優勢外，還需盡快借鑒國際上先進的研究方法，開辟新的研究思路，將為我省研制具有自主知識產權的新藥奠定扎實基礎并提供一條可行的捷徑。本項目研究將為尋找發現新藥先導提供新途徑，為促進我省乃至我國醫藥事業的振興與發展做出貢獻，課題的實施既具有重要的學術理論價值又有廣闊的應用前景。3、本項目研究目標及與申請者研究工作長期目標的關系；項目研究目標：本項目擬以浙江民間抗癌藥用植物體為研究對象，以v-Src蛋白作為靶分子，對天然來源抗腫瘤活性分子進行快速篩選，結合高分辨質譜及液質聯用技術對這些分子進行分析確定，以建立微量天然來源抗腫瘤藥物先導的快速識別新途徑，并應用該途徑尋找發現一系列具有應用前景的抗腫瘤藥物先導。與申請者研究工作長期目標的關系：申請者長期從事（天然）藥物化學研究，圍繞新的生物活性分子的尋找與發現這一研究方向，進行了以下的研究工作：1）近幾年通過10余種藥用植物的植化研究，分離得到80多種新化合物，其中10余種是具有應用前景的新的生物活性分子，在國際知名專業學術期刊《Phytochemistry》、《Steroids》、《JournalofNaturalProducts》，《Tetrahedronletters》（影響因子均大于以及《PlantaMedica》上發表了多篇論文；2）在天然來源生物活性成分分離與分析研究中進行大量的積累：進行了新的逆流色譜技術研究與開發并應用于天然藥物有效成分的分離純化的研究中，其成果在《JournalofChromatographyA（影響因子：IF為發表了論文6篇；負責承擔了一項國家自然科學基金“抗氧化植物多酚的逆流色譜分離方法研究”（2005-2007）項目；應用質譜及其聯用技術開展了生物活性分子篩選與分析研究等一系列探索工作，分別在《Analytica》，《RapidCommunicationsinMassSpectrometry》等雜志上發表論文多篇；3）發展與建立了生物活性分子在線分離分析的新途徑，進行了抗癌藥物分子的靶向篩選與快速鑒定等研究探索，其研究成果已在《AnalyticalBiochemistry》,《科學通報》，等雜志上發表，目前有一篇論文已遞交美國《AnalyticalChemistry》（影響因子：IF為；負責承擔了兩項國家自然科學基金“質譜在天然抗腫瘤活性成分快速篩選與分析中的應用”（1999-2001）與“天然來源抗腫瘤活性成分靶向篩選與質譜分析”（2004-2006）項目。4）課題組通過綠色合成途徑開展了天然活性分子的合成與衍生以及目標生物活性分子的藥物合成等研究工作，迄今已在《OrganicLetters》（影響因子：IF為發表論文3篇；在《BioorganicandMedicinalchemistryLetters》、《Tetrahedron》、《EuropeanJournalofOrganicChemistry》（影響因子均大于等其他雜志上發表論文多篇。5）基于靶向篩選必須擁有高效的新型蛋白靶標的原則，近期與從事生命科學研究的相關課題組開展了合作研究，并于2006年在國際著名雜志《JournalofBiologicalChemistry》（影響因子：IF為發表論文一篇。總之，尋找與發現新的藥物先導是我們研究的重要課題，為了順利實施該課題，發展與建立新的研究途徑與方法，歸納總結科學規律并促進學科發展，一直是我們研究工作的長期目標。天然來源抗腫瘤化合物是我們在長期的天然藥物研究中極為關注的一類活性成分，這不僅是因為抗腫瘤活性成分在天然藥用植物中分布較廣泛，具有復雜的結構多樣性，對其研究必將大大促進天然藥物化學（有機結構分析）研究技術與方法的發展與更新，既可豐富天然有機（藥物）化學理論內容，更重要的是對這類活性成分的深入研究可大大豐富抗癌藥物先導的源泉（為藥物合成提供靶標）從而為創制新藥奠定良好基礎，為我省、我國的醫藥事業做出貢獻。在我們近期的相關研究中，我們從一些藥用植物中得到的一系列具有抗腫瘤活性化合物，并申報了專利，這些化合物擁有多類結構骨架如萜類、糖苷以及黃酮等，多數新結構含量甚微，其分離分析頗為艱難，常規的正反相層析與高效液相制備要么效果不佳要么代價太大，因而發展微量水平上新的抗腫瘤活性成分分析的新途徑具有極其重要的意義。鑒于此，本項目擬以v-Src蛋白作為靶標分子，基于該靶分子與抗腫瘤活性分子的相互作用進行中草藥中抗腫瘤活性成分的靶向篩選，結合高效液相色譜/質譜聯用技術對上述篩選出的成分進行在線分離分析與鑒定，從而發展與建立關于天然來源抗腫瘤活性成分快速識別的新途徑。本項目的實施是我們長期研究目標的最重要內容之一。4、項目研究內容，研究方案和進度安排研究內容：Bulbophyllumkwangtungense浙江省原生的蘭科植物石豆蘭屬和石斛屬植物廣東石豆蘭（BulbophyllumkwangtungenseSchlecht）與細莖石斛（）等幾種植物根莖的乙醇提取物在體外抗腫瘤實驗中，對人卵巢癌HO-8910細胞，人宮頸癌細胞和人早幼粒白血病HL60等細胞株呈現出明顯的抑制作用，在已展開的植物化學研究中，我們從幾種植物的富含成分中分離得到一系列9,10-二氫二苯并［b,f］氧雜卓類化合物與單體毛蘭素（Erianin）、毛蘭菲（Confusarin）等，這些化合物均顯示較強的體外抗腫瘤活性。9,10-二氫二苯并［b,f］氧雜卓類毛蘭素（Erianin）毛蘭菲（Confusarin）本項目即以這幾種植物為研究對象，重點關注這些植物中含量低微，結構新穎的有效成分的研究，擬以基因工程獲得的具有激酶活性的病毒癌基因表達蛋白v-Src作為蛋白質靶標分子，在分子水平上對上述一系列新的微量抗腫瘤活性分子進行靶向篩選,通過高分辨質譜分析及其聯用手段進行分析確定，發展并建立微量水平上的天然來源新型抗腫瘤藥物先導的快速識別新途徑，并在此基礎上發現若干具有應用前景的新型藥物先導，具體研究內容如下：一：植物中的富含有效成份的分離分析---常規研究途徑1）運用傳統色譜方法得到富含成分有效部位分離提取，所獲得化合物多為已知結構的化合物；對新結構化合物，通過現代波譜技術（1D,2D-NMR等）確定結構，并進行抗腫瘤活性驗證。該過程可去除有效部位的富含成分，富集有效部位的微量成分。二：植物中的微量有效成份的分離分析—發展新的研究途徑選擇病毒癌基因表達蛋白v-Src作為靶標分子，自行組裝生物活性快速篩選裝置，見下圖所示：靶標分子溶液與天然混合物溶液分別置于由關鍵膜隔離的上下兩個篩選池中，由于靶標具有親水膠體的性質始終被截留在一個篩選池中，隔離膜對天然化合物小分子保持良好的通透性。當液相多組分天然藥物化學成分通過膜在兩個篩選池運動時，基于生物親合作用，具有抗腫瘤活性的藥物分子（v-Src的抑制劑）與靶標分子結合形成圖一:靶向篩選池復合物而被截留在裝有靶標分子的篩選池中，其他未發生親合作用的化合物分子則呈游離狀態平衡分布在兩個篩選池中，隨后運用HPLC-HRMS對要研究的化合物組分在實施篩選前后分別進行分析，獲取化學成份指紋圖譜，通過比較這兩類指紋圖譜差異后，發現新的活性成份。由于該研究中所應用的高分辨質譜可給出有機分子的元素組成（分子式），而多極質譜分析能給出豐富的結構信息，因而我們可結合在線的SCI-finder直接獲得所篩選出的有效成分是否擁有新結構，本項目重點關注新型活性成分研究。對于上述途徑得到的一些結構復雜的新成份，也可通過半微量制備型HPLC制備，經多維高分辨NMR技術（微量探頭）進行結構確定。研究方案1.靶蛋白一v-Src蛋白的制備克隆v-src全基因，在pGEX-KT高效表達質粒中誘導表達，得到GST-Src融合蛋白，用GlutaioneSepharose4B親和層析柱進行純化，并采用Westernblot和以polyGlu:Try（4:1）為底物的ELISA法鑒定其免疫原性和酪氨酸激酶活性。（該實驗程序已經非常成熟，10天就可得到足量的GST-Src融合蛋白，且該融合蛋白具有較高的靶標蛋白v-Src的免疫原性和酪氨酸激酶活性，可以直接作為靶標蛋白）。2．藥用植物化學研究。一：關于植物中富含活性成份的研究與微量成分的富集。1）對廣東石豆蘭與細莖石斛等幾種植物根莖部分粉碎，用70%酒精浸泡提取，通過不同極性化學溶劑進行化學部位分段，體外抗腫瘤藥理實驗獲得若干有效部位。2）運用逆流色譜技術，大孔吸附樹脂及正反相柱層析對有效部位進行分段分離，得到一系列主要成分，運用現代波譜技術進行結構確定，一般為已知化合物。3）對上述分離得到的未知結構的單體成分進行結構確定并進行藥理驗證。4）通過LH-20凝膠柱層析對上述已經分出主要成分的有效部位進行微量成分的富集與分段，得到若干含有多組分（微量成分）部位，體外藥理跟蹤得到系列有效部位。二：關于植物中含量低微的活性成份的快速識別研究1）制備并組裝含靶標分子的篩選池，探討快速篩選的最佳條件。2）以抗腫瘤作用確定的天然化合物如紫杉醇、長春新堿等若干已知抗癌成分為對照，通過實驗考察溫度、PH值、有機溶劑、化學計量比以及相互作用時間對靶向篩選的影響，結合HPLC色譜定量分析，確定篩選的最佳實驗條件。3）在上述實驗的基礎上，對若干含多種微量成分的有效部位進行快速識別研究，在靶向篩選平衡后，活性成分與靶標結合形成復合物而被截留，未被篩選化合物分子游離分布在兩個篩選池中，應用HRMS或HPLC/MS對篩選前后的天然混合物溶液制備指紋圖譜，從指紋圖譜中發現差異，可獲得生物活性成分的信息。4）鎖定篩選出的活性成分，通過高分辨質譜可提供元素組成（分子式）的功能，結合聯機數據庫檢索，確定新成分；運用多級質譜技術，進行新化合物的結構信息提取，初步鑒定其結構。5）對在線分析并結合檢索確定結構的復雜新結構成分，通過多次富集并結合半微量制備，運用微量探頭多維NMR測定其結構。6）運用體外腫瘤細胞株培養等常規藥理方法對一些具有新穎結構的成分進行藥理驗證。圖二：快速篩選流程見下圖：圖三.抗腫瘤活性成分靶向快速識別技術路線如下本項目擬用三年時間完成各項研究任務，預期進展情況如下：1）~完成具體實驗方案設計，藥用植物的采集，有效部位的提取分段，微量有效成分部位的制備。2）~完成各種藥用植物中富含化學成份的分離提取與結構確定，同時建立微量或超微量抗腫瘤有效成份的快速識別的試驗方法；完成多種的微量抗腫瘤活性成份的快速實驗。3）~歸納，整理，分析總結并提交研究論文與總結報告。5、項目創新之處關于天然來源的有效成分的研究,國內外研究人員通常還是采用常規的植物化學研究途徑結合離線的活性實驗；今年來在分離材料、高靈敏度色譜制備手段上進行大量的探索，對于一些微量成分的研究，目前尚無通用的方法，只有采用較為經典的多次制備的途徑，與活性銜接也是較難的，因而本項目擬以v-Src蛋白作為靶蛋白，基于該靶標與抗腫瘤活性分子的相互作用進行中草藥中抗腫瘤活性成分的靶向篩選，結合高分辨質譜及其聯用技術對上述篩選出的成分進行在線分離分析與鑒定，其創新之處在于：（1）靶蛋白對藥物分子的靶向篩選以及高分辨質譜分析均是極其靈敏的途徑，該方法適用于微量或超微量生物活性成分的分析研究，為從天然來源（藥用植物）中發現一些含量低微的抗腫瘤活性成分提供新手段，該研究未見文獻報道，豐富了有機與生物分析的理論內容。（2）本項目關于生物活性成分的靶向篩選與分析鑒定可在線一體化實施，豐富了天然有機（藥物）化學研究方法，可大大提高了天然有機化學及藥物化學研究工作的效率。（3）靶標與抗腫瘤活性分子的相互作用用于中草藥（藥用植物）中微量的抗腫瘤活性物質的靶向篩選，可發展成為一種分子水平上的微量或超微量分離途徑，該研究無疑為分離科學增添了新的內容。（4）本項目重點進行多種藥用植物中微量成分的研究，以發現大量的擁有新結構的生物活性成分，該研究可大大豐富抗癌藥物先導的源泉（為藥物合成提供靶標）從而為創制新藥奠定良好基礎。（5）上述途徑也可適用于其他天然來源生物活性微量成分的快速識別.6、工作基礎與工作條件1）本項目申請人自1988年以來一直從事具有生物活性天然有機化合物的分離提取、結構鑒定研究，迄今已分離出80多個新化合物，在國際知名專業學術期刊等上發表了多篇論文，在探索與發展天然藥物有效成份分離新技術，進行一系列研究工作，開展了新的逆流色譜儀技術的開發與應用工作，申報專利兩項，在《JournalofChromatographyA》發表論文多篇，在發展生物活性分子質譜分析研究領域，進行了一系列的探索工作，分別在《Analytica》等雜志上發表論文多篇；在發展與建立生物活性分子在線分離分析新途徑方面，在《AnalyticalBiochemistry》等雜志上發表論文多篇；同時課題組也開展藥物合成的一些研究工作，迄今已在《OrganicLetters》發表論文3篇；在新的蛋白靶標，與從事生命科學研究的相關課題組開展了合作研究，并于2006年在國際著名雜志《JournalofBiologicalChemistry》發表論文一篇。總之，圍繞藥物化學研究，本課題組已發表學術論文120余篇，其中SCI收錄100余篇，申報專利6項，獲批2項，其研究成果共獲省部級及其他部門科技獎三項。（2）課題申請者近幾年來負責承擔了的三項國家自然科學基金項目，其中兩項課題“親合超濾-質譜分析在天然來源抗腫瘤活性成分快速篩選中的應用”與“質譜在天然來源抗腫瘤活性成分靶向篩選中應用”分別以拓撲異構酶以及微管蛋白等作為靶標分子，對一些抗腫瘤活性的物質進行了篩選分析研究，取得的結果可為本課題的實施提供有益的經驗，部分方法也可借用。由于酶與微管蛋白制備相對困難，活性保持也有一定的限制，本項目基因工程獲得的v-Src蛋白作為靶分子，對中草藥中的潛在的抗腫瘤活性分子進行靶向篩選。該工作是本課題組前期工作延伸，已有較為扎實的基礎。（3）我們在近期的相關研究中，從一些藥用植物中分離得到的一系列具有抗腫瘤活性化合物，這些化合物擁有多類結構骨架如萜類、糖苷以及黃酮等，多數新結構含量甚