1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。ABO 血型鑒定操作規程-1.0原理ABO血型鑒定操作規程2.03.04.05.05.15.26.06.16.26.36.46.56.66.77.07.1根據紅細胞上和血清（或血漿）中有無A抗原和（或）B抗原及其抗體，將血型分為A型、B型、AB型及O型。可利用紅細胞凝集試驗，通過正、反定型鑒定ABO血型。正定型正定是指用已知抗-A、抗-B血清來檢測受檢紅細胞上有無相應的A抗原和（或）B抗原；反定型反定是指用已知A1型、B型紅細胞來檢測受檢血清（或血漿）中有無相應的抗-A和（或）抗-B。原始樣品要求5mL

2、靜脈全血。樣品容器和添加劑真空試管，EDTA.K2抗凝/普通試管，不抗凝。檢測環境要求溫度：1827，濕度：30%70%。所需材料和設備設備普通離心機、免疫血液學離心機、顯微鏡、恒溫水箱、定時器。材料抗-A、抗-B血清、ABO標準抗原紅細胞試劑、移液器、加樣吸頭、生理鹽水（NS）、干凈空試管。檢測操作過程將受檢標本以1000g離心5min，使標本血漿/血清與紅細胞分離，吸取紅細胞，用NS洗滌三次后，配成3%5%紅細胞懸液。取6支小試管，分別標記“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。在“-A”、“-B”管中分別加入抗-A和抗-B血清各50L，其余管加入受檢血漿/血清各100

3、L。在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受檢者3%5%紅細胞懸液各50L，搖勻。在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分別加入A1、B、O紅細胞試劑各50L，搖勻。1000g離心15sec，輕輕懸浮紅細胞，觀察結果并記錄。根據實驗需要，除室溫下觀察結果外，另可增加在4、37下觀察結果。結果判斷凝集強度判斷標準見表1。表1凝集強度判斷標準表凝集強度4+3+2+1+-或MFpHH判斷標準紅細胞凝集成一大塊，液體背景透明，無游離紅細胞數個大凝集塊，液體背景透明，無游離紅細胞有很多小凝集塊，液體背景透明，無游離紅細胞有許多很小的凝集塊，肉眼可見，液體背景不透明，有游離紅細胞微小的凝集塊，肉眼很難看清，需

4、要用顯微鏡觀察無凝集，無溶血，全是游離紅細胞混合凝集外觀，鏡下可見少數紅細胞凝集，而大部分是游離紅細胞部分溶血完全溶血7.2ABO血型結果判斷見表2：正定型抗-A血清血抗-B血清血Ac表22血型結果判斷表反定型定BcOc自身對照血型ABOAB7.37.48.09.010.0注：“”表示凝集或溶血；“”表示不凝集。正反定型不一致、ABO抗原減弱、抗-A或抗-B減弱、O細胞凝集時，排除人為操作錯誤后，執行疑難血型鑒定操作規程進行最終確認。根據上述判斷標準，作出結論并記錄在免疫血液學檢查實驗記錄。結果報告根據實驗結果，打印免疫血液學實驗報告。報告的形式為：A型/B型/O型/AB型。實驗結果解釋實驗結

5、果為A型、B型、AB型，O型，說明受檢者ABO血型分別屬于A型、B型、AB型，O型。紅細胞上分別有A抗原、B抗原、皆有A抗原和B抗原、皆無A抗原和B抗原；血漿中分別有抗-B、抗-A、抗-AB、皆無抗-A(B)。質量控制當受檢標本與正、反定型試劑反應，凝集強度少于2+時，取標準抗-A、抗-B或A、B、O紅細胞與正、反定型試劑反應，以驗證試劑效能是否下降。11.011.111.211.311.411.511.611.711.8注意事項試管必須清潔、干燥，防止溶血。加樣順序一般先加血清，再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。分型血清效價太低，抗原抗體比例不適當，可使反應不明顯誤判為陰性反應。用立

6、即試管法可能不能測出亞型（如AX），需延長作用時間。觀察結果時既要看有無凝集，更要注意凝集強度，此有助于亞型、類B或cisAB的發現。各種原因引起的紅細胞溶解，容易誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體，也會造成不凝集。受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤）以及類B或cisAB等，易被誤判為不凝集。ABO正反定型不一致常見原因11.8.1分型血清效價太低，親和力不強。11.8.2漏加、錯加試劑或標本，試劑被污染或失效。11.8.3紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯誤判為陰性結果。11.8.4受檢者紅細胞上抗原位點過少（如

7、亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤）以及類B或cisAB等。11.8.5受檢者血清蛋白紊亂（高球蛋白血癥）或實驗溫度過高，常引起細胞呈緡錢狀排列。11.8.6受檢者血清中缺乏應有的抗-A或抗-B，如丙種球蛋白缺乏癥。11.8.7各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體。11.8.8由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.8.9血清中有意外抗體，如抗-I等，常干擾定型。11.8.10患者近期曾輸過異型血，使其血液標本成為不同型別的紅細胞混合物，定型時顯示“混合外觀凝集”現象。11.8.11嵌合體血型，體內有兩群紅細胞

8、，定型時顯示“混合外觀凝集”現象。11.8.12獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細胞可獲得“類B”的活性。11.8.13藥物等因素的影響：藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些造影劑聚集而類似凝集。11.8.14老年人血清中抗體水平大幅度下降。11.8.15新生兒尚未形成ABO同種抗體，故三個月內的新生兒只要求做正定型來確定血型。11.9紅細胞在保存期內會逐漸變為暗紅色，只要其未被細菌污染，抗原性不受任何影響。11.1012.0每次使用前，檢查試劑有無明顯溶血發生，明顯溶血者棄掉。標本保存不當、試劑過期變質、試劑被污染、不同批號的試劑混用、離心力或離心時間不符合要求、孵育時間不準確、孵育溫

9、度未達試劑實驗要求等均可出現較大的變異。相關文件單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑說明書ABO標準抗原紅細胞試劑說明書全國臨床檢驗操作規程（第三版）臨床輸血技術規范中國輸血技術操作規范（1997年版）為什么ABO血型鑒定要正、反定型都做？原因如下：正定型屬于細胞抗原定型，反定型屬于血清抗體定型。ABO血型鑒定必須正、反定型都要做，有相互印證的作用。因為單做正定型來鑒定ABO血型，在某些情況下不可靠，易造成ABO血型誤判。如：1.抗-A、抗-B血清效價低時（試劑失效、被污染或被稀釋），可使正定型反應不明顯誤判為陰性反應。則A、B、AB型會誤判為O型。2.受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性

10、減弱（多見于白血病或惡性腫瘤），可使正定型反應不明顯誤判為陰性反應。則A、B、AB型會誤判為O型。3.各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體。可使正定型反應不明顯誤判為陰性反應。則A、B、AB型會誤判為O型。4.由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集。則A、B、O型會誤判為AB型。5.獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細胞可獲得“類B”的活性。則A型會誤判為AB型。ABO血型誤判，對于臨床輸血來說風險極大，會造成ABO血型異型輸血，易引起急性溶血性輸血反應的發生，對患者的生命安全造成威脅。ABO血型鑒定要正、反定型都做的法規支持：1.全國臨