1、人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯對光老化皮膚真皮成纖維細胞基質金屬程基焱，劉國紅，黃吉春，余鴻，劉廣益【關鍵詞】人參皂苷Rb1；,芳維甲酸乙酯；,基質金屬卵白酶；,成纖維細胞；,免疫構造化學摘要：目的通過人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯對皮膚真皮體外造就光老化成纖維細胞胞質內基質金屬卵白酶表達的影響，闡發(fā)人參皂苷Rb1對光老化的防治機理，探究光老化的防治本領。要領創(chuàng)立體外造就真皮成纖維細胞光老化模子，用人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯舉行滋擾，免疫構造化學技能表現(xiàn)基質金屬卵白酶的表達的改變。效果人參皂苷Rb1與芳維甲酸乙酯對造就成纖維細胞胞質基質金屬卵白酶的表達有明顯按捺作用P0.05；人參皂苷Rb1和芳

2、維甲酸乙酯對其表達的按捺作用彼此之間差異無明顯性(P0.05)。結論人參皂苷Rb1對光老化成纖維細胞具有與芳維甲酸乙酯相似的防治作用，其機理與芳維甲酸乙酯的作用機理大概雷同大概相似，及通過調治Ps活性防治皮膚光老化。關鍵詞：人參皂苷Rb1；芳維甲酸乙酯；基質金屬卵白酶；成纖維細胞；免疫構造化學parativeStudyftheEffetftheGinsensideRb1andArtinidEthylEsterntheExpressinfPsinSun-induedAgingDerisFibrblastsAbstrat：bjetiveTexplretheethdsfpreventinandure

3、fsun-induedagingderis,andlarifytheehanisfGinsensideRb1nsun-induedagingderis,iththestudyfexpressinfatrixetallpretEinasesinsun-induedagingderisfibrblastsytplast,hihareulturedinvitr,undertheeffetfGinsensideRb1andartinidethylester.ethdsBuildthederisfibrblastssun-induedagingdel,andaffettheellsithGinsensi

4、deRb1andartinidethylester,anddisplaythehangefexpressinfatrixetallpreteinasesithiunhistheistry.ResultsGinsensideRb1andartinidethylesterhadsignifiantinhibitineffetntheexpressinfatrixetallpreteinasesinthefibrblastsytplastulturedinvitrP0.05;theinhibitinrlesfGinsensideRb1andartinidethylesterntheexpressin

5、fatrixetallpreteinaseserentsignifiant(P0.05).nlusinGinsensideRb1haseffetfpreventinandurefsun-induedagingderissfibrblastsliketheartinidethylester,anditsehanisisthesaeasrliketheartinidethylesterthrughregulatingtheexpressinfatrixetallpreteinases.Keyrds：GinsensideRb1;Artinidethylester;atrixetallpreteina

6、ses;Fibrblast;Iunhistheistry皮膚老化是人體朽邁的重要表現(xiàn)之一，也是如今人們極為存眷的話題。恒久重復的紫外線照耀是皮膚光老化的緊張因素，皺紋形成是皮膚光老化的最為緊張?zhí)匦浴Ｑ芯堪櫦y形成機理對防治紫外線輻射損傷及皮膚老化有緊張意義。維甲酸對光老化皮膚的治療作用已經被大量的研究所證明，而且已經應用于臨床，但有研究表白維甲酸固然已經履歷了幾代，仍舊有很多很難落服的毒副作用13。人參具有庇護機體細胞和滿身免受應激的影響，低落血糖和血膽固醇，促進新陳代謝等成效，如今已經普及應用于臨床的很多方面，包羅在很多皮膚保健品和化裝品內4，5。本研究通過用人參的有用身分之一人參皂苷Rb1G

7、insensideRb1與芳維甲酸乙酯artinidethylester的比擬研究，目的在于闡發(fā)人參皂苷Rb1防治光老化的大概機理，探究更為有用的皮膚光老化的防治要領。基質金屬卵白酶(atrixetallpreteinases,Ps)在種種生理、病理條件下細胞外基質落解和重塑中起著關鍵作用，可以落解含或不含膠原身分的皮膚真皮細胞外基質。有研究表白，在在體實行和細胞造就實行中，Ps在朽邁皮膚真皮成纖維細胞fibrblast；FB的表達顯著加強，說明其在朽邁產生及皺紋形成歷程中有緊張作用，尤其是P1和P36，7。在本研究中選擇P1和P3作為光老化皮膚真皮的老化程度指標舉行研究。1質料與要領1.1取

8、材康健新生兒包皮真皮。1.2重要儀器裝備與試劑芳維甲酸乙酯購于市場，溶于吐溫20(山西省天星生化藥業(yè))；人參皂苷Rb1中國醫(yī)科大學化學教研室，溶于二甲基亞砜；P1和P3免疫構造化學試劑盒武漢博士德生物工程；8甲氧補骨脂素(8P)；四唑鹽(TT)試劑；等。紫外線功率測定儀上海西格瑪高技能公司；二氧化碳造就箱；長波紫外線UVA燈管；等。1.3細胞造就及分組處置懲罰細胞造就、細胞清醒、細胞傳代等實行要領，細胞擔當紫外線照耀、8P、芳維甲酸乙酯、人參皂苷Rb1等藥物處置懲罰等實行要領，確定無毒性紫外線照耀劑量、8P、芳維甲酸乙酯、人參皂苷Rb1等藥物的最正確作用濃度、選擇作用時間等實行要領，完全參照文

9、獻8舉行。詳細分組及各組處置懲罰要領：正常比擬組ntrlgrup；G；陽性比擬組asulinegrup；G：UVA+8P；維甲酸實行組artinidethylestertreatentgrup；AG：UVA+8P+芳維甲酸乙酯；人參皂苷Rb1實行組GinsensideRb1treatentgrup；GG：UVA+8P+人參皂苷Rb1。人參皂苷Rb1劑量為20，50，100g/l別離為GG1，GG2，GG3三組，作用時間為48h。1.4免疫構造化學實行SAB法表現(xiàn)各組P1和P3。步調：中性甲醛結實造就細胞20inTritn-100打孔3%雙氧水滅活內源性酶7in，蒸餾水洗抗原修復液修復抗原，水洗

10、滴加正常山羊血清滴加一抗1200孵育，pH7.3、0.01PBS洗滴加二抗1100孵育，PBS洗DAB避光顯色，鏡下操縱顯色時間蒸餾水停頓顯色，充實洗脫脫水，封片8。1.5效果不雅察與圖像闡發(fā)用光學顯微鏡對各組切片舉行形態(tài)學不雅察，并接納盲法用IS4400圖像闡發(fā)儀，在400倍下舉行圖像闡發(fā)。檢測：(1)光密度反響染色深淺；(2)陽性反響地區(qū)與陰性反響地區(qū)比值(PNarea；PNarea與反響的強度無關，代表陽性著色顆粒的相劈面積，可以反響陽性率)。均用s表現(xiàn)。2效果在光學顯微鏡下不雅察HE染色后的各組細胞，細胞密度沒有顯著的差異，細胞直徑約2035。細胞形態(tài)呈星形，有37個突起，細胞核位于細

11、胞的中心，體積較大。在HE染色條件下，細胞胞質呈弱嗜堿性。細胞四周可以看到少量纖維。在8P與紫外線作用后2h后，造就成纖維細胞漸漸出現(xiàn)細胞老化的形態(tài)學改變，表現(xiàn)為細胞體積本色性增大，胞質內出現(xiàn)一些顆粒，細胞核體積略為減小，染色漸漸加深。在免疫構造化學染色切片中，可以看到各構成纖維細胞內部P1和P3陽性產物，漫衍在細胞胞質內，呈棕黃色顆粒。其表達48h最強，然后漸漸削弱，72h漸漸規(guī)復。免疫構造化學染色圖像闡發(fā)光密度和膠厚面積效果表1所示，陽性比擬組P1和P3表達顯著加強，與比擬組之間差異有明顯性P0.05；維甲酸組、人參皂苷各組與陽性比擬組比力，差異有明顯性，表達顯著削弱P0.05；維甲酸組、

12、人參皂苷各組之間比力，差異無明顯性(P0.05)。表148h各構成纖維細胞P1和P3免疫構造化學染色光密度略與G比力，*P0.05；AG、GG1、GG2、GG3各組組間比力，P0.05；n=243討論有研究表白7，在8P與UVA的配合作用下，可敏捷誘導體外造就真皮成纖維細胞朽邁，為研究皮膚光老化提供了很好的體外造就細胞老化的實行模子。在該實行的研究效果表現(xiàn)，8P與UVA配合作用條件下，造就真皮成纖維細胞2h后，造就成纖維細胞漸漸出現(xiàn)細胞老化的形態(tài)學改變，表現(xiàn)為細胞體積本色性增大，胞質內出現(xiàn)一些顆粒，細胞核體積略為減小，染色漸漸加深。維甲酸對皮膚光老化的防治作用已被大量的研究所證明13。固然維甲

13、酸的生長和應用已經履歷了幾代，但維甲酸見光易剖析、對皮膚刺激性強、起效較慢、具有導致畸形等等缺點使其應用受到了很大的限定。芳維甲酸乙酯為第三代維甲酸的緊張代表，具有低有用劑量、副作用相對較少的特性，在臨床上已經普及用于皮膚光老化的防治。該研究以芳維甲酸乙酯作為比擬舉行研究，探究中藥人參提純品人參皂苷Rb1對皮膚真皮成纖維細胞老化的防治作用，有穩(wěn)固的實行底子和理論根據(jù)。在正常生理環(huán)境下，結締構造產生的Ps到場構造發(fā)育中的重構和構造損傷后的部門修復歷程，制止間質水解引起構造過分損傷。有研究表白，在皮膚真皮的成纖維細胞胞質內，皮膚的損傷歷程中有顯著的Ps的表達，尤其是P1和P3。在該研究的中，經紫外

14、線照耀和8甲氧補骨脂素作用后，造就成纖維細胞胞質內的P1和P3的表達顯著加強，也證明別的研究者的實行效果6，7。成纖維細胞胞質內出現(xiàn)了顯著的P1、P3的表達，以照耀后48h最強，隨后漸漸削弱，72h漸漸規(guī)復。這和Fisher等9報道的天然條件下日光照耀引起的改變一樣等。這表白Ps的表達加強大概是長波紫外線輻射損傷的緊張機制，也提示通過研究Ps失衡的機制并舉行調控，大概為防治皮膚光老化提供新的思緒。作為傳統(tǒng)珍貴中藥的人參應用于臨床已有兩千多年的汗青。其內重要含有皂苷類。人參皂苷重要有Rb1，Rb2，R，Rd，Re，Rf等單體，約莫有18種。除單體皂苷外還含有卵白質、酶類、多肽、氨基酸、人參多糖等

15、。當代醫(yī)學證明人參皂苷具有抗腫瘤、調治免疫成效增能人體外貌細胞的活力、按捺朽邁等作用。中醫(yī)臨床上應用人參治療很多疾病，都有明顯的療效，但是其作用機制尚不完全明晰。海內對人參單體和化合物舉行了一些底子性研究，特殊是近幾年有關人參皂苷的研究報道日益增多4，5。在該實行中，效果表白人參皂苷Rb1對體外造就的真皮成纖維細胞胞質內P1、P3的表達的調治作用與芳維甲酸乙酯的相似，提示人參皂苷Rb1對皮膚老化大概具有與維甲酸相似的防范和治療作用，而且其作用機制與芳維甲酸乙酯的作用機制大概雷同大概相似，與成纖維細胞胞質內的P1、P3有嚴密干系。但人參皂苷要全面應用于臨床皮膚光老化的防治，還必要舉行大量的實行研

16、究，本實行僅僅為此方面的研究提供一個新的思緒和實行基矗參考文獻：1劉仲榮，張國威，何云志，等芳維A酸乙酯對銀屑病皮損角質形成細胞凋亡和bax表達的影響J.重慶醫(yī)學，2001，302：118.2李澤桂，蔡文琴，陳活彝神經管產生與編程性細胞殞命J.剖解科學希望，1999，53：222.3魏駿.維甲酸外用治療研究希望J.中國皮膚性病學雜志，1995，94：233.4朱建明人參皂苷的抗朽邁研究希望J.中醫(yī)藥信息，1998；2：185尋曉紅人參皂苷的研究希望J.中國當代醫(yī)學雜志，2022；13(15)：436ShrthJL,urphyG,RkJ,etalFibrillindegradatinbyatrixetallprtEinases:ipliatinsfrnnetivetissueredellingBi-heJ,1999,340(Pt1):171.7HerannG,BrereisenP,lashek,etalParalenphtativatinprtesrphlgialandfuntina