1、藥物的含量測定藥物的含量測定是指測定藥物中所含的主成分的量，是指測定藥物中所含的主成分的量，目的目的:判斷藥物的優劣。判斷藥物的優劣。定定義義第四章第四章 藥物的含量測定方法藥物的含量測定方法 化學分析法 重量分析容量分析含量測含量測定定儀器分析法儀器分析法效價測定效價測定（生物學法）（生物學法）可見紫外分光高效液相色譜法氣相色譜法藥物的含量測定藥物的含量測定容量分容量分析法析法三種三種分析分析方法方法光譜分光譜分析法析法色譜分色譜分析法析法特點特點操作簡單、結果準操作簡單、結果準確，耐用性高，但確，耐用性高，但專屬性差專屬性差特點特點特點特點簡便快速、靈敏度簡便快速、靈敏度高，有一定的準確高

2、，有一定的準確度，但專屬性稍差度，但專屬性稍差靈敏度與專屬性都高，靈敏度與專屬性都高，有一定的準確度，但結有一定的準確度，但結果需要對照品果需要對照品適用于準確適用于準確度與精確度度與精確度要求較高的要求較高的樣品測定樣品測定適用于靈敏度適用于靈敏度要求較高，樣要求較高，樣本量較大的分本量較大的分析項目析項目適用于專適用于專屬性和靈屬性和靈敏度要求敏度要求較高的復較高的復雜樣品雜樣品第一節第一節 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點容量分析法容量分析法定定義義將已知濃度的滴定液，由滴定管滴加到被將已知濃度的滴定液，由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物測藥物的溶液中，

3、直至滴定液與被測藥物反應完全，然后根據滴定液消耗的濃度和反應完全，然后根據滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學計量關系式計算出被消耗的體積，按化學計量關系式計算出被測藥物的含量。被測藥物的含量。亦稱亦稱滴定法滴定法特點特點1.方法簡便易行：儀器價廉易得，操作簡便快速方法簡便易行：儀器價廉易得，操作簡便快速2.方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環境因素少方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環境因素少3.測定結果準確：誤差低于測定結果準確：誤差低于0.2%4.方法專屬性差：對相近雜質干擾缺少選擇，適用方法專屬性差：對相近雜質干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品于主成分含量較高的樣品(如原料藥如

4、原料藥)分析分析第一節第一節 定量分析方法定量分析方法容量分析法有容量分析法有關計算關計算例例:用碘量法測定維生素用碘量法測定維生素C的含量的含量時，時，中國藥典中國藥典規定：每規定：每1ml碘碘滴定液（滴定液（0.05mol/L）相當于）相當于8.806mg的維生素的維生素C（C2H8O6）T(T(滴定度滴定度):1ml):1ml滴定液滴定液(m mol/L)(m mol/L)相當于被測藥物的毫克數相當于被測藥物的毫克數dDcCbBaA被測藥物被測藥物 滴定液滴定液Mbam)ml/mg(T藥物分藥物分子量子量滴定液滴定液濃度濃度滴定度的滴定度的計算計算示例一 計算VitC的滴定度T碘量法測定

5、VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LHI2OHCIOHC6662686Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0511176.13=8.806(mg/ml)m=0.05mol/L11M=176.13示例二 異煙肼的滴定度溴酸鉀法測定異煙肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸鉀溴酸鉀=0.01667mol/LOH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0166732137.14=3.429(mg/ml)ab取用取用倍數倍數濃度校濃度校正因數正因數滴定滴定度度消耗消耗體積體積例例

6、:VitC的含量測定的含量測定:精密稱取本品精密稱取本品0.1332g,置錐形置錐形瓶中瓶中,加稀醋酸與新沸過的冷蒸餾水的混合液加稀醋酸與新沸過的冷蒸餾水的混合液(1:10)110ml, 加淀粉批示液加淀粉批示液1ml,用碘滴定液用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至藍色滴定至藍色,用去用去15.02ml,每每1ml的的碘液碘液(0.05mol/L)相當于相當于8.806mg C6H8O6，計算本計算本品是否符合藥典規定的含量限度。藥典規定含品是否符合藥典規定的含量限度。藥典規定含C6H8O6 不得低于不得低于99.0%。濃度校濃度校正因數正因數滴定滴定度度消耗消耗體積體積F=實際實際C

7、規定規定C計算步驟計算步驟=99.57%= 1又例 非那西丁含量測定 精密稱取本品精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流加稀鹽酸回流1小時后，放冷，小時后，放冷，用亞硝酸鈉滴定液用亞硝酸鈉滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。每。每1ml1ml亞硝酸鈉液亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當于相當于17.92mg的的C10H13O2N，請計算非那西丁的含量。，請計算非那西丁的含量。%72.9910010003630.01 .01010.000.2092.17%非那西丁需做空白試驗的計算公式例例:萘普生的含量測定：精密稱取本品萘普生的含量測定：精密稱取本品0.4960g

8、，加甲醇，加甲醇45ml溶解后，再加水溶解后，再加水15ml與酚酞指示劑與酚酞指示劑3滴，用滴，用NaOH滴定液（滴定液（0.1078mol/L）滴定，同時用空白試驗校正，求）滴定，同時用空白試驗校正，求萘普生百分含量。萘普生百分含量。中國藥典中國藥典規定每規定每1ml NaOH滴定滴定液（液（0.1mol/L）相當于）相當于23.03mgC14H14O3。按干燥品計算，。按干燥品計算，含含C14H14O3不得少于不得少于98.5%。滴結果如下：。滴結果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重，干燥失重=0.40%。光譜分析法光譜分析法藥典藥典收載收載紫外可見紫外可見分光度法分光

9、度法原子吸收分原子吸收分光光度法光光度法紅外分光紅外分光度法度法熒光分析熒光分析法法火焰光度火焰光度法法二、光譜分析法二、光譜分析法紫外可紫外可見分光見分光度法度法基于物質對紫外區基于物質對紫外區(200400nm)和可見光和可見光區區(400760nm)的單色的單色光輻射建立起來的光譜光輻射建立起來的光譜分析法分析法朗伯朗伯-比爾定律比爾定律基基礎礎EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可見紫外可見分光度法分光度法方法特方法特點與適點與適用范圍用范圍1.簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及作簡單，易于普及2.靈敏度高

10、：適用于低濃度試樣分析靈敏度高：適用于低濃度試樣分析3.準確度較高：本法誤差在準確度較高：本法誤差在2%5%之間，適用之間，適用于對測定結果的準確度要求較高的樣品于對測定結果的準確度要求較高的樣品4.專屬性較差：本法通常不受一般雜質的干擾，專屬性較差：本法通常不受一般雜質的干擾，但對結構相近的有關物質缺乏選擇性。但對結構相近的有關物質缺乏選擇性。本法比較少應用于本法比較少應用于原料藥的含量測定，原料藥的含量測定，可用于制劑的含量可用于制劑的含量測定，更多的應用測定，更多的應用于生物制劑的定量于生物制劑的定量檢查檢查本法紫外區須選用本法紫外區須選用石英比色皿，比色石英比色皿，比色皿一般為皿一般為

11、1cm，吸，吸光度在光度在0.30.7之之間為宜，選用最大間為宜，選用最大吸收光波長。吸收光波長。紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法3種種方方法法對照品對照品比較法比較法吸收系吸收系數法數法計算光計算光度法度法(少用少用)紫外可見分光度紫外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法1.對照品對照品比較法比較法分別配制供試品溶液和對照品溶液分別配制供試品溶液和對照品溶液, 所用溶劑量兩者相所用溶劑量兩者相同同,在規定的波長下測定吸光度在規定的波長下測定吸光度.按下式計算結果按下式計算結果;,;對應吸光度對照品溶液濃度供試品溶液濃度RxRxRRxxAACCACAC紫外可見分光度紫

12、外可見分光度法含量測定方法法含量測定方法2.吸收吸收系數法系數法吸收系數法吸收系數法:引入吸光系數引入吸光系數的含量計算方法的含量計算方法100EAC%1cm1xx含量含量% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供供（ ）標標藥典藥典記載記載例例 已知已知VitB12在在361nm處的百分吸收系數為處的百分吸收系數為207，現測得其水溶液的吸收度為，現測得其水溶液的吸收度為0.414，吸收，吸收池厚度為池厚度為1cm，求其濃度。，求其濃度。解：解：C=A L1%1cmE= = 0.00200( ) 0.4142071g/100ml單位單位?例例精密稱取精密稱取VitB12供試品供試品25.0mg

13、，加水溶解并稀釋，加水溶解并稀釋制成制成1000mL，于，于1cm厚的吸收池中，在厚的吸收池中，在361nm處測處測得吸收度為得吸收度為0.507，已知其百分吸收系數為，已知其百分吸收系數為207，求其，求其百分含量。百分含量。解：解：C= m/V = 2510-3/1000（g/ml）= （g/100ml） 2.510- 3 1%1cmE( ) 供供= A / CLVitB12% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供供（ ）標標= 202.8/207 = 97.97%= 0.507 / (2.510-31) 用用A算出（算出（ ）供供 ，再用其與已知（，再用其與已知（ ）標標 比值比值 1%

14、1cmE1%1cmE= 202.8例例用用UV法測定對乙酰氨基酚的含量：精密稱取本品法測定對乙酰氨基酚的含量：精密稱取本品0.0410g，置，置250ml量瓶中，加量瓶中，加0.4%NaOH溶液溶液50ml,溶解后溶解后,加水于刻度加水于刻度,搖勻。精密量取搖勻。精密量取5ml,置置100ml量瓶量瓶中中, 加加0.4%NaOH溶液溶液10ml,溶解后溶解后,加水至刻度加水至刻度,搖勻。搖勻。在在257nm處測得吸收度為處測得吸收度為0.580，按其百分吸收系數，按其百分吸收系數715計算，求其百分含量。計算，求其百分含量。解：解：C= m/V = （g/100ml） 8.210- 4 1%1

15、cmE( ) 供供= A / CLVitB12% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供供（ ）標標= 707.3/715 = 98.93%= 0.580 / 8.210-4= 707.3特點： 靈敏度高，可達10-1010-12g/ml 要求低濃度下測定 須做空白測定 熒光弱的藥物可衍生化后測定( (二二) )熒光分析法熒光分析法rbrrxbxxCRRRRC( (三三) )色譜分析法色譜分析法1.HPLC1.1 內標法 RRssC/AC/Af 校正因子As：內標物質峰面積或者峰高AR: 對照品的峰面積或者峰高Cs: 內標物質濃度CR：對照品濃度兩步兩步: (1)測測f; (2)測含量測含量(1

16、)測測f (用標準品與內標物用標準品與內標物)SSxxC/AAf)C(含量As：內標物質峰面積或者峰高Ax: 供試品的峰面積或者峰高Cs: 內標物質濃度f：校正因子(2)測含量測含量(用樣品與內標物用樣品與內標物)示例一 炔諾酮的含量測定 照高效液相色譜法照高效液相色譜法( (附錄附錄DD測定測定) )色譜條件與系統適用性試驗色譜條件與系統適用性試驗 用用十八烷基硅烷鍵十八烷基硅烷鍵合硅膠合硅膠為填充劑；以甲醇為填充劑；以甲醇- -水水(65:35)(65:35)為流動相，為流動相，檢測波長為檢測波長為244nm244nm。理論塔板數理論塔板數按炔諾酮峰計算按炔諾酮峰計算不低于不低于15001

17、500，炔諾酮峰與內標物質峰的，炔諾酮峰與內標物質峰的分離度分離度及及主成分峰后一雜質峰與主成分峰的分離度均應符主成分峰后一雜質峰與主成分峰的分離度均應符合要求。合要求。內標溶液的制備內標溶液的制備 取黃體酮約取黃體酮約25mg25mg，精密稱定，精密稱定，置置25ml25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。測定法測定法 取本品約取本品約25mg25mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml25ml量瓶中，量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液液2ml2ml與內標溶液與內標溶液3ml3ml，置，置10ml10

18、ml量瓶中，加甲醇稀量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取釋至刻度，搖勻，取2020l l注入液相色譜儀，記錄注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對照品適量，色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對照品適量，精密稱定，同法測定。按內標法以峰面積計算，精密稱定，同法測定。按內標法以峰面積計算，即得。即得。對照品對照品樣品測得量WA/A/ArrssA例例HPLC法測定磺胺嘧啶的含量法測定磺胺嘧啶的含量對照品對照品+內標溶液配制：精密稱取對照品內標溶液配制：精密稱取對照品50.0mg，置，置50ml量瓶量瓶中，加甲醇稀釋至刻度中，加甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取搖勻。精密量取5ml,置置25ml量

19、瓶中量瓶中, 精密精密加內標溶液加內標溶液(0.20mg/ml)5ml,加流動相至刻度加流動相至刻度,搖勻。搖勻。供試品供試品+內標溶液配制：精密稱取本品內標溶液配制：精密稱取本品50.5mg，照上法配制。，照上法配制。取上述兩種溶液各取上述兩種溶液各10l進樣，測得對照品和內標峰分別為進樣，測得對照品和內標峰分別為1350和和1040，供試品峰和內標峰分別為，供試品峰和內標峰分別為1313和和1013。求。求SD的含量。的含量。解：由于對照品和供試品稀釋倍數相同，所以直接按質量代解：由于對照品和供試品稀釋倍數相同，所以直接按質量代替濃度計算替濃度計算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/

20、mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之解之,得得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%2.外標法外標法含量(Cx)=CRAxARRRssC/AC/Af 校正因子SSxxC/AAf)C(含量(二二) GC內標法內標法不經有機破壞經有機破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定酸水解堿水解經還原分解后測定濕法破壞凱氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法( (一一) )、直接測定法、直接測定法 葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 鄰二氮菲鄰二氮菲- -硫酸鈰滴定硫酸鈰滴定 葡萄酸

21、銻鈉葡萄酸銻鈉 間接碘量法間接碘量法( (二二) )、經水解后測定法、經水解后測定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結合不牢固的有機金屬藥物。1 1、堿水解法、堿水解法344332334)(NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl3223 回回流流三氯叔丁醇銀量法返滴定2 2、酸水解法、酸水解法適用范圍：含鹵素有機藥物結構中鹵素原子結合不牢固的藥物。十一烯酸氯化鋅十一烯酸鋅稀鹽酸EDTA配位滴定( (三三) )、經還原分解后測定法、經還原分解后測定法適用范圍：碘原子直接與芳環連接的

22、含碘有機化合物。COOHIIINHCOCH3CH3COHN+11NaOH+COOHNH2H2N+ +2CH3COONa+3Na2ZnO2+NaI+AgNO3AgI3Zn3NaOH3H2O+ NaNO3回流泛影酸泛影酸3NaI3NaI三、經有機破壞的分析方法三、經有機破壞的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機合成藥物測定的前處理和生物制品中金屬元素測定時生物基質的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑凱氏定氮法測定含有氨基和酰胺結測定含有氨基和酰胺結構的藥物結構構的藥物結構( (一一)

23、)濕法破壞濕法破壞原 理 將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機結構被中有機結構被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有機結合的氮轉，有機結合的氮轉化為無機氮，與過量的硫酸結合為硫酸氫銨和硫酸銨，化為無機氮，與過量的硫酸結合為硫酸氫銨和硫酸銨，經堿化經堿化后后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg凱氏燒瓶K2SO4( (提高消解溫度提高

24、消解溫度) )CuSO4( (加快消解速度加快消解速度) )硫酸硫酸堿液堿液硼酸硼酸( (吸收液吸收液) )甲基紅甲基紅- -溴甲酚綠指示劑溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正先用強先用強酸水解酸水解再用含堿硫代硫再用含堿硫代硫酸鈉中和酸鈉中和最后用堿釋放出氨最后用堿釋放出氨氣氣 ，并蒸餾出之，并蒸餾出之( (二二) )干法破壞干法破壞1.高溫灼燒法高溫灼燒法用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。2.氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法 系指將含有待測元素的有機藥物置于充滿氧氣的密系指將含有待測元素的有機藥物置于充滿氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機結

25、構部分徹底閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機結構部分徹底分解為分解為COCO2 2和和H H2 2O O，待測元素根據電負性的不同轉化為不，待測元素根據電負性的不同轉化為不同價態的氧化物，被吸收于適當的吸收液中，再根據同價態的氧化物，被吸收于適當的吸收液中，再根據其性質和存在方式選擇方法進行分析。其性質和存在方式選擇方法進行分析。燃燒時待測物轉化成不同價態燃燒時待測物轉化成不同價態的無機物以供測定的無機物以供測定 濾紙包濾紙包裝樣品裝樣品藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則藥物穩定性試驗指導原則緩釋、控釋制劑指導原則微囊、微球與脂質體制劑指導原則細菌內毒素檢查法應用指導原則目的： 證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求效能指標： 評價分析方法的尺度評價分析方法的尺度 效能指標包括: 精密度精密度, , 準確度準確度, , 檢測限檢測限, ,定量限定量限, ,選擇性選擇性, , 線性與線性與范圍范圍, , 耐用性耐用性一、準確度（一、準確度（accuracy） 系指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度。( (一一) )含量測定方法含量測定方法%100(%)%100(%)加入量本底量測得量回收率加入量測得量回收率回收率(Recovery)回收試驗加樣回收試驗33，至少9個測定結果二、精密度二、精密度