1、12紫外紫外- -可見分光光度法（可見分光光度法（ultraviolet-visible ultraviolet-visible spectrophotometry,UV-Visspectrophotometry,UV-Vis）是光譜分析法中是光譜分析法中一種重要的、廣泛應用的分析方法。一種重要的、廣泛應用的分析方法。光譜分析法（光譜分析法（spectroscopic analysisspectroscopic analysis）：）：是是指利用物質與輻射能作用時所吸收或發射輻射指利用物質與輻射能作用時所吸收或發射輻射的特征和強度而建立起來的定性、定量及結構的特征和強度而建立起來的定性、定量及

2、結構分析方法。分析方法。3如原子吸收分光光度法如原子吸收分光光度法如原子發射光譜法如原子發射光譜法如紫外如紫外-可見、紅外可見、紅外如分子熒光分析法如分子熒光分析法4紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法是根據物質是根據物質分子分子對紫外對紫外或可見光區電磁輻射的或可見光區電磁輻射的吸收吸收特征和吸收程度建特征和吸收程度建立起來的分析方法立起來的分析方法紫外區波長紫外區波長200200400nm400nm 可見區波長可見區波長400400760nm760nm特點特點靈敏度、準確度高、操作簡便快速、應用廣泛靈敏度、準確度高、操作簡便快速、應用廣泛5待測物質6第一節概述一、電磁輻射和電磁波譜一、電磁

3、輻射和電磁波譜 光屬于光屬于電磁輻射電磁輻射，基本單位是光子，光，基本單位是光子，光子具有波粒二象性：子具有波粒二象性：波動性波動性7光的傳播速度：光的傳播速度：lc c真空中光速真空中光速2.997924582.9979245810108 8 m/sm/sln n折射率，真空中為折射率，真空中為1 1l波長，單位：波長，單位：m,cm,mm,m,cm,mm,m,nm,m,nm,（1=101=10-10-10 m m）l頻率，單位：赫茲頻率，單位：赫茲( (周周)Hz )Hz 次次/ /秒秒ncV8光量子，具有能量：光量子，具有能量：lh h普朗克普朗克(Planck)(Planck)常數常數

4、6.6266.6261010-34-34 Js Jsl頻率頻率lE E光量子具有的能量光量子具有的能量 單位：單位：J(J(焦耳焦耳) )，eV(eV(電子伏特電子伏特) ) 1 eV= 1.602 1 eV= 1.6021010-19 -19 J J微粒性微粒性hE9結論結論: :一定波長的光具有一定的能量，波長越一定波長的光具有一定的能量，波長越長長( (頻率越低頻率越低) )，光量子的能量越低。，光量子的能量越低。單色光：單色光：具有相同能量具有相同能量( (相同波長相同波長) )的光。的光。混合光：混合光：具有不同能量具有不同能量( (不同波長不同波長) )的光復合在的光復合在一起一起

5、. . 例如白光。例如白光。波粒二象性波粒二象性hchE射線射線 X X 射線射線紫外光紫外光可見光可見光紅外光紅外光微波微波無線電波無線電波1112第二節第二節 基本原理基本原理1.1.紫外紫外- -可見吸收光譜的形成可見吸收光譜的形成 當光通過氣態、液態或固態的物質時，當光通過氣態、液態或固態的物質時，物質分子選擇性吸收輻射，產生紫外物質分子選擇性吸收輻射，產生紫外- -可見可見吸收光譜，又稱為分子吸收光譜。吸收光譜，又稱為分子吸收光譜。 13物質分子內部三種運動狀態對應三種能級：物質分子內部三種運動狀態對應三種能級：電子繞核運動電子繞核運動（電子躍遷）（電子躍遷）電子能級電子能級E E電

6、電原子在平衡位置上振動原子在平衡位置上振動振動能級振動能級E E振振分子繞軸轉動分子繞軸轉動（分子轉動）（分子轉動）轉動能級轉動能級E E轉轉轉振電EEE遠紅外吸收光譜紅外吸收光譜可見吸收光譜紫外轉振電mevEmevEmevE2525005. 0005. 025. 125105. 025. 106. 020114電子基態電子激發態J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 115物質對不同波長的光線具有不同的吸收能物質對不同波

7、長的光線具有不同的吸收能力，物質也只能力，物質也只能選擇性地吸收選擇性地吸收那些能量相當那些能量相當于該分子于該分子振動能變化振動能變化E Ev v、轉動能變化、轉動能變化E Er r以及電子運動能量變化以及電子運動能量變化E Ee e的總和的總和E E的輻的輻射。射。由于各種物質分子內部結構的不同，分子由于各種物質分子內部結構的不同，分子的各種能級之間的間隔也互不相同，這樣就的各種能級之間的間隔也互不相同，這樣就決定了決定了物質對不同波長光線的選擇性吸收物質對不同波長光線的選擇性吸收。172.2.分子吸收光譜及其特征分子吸收光譜及其特征將不同波長的單色光依次通過一定的溶液，將不同波長的單色光

8、依次通過一定的溶液，分別測出對各種波長的光的吸收程度（用分別測出對各種波長的光的吸收程度（用A A表表示）。示）。以波長為橫坐標，吸光程度為縱坐標作圖，以波長為橫坐標，吸光程度為縱坐標作圖，所得的曲線稱為所得的曲線稱為吸收曲線吸收曲線（absorption absorption curvecurve）或）或吸收光譜吸收光譜(absorption spectrum)(absorption spectrum)。18A1920（一）有機化合物的電子躍遷類型（一）有機化合物的電子躍遷類型二、紫外可見吸收光譜與分子結構的關系21按能量大小：按能量大小： * n * * n *221. 1. * * 躍遷

9、躍遷飽和烴類（單鍵，飽和烴類（單鍵， 且都是且都是鍵）鍵）吸收光能吸收光能后多發生此類躍遷，此躍遷所需能量大，后多發生此類躍遷，此躍遷所需能量大，（大約（大約350k j /mol350k j /mol鍵）鍵）一般吸收一般吸收150 nm 150 nm 的光，屬于遠紫外區的光，屬于遠紫外區 （真空紫外區）（真空紫外區） 23nn* * 躍遷躍遷 含有含有雜原子（雜原子（O O、N N、S S、X X）的飽和烴衍）的飽和烴衍生物生物，這些雜原子上的，這些雜原子上的 n n 電子向著電子向著* * 躍躍遷。吸收波長在遷。吸收波長在200 nm200 nm左右左右 24* * 此躍遷所需能量小（約此

10、躍遷所需能量小（約200kj/mol200kj/mol鍵）吸鍵）吸收波長為收波長為200nm 200nm 左右具有左右具有碳碳碳雙鍵（三鍵）碳雙鍵（三鍵）的化合物會發生此類躍遷的化合物會發生此類躍遷孤立的孤立的* * 躍遷躍遷 吸收波長在吸收波長在160160190nm190nm左右左右. . 如如 CHCH2 2 = CH= CH2 2 maxmax=165nm =10=165nm =104 4共軛雙鍵的共軛雙鍵的* * 躍遷躍遷 由于由于 與與 鍵之間相互作用形成離域鍵，鍵之間相互作用形成離域鍵，使使* * 躍遷所需能量減小，而且共軛鍵越長躍遷所需能量減小，而且共軛鍵越長所需能量越小所需能

11、量越小 如丁二烯如丁二烯CHCH2 2=CH-CH =CH=CH-CH =CH2 2 maxmax=217nm,= 21000=217nm,= 2100025nn* * 易發生在易發生在含有雜原子的不飽和基團含有雜原子的不飽和基團中，如中，如 C=O C=O 、C=S C=S 、N=NN=N等化合物。這些雜原等化合物。這些雜原子都有未成鍵的孤電子對此類躍遷一般在子都有未成鍵的孤電子對此類躍遷一般在近紫外區（近紫外區（200-400nm200-400nm），但），但小，在小，在1010100100之間之間261 1電荷遷移躍遷（亦稱內電荷遷移躍遷（亦稱內 oxred oxred 過程）過程） 所

12、謂遷移躍遷是指用電磁輻射照射化合物時，電所謂遷移躍遷是指用電磁輻射照射化合物時，電子從給予體向接受體相聯系的軌道上躍遷，過程見下：子從給予體向接受體相聯系的軌道上躍遷，過程見下：NCH3CH3NC H3C H3+CROCRO+_CNSFeCNSFehv23（二）無機化合物的電子躍遷類型（二）無機化合物的電子躍遷類型272 2配位場躍遷配位場躍遷四、五周期中的過渡金屬元素分別有四、五周期中的過渡金屬元素分別有3d3d和和4d4d軌道，鑭系錒系分別含有軌道，鑭系錒系分別含有4f4f和和5f5f軌道，軌道， 在在配體存在下過渡元素五個能量相等的配體存在下過渡元素五個能量相等的d d軌道和軌道和鑭、錒

13、元素七個能量相等的鑭、錒元素七個能量相等的f f軌道分別分裂成軌道分別分裂成幾組能量不等的幾組能量不等的d d軌道及軌道及f f軌道軌道. . 當它當它們吸收光們吸收光能后，低能態的能后，低能態的d d電子或電子或f f電子可以分別躍遷到電子可以分別躍遷到高能態的高能態的d d軌道及軌道及f f軌道上去。軌道上去。 一定要有配體的配位場作用一定要有配體的配位場作用. .281生色團（發色團）：能吸收紫外-可見光的基團 有機化合物：具有不飽和鍵和未成對電子的基團 具n 電子和電子的基團 產生n *躍遷和 *躍遷 躍遷E較低例： CC；CO；CN；NN 2 2助色團：本身無紫外吸收，但可以使助色團

14、：本身無紫外吸收，但可以使生色團吸收峰加強同時使吸收峰長移的生色團吸收峰加強同時使吸收峰長移的基團基團有機物：連有雜原子的飽和基團有機物：連有雜原子的飽和基團例：例：OHOH，OROR，NHNH，NR2NR2，XX5紅移和藍移： 由于化合物結構變化（共軛、引入助色團取代基） 或采用不同溶劑后 吸收峰位置向長波方向的移動，叫紅移（長移） 吸收峰位置向短波方向移動，叫藍移（紫移，短移）32三、光的吸收定律（一）（一）Lambert-BeerLambert-Beer定律定律 一束單色光通過含吸光物質的溶液時一束單色光通過含吸光物質的溶液時I Ia a入射光入射光I I0 0透過光透過光I It t

15、反射光反射光I Ir rI0Ia + It + Ir Ia + It 由上式可知由上式可知,I,I0 0不變，若不變，若 I Ia a則則I It t,反之亦然反之亦然33我們把：我們把：I It t I I0 0 = = T T 稱作透光率（度）稱作透光率（度） T T 100 = T% 100 = T% 稱作百分透光率（度）稱作百分透光率（度）T T越大，表示溶液對光的吸收越少越大，表示溶液對光的吸收越少T T越小，表示溶液對光的吸收越多越小，表示溶液對光的吸收越多常用吸光度來表示物質對光的吸收程度：常用吸光度來表示物質對光的吸收程度：tIITA0lg1lg34朗伯定律朗伯定律 (1760

16、 (1760年年) :) : A=lg(IA=lg(I0 0/I/It t)=k)=k1 1b b當入射光的當入射光的,吸光物質的吸光物質的c c 一定時一定時, ,溶液的溶液的吸光度吸光度A A與液層厚度與液層厚度b b成正比。成正比。比爾定律比爾定律(1852(1852年年): ): A=lg(I A=lg(I0 0/I/It t)=k)=k2 2c c當入射光的當入射光的,液層厚度液層厚度b b一定時一定時, ,溶液的吸溶液的吸光度光度A A與吸光物質的與吸光物質的c c成正比。成正比。35朗伯朗伯- -比爾定律比爾定律式中：式中：A A：吸光度；：吸光度；: : 透射率；透射率；b b

17、：液層厚度：液層厚度( (光程長度光程長度) )，通常以，通常以cmcm為單位；為單位；c c：溶液的濃度，單位：溶液的濃度，單位molLmolL-1-1或或gLgL-1-1；K K：吸光系數：吸光系數意義意義: :當一束平行單色光通過均勻、非散射的當一束平行單色光通過均勻、非散射的溶液時，其吸光度與溶液中吸光質點的濃度和溶液時，其吸光度與溶液中吸光質點的濃度和吸收層厚度的乘積成正比吸收層厚度的乘積成正比. .KbcTIIAt1lglg036值得注意的是：值得注意的是：透過率透過率T T與與c c或或b b之間的關系是之間的關系是指數函數指數函數關系關系吸光度吸光度A A與與c c或或b b之

18、間是簡單的之間是簡單的正比例正比例關系關系37應明確定律的三個應用條件：應明確定律的三個應用條件：1 1）稀溶液（）稀溶液（C C0.01mol/L)0.01mol/L)2 2）入射光為單色光）入射光為單色光3 3）均勻介質，可以為固體、液體和氣體）均勻介質，可以為固體、液體和氣體吸光度特性吸光度特性加和性：加和性： A A總總=A=A1 1+A+A2 2+A+A3 3+A+A4 4.38吸光系數（AbsorptivityAbsorptivity）cbAabcA bcEA1%1cmMaE 10 101%1cm 39摩爾吸光系數 物理意義：物理意義： 當一定波長的單色光通過濃當一定波長的單色光通

19、過濃度為度為1mol/L1mol/L， 吸收池厚度為吸收池厚度為1cm1cm的溶液時測得的吸的溶液時測得的吸光度。光度。入射波長不同，入射波長不同， 不同不同溶劑不同，溶劑不同， 不同不同物質性質不同，物質性質不同， 不同不同氯仿465可作為定性依據可作為定性依據41（二）二）的的因因素素偏偏離離B Be ee er r定定律律正偏離正偏離負偏離負偏離42 非單色光指的是包含一定波長范圍的有限非單色光指的是包含一定波長范圍的有限寬度的譜帶，是以寬度的譜帶，是以（中心吸收波長）為（中心吸收波長）為中心的一狹窄波長范圍的復合光，對于帶寬中心的一狹窄波長范圍的復合光，對于帶寬為為（即圖中的（即圖中的

20、）的單色）的單色光，測得的吸光度一般小于光，測得的吸光度一般小于處的真實吸處的真實吸光度值，從而產生負偏離。光度值，從而產生負偏離。43 若樣品不吸收若樣品不吸收 I IS S 則（則（I I0 0+I+I s s）（）（I+II+Is s）I I0 0I I， 使使A A若樣品吸收若樣品吸收 I IS S ，則反之，則反之，。StSIIIIA0lg44）溶液濃度的影響）溶液濃度的影響45）體系（介質）不均勻的影響）體系（介質）不均勻的影響根據定律的應用條件之三（即均勻介質），根據定律的應用條件之三（即均勻介質），一般真溶液質點小，對光的散射不特別厲害，一般真溶液質點小，對光的散射不特別厲害，

21、但混濁液散射比較突出。但混濁液散射比較突出。解決的辦法：用空白做對比。解決的辦法：用空白做對比。第三節紫外- -可見分光光度計一、分光光度計的主要部件一、分光光度計的主要部件47( (可見光區，可見光區，3203202500 nm)2500 nm)( (紫外區，紫外區，180180375 nm)375 nm)、 氙燈氙燈（紫外、可見光區均可用作光源）（紫外、可見光區均可用作光源）4849單色器作用：將光源輻射的復合光按波的長短順序色作用：將光源輻射的復合光按波的長短順序色散為單色光散為單色光包括包括狹縫、準直鏡、色散元件狹縫、準直鏡、色散元件1)1)狹縫狹縫入口狹縫：限制雜散光的進入入口狹縫：

22、限制雜散光的進入出口狹縫：讓色散后所需波長的光通過。出口狹縫：讓色散后所需波長的光通過。2 2）準直鏡（透鏡或反射鏡）準直鏡（透鏡或反射鏡）把來自入口狹縫的發散光變成平行光把來自入口狹縫的發散光變成平行光把來自色散元件的平行光聚焦于出口狹縫。把來自色散元件的平行光聚焦于出口狹縫。503 3）色散元件）色散元件常用的色散元件有常用的色散元件有三角棱鏡和光柵三角棱鏡和光柵棱鏡棱鏡：依據不同波長光通過棱鏡時折射率不同：依據不同波長光通過棱鏡時折射率不同51光柵光柵在鍍鋁的玻璃表面刻有數量很大的等寬度等間距在鍍鋁的玻璃表面刻有數量很大的等寬度等間距條痕條痕(600(600，12001200，24002

23、400條條/mm )/mm )，利用光通過光，利用光通過光柵時發生衍射和干涉現象而分光。柵時發生衍射和干涉現象而分光。優點：波長范圍寬優點：波長范圍寬, , 色散均勻色散均勻, ,分辨性能好分辨性能好, , 使使用方便用方便523吸收池又名又名: : 比色皿比色皿，用于盛待測及參比溶液，用于盛待測及參比溶液玻璃玻璃能吸收能吸收UVUV光，僅適用于可見光區光，僅適用于可見光區石英石英不能吸收紫外光，適用于紫外和可見不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區光區要求：匹配性（對光的吸收和反射應一致）要求：匹配性（對光的吸收和反射應一致）534檢測器作用：是檢測通過溶液后的透過光強度作用：是檢測通過溶液后

24、的透過光強度（光信號，并把光信號轉變成電信號）（光信號，并把光信號轉變成電信號）光電管）光電管銻銫作陰極：紫敏銻銫作陰極：紫敏（2002006 625nm)25nm)銀氧化銀：紅敏銀氧化銀：紅敏（625 625 1000nm)1000nm)90V DC直流放大直流放大陰極陰極R-+光束光束e陽極絲（陽極絲（Ni）抽真空抽真空54）光電倍增管（）光電倍增管（photomultiplier tube, PMTphotomultiplier tube, PMT） 石英套石英套光束光束柵極，柵極，Grill陽極陽極屏蔽屏蔽光電倍增管的放大倍數，主要取決于電極間的電壓。光電倍增管的放大倍數，主要取決于電

25、極間的電壓。55二、分光光度計的類型56單波長單光束分光光度計單波長單光束分光光度計57582 2單波長雙光束分光光度計單波長雙光束分光光度計596061雙波長分光光度計雙波長分光光度計6263三種分光光度計的區別第四節 分析條件的選擇一、溶劑選擇一、溶劑選擇1.1.考慮溶劑的截止波長考慮溶劑的截止波長截止波長截止波長：用：用1cm 1cm 光徑的吸收池裝溶劑，用光徑的吸收池裝溶劑，用空氣為參比，改變照射波長，當吸光度空氣為參比，改變照射波長，當吸光度A Al l時，此時的波長稱為該溶劑的截止波長。時，此時的波長稱為該溶劑的截止波長。在選擇測量波長時注意：溶劑必須能讓所選在選擇測量波長時注意：

26、溶劑必須能讓所選擇的光透過，即所選波長不能小于溶劑的最擇的光透過，即所選波長不能小于溶劑的最低使用波長（低使用波長（截止波長）截止波長）。652.2.考慮溶劑的極性考慮溶劑的極性溶劑的極性對物質的吸收峰位置的影響不同溶劑的極性對物質的吸收峰位置的影響不同 當極性增加時，當極性增加時， * *的吸收峰的吸收峰發生長移（紅移）發生長移（紅移）nn* *的吸收峰的吸收峰發生短移（藍移、紫移）發生短移（藍移、紫移）66二、顯色反應條件的選擇二、顯色反應條件的選擇（一）顯色反應及要求（一）顯色反應及要求1.1.顯色反應顯色反應顯色劑顯色劑：能與無色物質生成有色物質的試：能與無色物質生成有色物質的試劑劑顯

27、色反應顯色反應：將被測組分轉變成有色物質的：將被測組分轉變成有色物質的反應反應常見的顯色反應常見的顯色反應：配位、偶合、氧化還原：配位、偶合、氧化還原反應反應67顯色反應的要求顯色反應的要求靈敏度高靈敏度高，一般，一般 10 104 4; ;選擇性好選擇性好，干擾少；，干擾少；對照性好對照性好：顯色劑在測定波長處無明顯吸：顯色劑在測定波長處無明顯吸收收, , max 60 nm;max 60 nm;反應生成的有色化合物反應生成的有色化合物組成恒定，穩定組成恒定，穩定; ;顯色條件易于控制，顯色條件易于控制，重現性好重現性好68（二）顯色反應條件的選擇（二）顯色反應條件的選擇顯色劑的用量：顯色劑

28、的用量： M M + + R R MR MR （待測物）（顯色劑）（待測物）（顯色劑） （有色物）（有色物）69. .溶液的酸度溶液的酸度1 1）酸度對顯色劑顏色的影響）酸度對顯色劑顏色的影響許多有機顯色劑本身就是酸堿指示劑，當許多有機顯色劑本身就是酸堿指示劑，當溶液酸度改變時，顯色劑本身就有顏色變化溶液酸度改變時，顯色劑本身就有顏色變化2 2）酸度對顯色反應的影響）酸度對顯色反應的影響 70(3)(3)酸度對金屬離子存在狀態的影響酸度對金屬離子存在狀態的影響羥基配合羥基配合物、多核羥基配合物、堿式鹽或氫氧化物沉物、多核羥基配合物、堿式鹽或氫氧化物沉淀淀，713 3顯色溫度顯色溫度當溫度升高：

29、當溫度升高：72A4 4顯色時間顯色時間. .干擾的消除（樣品成份較復雜時）干擾的消除（樣品成份較復雜時）消除辦法有：消除辦法有：）加入配合掩蔽劑）加入配合掩蔽劑）加入氧化劑或還）加入氧化劑或還原劑原劑）選擇適宜的顯色）選擇適宜的顯色條件，控制酸度條件，控制酸度）分離干擾離子）分離干擾離子7374二、測量條件的選擇（一）測量波長的選擇（一）測量波長的選擇 1 1）maxmax吸光度大，靈敏度高吸光度大，靈敏度高 2 2）若）若maxmax處有干擾，只能遵循處有干擾，只能遵循“吸收大，吸收大，干擾小干擾小”的原則，可選另一靈敏度稍低但的原則，可選另一靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長。能避免干擾

30、的入射光波長。75（二）吸光度讀數范圍的選擇（二）吸光度讀數范圍的選擇光度誤差：指的是讀數誤差為單位百分透光度誤差：指的是讀數誤差為單位百分透光度（光度（T%T%= =1% 1% ）時所引起的濃度相對）時所引起的濃度相對誤差（誤差（CCC C）分光光度計的讀數標尺：分光光度計的讀數標尺：76由于由于T T 與濃度與濃度c c 不是線性關系，故不同濃不是線性關系，故不同濃度時的儀器讀數誤差度時的儀器讀數誤差T T引起的測量誤差引起的測量誤差c/cc/c不同不同。其中：其中：TT為透光率讀數誤差為透光率讀數誤差 T T 為透光率為透光率大多數分光光度計的大多數分光光度計的TT在在0.002 0.0

31、02 0.01 0.01 之間。之間。TTTCClg434.077在用分光光度計進行比色測定時，最好控制在：在用分光光度計進行比色測定時，最好控制在： 在在 15%15%65%65% A A在在 0.80.80.2 0.2 之內讀數比較合適之內讀數比較合適而當而當36.8% ( T=0.368) 36.8% ( T=0.368) A = 0.4343A = 0.4343時，誤差最小時，誤差最小78（三）參比溶液（三）參比溶液(reference solution)(reference solution) 的選擇的選擇也稱也稱空白溶液空白溶液(blank solution)(blank solu

32、tion) ，作用是調，作用是調節透光度為節透光度為100%,100%,吸光度吸光度有下列幾種，應合理選擇：有下列幾種，應合理選擇：）溶劑參比：當溶液中只有待測組分在測定）溶劑參比：當溶液中只有待測組分在測定波長下有吸收，而其他組分均無吸收時，波長下有吸收，而其他組分均無吸收時，可用可用純溶劑作參比溶液，稱為純溶劑作參比溶液，稱為“溶劑空白溶劑空白”。79）試劑參比：）試劑參比：如果除待測組分外，顯色劑和其它試劑如果除待測組分外，顯色劑和其它試劑在測定條件下也有吸收時，則取與測定試液在測定條件下也有吸收時，則取與測定試液時所用的時所用的顯色劑和其它試劑作為參比溶液顯色劑和其它試劑作為參比溶液（

33、只是不加待測組分）（只是不加待測組分）試樣參比：）試樣參比：如果只是試樣基體有色，而顯色劑無色，如果只是試樣基體有色，而顯色劑無色，并且也不與試樣基體顯色，則用并且也不與試樣基體顯色，則用不加顯色劑不加顯色劑的試樣溶液作為參比溶液的試樣溶液作為參比溶液80）平行操作空白：）平行操作空白：在測量波長下，干擾組分與顯色劑有反應在測量波長下，干擾組分與顯色劑有反應, ,又無法掩蔽消除時：又無法掩蔽消除時：掩蔽被測組分，再加入顯色劑掩蔽被測組分，再加入顯色劑, ,作參比作參比. .加入等量干擾組分到空白溶液中加入等量干擾組分到空白溶液中, ,作參比作參比. .81第五節定性與定量分析一、定性分析一、定

34、性分析1.1.定性鑒別的依據：定性鑒別的依據：光譜特征（光譜形狀光譜特征（光譜形狀, ,吸收峰吸收峰數目，吸收峰的波長位置，強度和吸收系數等）數目，吸收峰的波長位置，強度和吸收系數等）2.2.定性分析方法缺陷：定性分析方法缺陷：82定性鑒別的方法：對比法定性鑒別的方法：對比法1 1）對比吸收光譜的一致性）對比吸收光譜的一致性83min%11maxmax，shcmE84二、定量分析及應用示例二、定量分析及應用示例（一）定量分析方法（一）定量分析方法標準曲線法標準曲線法 前提：固定儀器和測定條件前提：固定儀器和測定條件CACKA樣樣同上條件固定條件查得測定樣品曲線分別測定配制標準系列過程：CAAC

35、A85例：例：標液：分別移取標液：分別移取0.02000mg/ml0.02000mg/ml標樣標樣0 05ml25ml5ml25ml供試液：樣品供試液：樣品25mg25ml25mg25ml9996. 0r162. 10105. 0CA或求出回歸方程：86直接比較法（對照法，外標一點法）直接比較法（對照法，外標一點法）前提：固定儀器和測定條件前提：固定儀器和測定條件 截距為截距為0 0 標樣與樣品濃度相近標樣與樣品濃度相近過程：過程：一定一定分別測定分別測定A A樣樣和和A A標標計算：計算：標樣標樣標樣標樣AACCAACCC CC C練習例：維生素例：維生素B B1212 的水溶液在的水溶液在361nm361nm處的百分吸光處的百分吸光系數為系數為207207，用，用1cm1cm比色池測得某維生素