1、畢赤醉母發醉罐發酹精品文檔微生物發酪罐發酪（畢赤酪母）滅菌前：室溫下校準PH電極，先校6.86零點再4.0斜率（若的發酵pH很長時間是酸性的（如酵母發酵）用6.86校正零點，4.0校正斜率；若你的發酵pH很長時間是堿性的（如某些細菌發酵）用 6.86校正零點，9.18校正斜率）；室溫下校準溶氧電極，1.0點在不接溶氧電極時候標定，100%點接上溶氧電極，放置在空氣中較定；或2.0點在滅菌過程中，溫度達到121度左右壓力0.12mpa左右時候標定，100%在滅菌結束，降溫至發酵溫度并穩定，轉速在發酵初始轉速，通氣量在發酵初始通氣量時候標定滅菌:1 .滅菌，先將各排氣閥打開，將蒸汽引入夾套或蛇管進

2、行預熱，待罐溫升至 8090C,將排氣閥逐漸關小。接著將蒸汽從進氣口、排料口、取樣口直接通入 罐中（如有沖視罐也同時進汽），使罐溫上升到118120C,罐壓維持在0.090.1Mpa （表壓）,并保持30min左右。2 .保溫結束后，依次關閉各排汽、進汽閥門，待罐內壓力低于空氣壓力后，向罐內通入無菌空氣，在夾套或蛇管中通冷卻水降溫，使培養基的溫度降到所需 的溫度，進行下一步的發酵和培養。（注意壓力：滅菌時，總蒸汽管道壓力要求不低于 0.30.35Mpa,使用壓力不 低于0.2Mpa滅菌后：A.消耗甘油階段1 .滅菌后冷卻30c時:2 .冷卻至30c時，開啟攪拌（轉速最大）和通氣（0.1-1.0

3、vvm），接通28%R水（未稀釋）調PH5.0;每升加4.35ml的無菌PTM1S礎鹽；3 .從搖瓶中接種種子液，DOfi為100%開始培養后會消耗，導致 DO值下降，通氧氣以確保DO值超過20%,速率先為0.1vvm。4 .發酵過夜甘油被完全消耗（18-24h）,標志為DO值增加到100%?！久刻熘辽賰纱稳?，測OD600,濕重，顯微觀察.將菌體和上清（離心后）在-80C下保藏，用于后面的分析?！? .這個階段所期望達到的細胞產量為90-150g/L濕細胞。重組蛋白質不產生。B.甘油補料階段1 .將12ml/L PTM1加入50%VVM的甘油中，將補料速率設為 18.15ml每小時每 升初試

4、發酵液體積。2 .甘油補料將進行約4h或更長。在本階段完成后 細胞產量應達到180-220g/L濕 細胞，但是不會有重組蛋白質的產生?！?%甘油的是所建議的在補料中的最大水平，更高的甘油濃度將會產生毒害問題?！恐匾?如果溶氧低于20%,應該停止甘油或甲醇的補料并且不做任何提高溶氧的 事直到溶氧穩定。這時開始調整攪拌、通氣、壓力或氧氣的補充。有報道稱如果培養基的 pH低于30,中性蛋白酶會被抑制。故如果有必要可設 為3.0保持4-5h甘油補料階段。甲醇補料培養在甲醇補料前甘油都必須消耗干凈。1.12mlPTM1基本鹽類每升的100%的甲醇進行誘導。速率為3.6ml/h每升初試發酵液體積。開始的2

5、-3h內甲醇會在發酵液中累積，溶氧值會有變化。2 . DO值不能維持在20%以上，停止流加甲醇，等到DO值穩定后繼續以當前速率流加甲醇。增加攪拌、通氣、壓力或者氧氣的 補充來使DO維持在20%以 上。do值會一直變化。件3 .當培養物完全適應利用甲醇 （2-4h）并且甲醇成為其限制性生長因子后，將會 有一個穩定的DO讀數和一個較快的DO穩定時間點（通常不到1min）。在培 養物適應甲醇后而將流加速率翻倍前在限制條件下保持這個較低的流加速率最少出。然后流加速率增加一倍到約7.3mji/h而而始發酉臉衛A2h）4 .調10.9 ml/h到最后。5 .一共加入接近740ml,約70h。細胞濃度會最終增加到 350-450g/L濕細胞。YPD（100ml）酵母膏是1g,蛋白陳2g,葡萄糖2g。若固體，再加2g瓊脂粉。自然pH值約5.4,剛好是酵母合適的pH值。一般不需要調節pH。LB胰蛋白(T (Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract)5g/L氯化鈉(NaCl) 10g/LNaOH 調節