1、.溶血性鏈球菌實驗活動生物安全危害風險評估報告溶血性鏈球菌所有的實驗活動均應在BSL-2 實驗室操作一、評估對象及分類等級1溶血性鏈球菌（ Streptococcushemolyticus ）細菌又稱乙型溶血性鏈球菌（ - hemolyticus Streptococcus）和化膿性鏈球菌（Streptococcuspyogrnes ），是鏈球菌按照是否產生溶血和溶血性質分類，在血平板上產生24mm寬的透明溶血環的一類鏈球菌，可引起人類及靈長類動物多種疾病。2 根據中華人民共和國傳染病防治法 ，由溶血性鏈球菌引起的傳染病列為乙類傳染病。3 在衛生部公布的人間傳染的病原微生物名錄中溶血性鏈球菌被

2、列為第三類病原微生物。二、背景資料1一般生物學特性1 1形態染色鏈球菌呈球形或橢圓形，直徑0.6- 1.0 m，呈鏈狀排列，長短不一，從 4-8 個至 20-30 個菌細胞組成不等，鏈的長短與細菌的種類及生長環境有關。在液體培養基中易呈長鏈， 固體培養基中常呈短鏈， 由于鏈球菌能產生脫鏈酶，所以正常情況下鏈球菌的鏈不能無限制的延長。多數菌株在血清肉湯中培養2-4h 易形成透明質酸的莢膜，繼續培養后消失。該菌不形成芽胞，無鞭毛，易被普通的堿性染料著色， 革蘭氏陽性， 老齡培養或被中性粒細胞吞噬后， 轉為革蘭氏陰性。12培養特性需氧或兼性厭氧菌， 營養要求較高， 普通培養基上生長不良， 需補充血清

3、、血液、腹水，大多數菌株需核黃素、維生素 B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為 37，在 20-42 能生長，最適 pH 為 7.4-7.6 。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表.面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm 的細小菌落，溶血性鏈球菌形成透明溶血環。1 3生化反應分解葡萄糖，產酸不產氣，對乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七葉苷的分解能力因不同菌株而異。一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶陰性。1 4抗原結構鏈球菌的抗原構造較復雜，主要有三種：1 4 1核蛋白抗原或稱 P 抗原，無特異性，各種鏈球菌均相同。1 4 2多糖抗原

4、或稱 C 抗原，系群特異性抗原，是細胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提取。1 43 蛋白質抗原 或稱表面抗原，具有型特異性，位于 C抗原外層，其中可分為 M、T、R、S 四種不同性質的抗原成分， 與致病性有關的是 M抗原。2 在外界環境的穩定性該菌抵抗力一般不強， 6030min 即被殺死，對常用消毒劑敏感，在干燥塵埃中生存數月。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素、氯霉素、四環素、磺胺均敏感。青霉素是鏈球菌感染的首選藥物，很少有耐藥性。3 致病性溶血性鏈球菌常可引起皮膚、 皮下組織的化膿性炎癥、 呼吸道感染、 流行性咽炎的爆發性流行以及新生兒敗血癥、細菌性心內膜炎、 猩紅熱和風濕熱、 腎小球腎炎等變態反應

5、。溶血性鏈球菌的致病性與其產生的毒素及其侵襲性酶有關，主要有以下幾種：3 1鏈球菌溶血素：溶血素有 O和 S 兩種， O為含有 -SH 的蛋白質，具有抗原性， S 為小分子多肽，分子量較小，故無抗原性。3 2致熱外毒素：曾稱紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質，會引起局部或全身紅疹、發熱、疼痛、惡心、嘔吐、周身不適。3 3透明質酸酶：又稱擴散因子，能分解細胞間質的透明質酸，故能增加細菌的侵襲力，使病菌易在組織中擴散。3 4鏈激酶：又稱鏈球菌纖維蛋白溶酶，能使血液中纖維蛋白酶原變.成纖維蛋白酶，具有增強細菌在組織中的擴散作用，該酶耐熱，10050 分鐘仍可保持活性。3 5鏈道酶：又稱

6、鏈球菌DNA酶，能使膿液稀薄，促進病菌擴散。3 6殺白細胞素：能使白細胞失去動力，變成球形，最后膨脹破裂。4 傳播途徑實驗室傳播途徑為經傷口感染和呼吸道傳播傳播。三實驗室實驗活動及其危險性與預防措施1 實驗活動內容本實驗室主要從事溶血性鏈球菌檢驗工作，涉及的內容有：1 1溶血性鏈球菌的傳統生化檢測；1 2溶血性鏈球菌的藥物敏感實驗2 可能造成不良后果的因素與預防措施2 1實驗樣品的前處理針對目前實驗室實際工作情況，可根據待檢樣品， 分為高污染樣品和低污染樣品，均可能造成實驗室感染的因素：2 11高污染樣品通過流行病學調查證明為疑似的食品或病人樣品；溶血性鏈球菌純培養物或凍干菌種、質控、鑒定等實

7、驗操作。2 12低污染樣品委托檢驗產品（如食品等） ；其他非癥狀監測的樣品；可能受污染的水樣、環境。實驗室工作人員應當了解病原菌對身體健康的潛在危害，實驗活動過程中要有充分的防范意識。準備好消毒劑，嚴格避免實驗室工作人員的實驗室感染。2 2接種培養在細菌傳代、藥物敏感性測定等實驗中需要溶血性鏈球菌接種培養，在此活動中試管開封、樣品轉種、吸管移吸、混合等步驟可能產生氣溶膠，大量培養物的濺出、 潑灑和容器的破碎等因素可造成工作臺面污染。擬采取防護措.施包括：2 21在工作臺面應當放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙，使用后將其高壓滅菌或按感染性廢物處理。避免感染性物質的擴散。2 22為了避免轉移

8、物質灑落，微生物接種環的直徑應完全封閉，手柄的長度應小于 6cm以減小振動，或者采用一次性滅菌棉簽。2 23最好使用不需要進行消毒的一次性接種環，金屬接種環注意灼燒要完全。2 24樣品容器盡可能使用塑料制品。樣品容器應當堅固，正確地用蓋子或塞子蓋好后應無泄漏。在容器外部不能有殘留物。2 25在實驗過程中所有樣品都應置于試管架上，盡可能保持直立。2 3實驗儀器設備2 31實驗過程中涉及的所有儀器設備表面可能受污染，每次操作完畢應做相應的消毒處理。2 32生物安全柜由于對生物安全柜缺乏維護或使用不當，可能會在處理感染性材料時受到危害。擬采取防護措施： 要定期更換過濾器、 紫外燈及進行性能檢驗以保證

9、其使用安全。使用前后均需對工作臺面、 側壁及后壁進行消毒處理。 通過定期清潔以保持進氣格柵的通暢。2 4培養物與實驗廢棄物銷毀實驗后所有有關受污染的培養物及實驗涉及物品可能沾染病原菌，應在操作結束后經高壓滅菌統一處理。2 5室內空氣、實驗用品以及操作臺面污染所有實驗操作過程中若有易形成氣溶膠的操作， 需針對所有操作空間用紫外燈消毒，及必要的實驗用品和操作臺面的消毒。四、工作人員素質工作人員應經過上崗培訓， 熟悉溶血性鏈球菌的操作流程， 生物安全防護知識，重點防護措施，并按照二級防護標準防護。有外露傷口、嚴重呼吸道感染、免疫力低下實驗人員嚴禁操作此項目。五、評估結論.1 各種實驗活動的防護措施1 1凡涉及到活的溶血性的操作都應在生物安全等級為BSL-2 實驗室內操作。1 2對于臨床疑似病人標本， 操作時應按生物安全二級實驗室防護級別進行個人防護。1 3實驗過程中產生的廢液和使用過的耗材等