1、藥物分析實驗講義負責教師：楊玉萍新鄉學院化學與化工學院目 錄藥物分析實驗規則1實驗一 10%氯化鉀注射液含量的測定2實驗二 葡萄糖中的雜質檢查4實驗三 阿司匹林片的分析8實驗四 葡萄糖氯化鈉注射液的質量檢查10實驗五 對乙酰氨基酚片的質量分析13實驗六 維生素C注射液的質量檢查15藥物分析實驗規則1.實驗前應認真預習，明確目的、要求，了解實驗步驟、方法、和基本原理，并認真考慮每個思考題所提出的問題，做到心中有數。2.遵守實驗室紀律，不得遲到；不得在實驗進行中擅自離開；實驗未完成時，不得提前退出。3.進實驗室必須穿工作服，除所用的筆記本、實驗講義及參考書外，其它物品不宜帶入，以保持實驗室的整潔。

2、4.實驗室須保持安靜、嚴肅，不得喧嘩、嬉笑、打手機和吸煙。5.學生自藥架上取藥品時，要在拿取、稱量和放回時仔細核對，以免發生誤差，稱量完畢時應蓋好瓶塞，放回原處。6.實驗過程要嚴格按著操作規程，細致觀察，認真記錄，注意節約，保證安全，并要求實事求是，養成良好的科學作風，學生因故請假缺實驗者可以補做，無故缺席者不予補做，試驗失敗要求重做時，須征得老師同意。    7.實驗室的藥物、用具不得攜帶出室外，要愛護實驗儀器及設備，如有損壞應立即報告老師，并作報損記錄。    8.實驗結束后，須將所用儀器洗滌清潔，妥善保管，并整理好藥品和實驗臺，

3、經老師同意后方可離開實驗室。同學輪流值日，負責實驗室的清潔及安全檢查工作。實驗一 10%氯化鉀注射液含量的測定一、實驗目的和要求1簡述藥物折光率因素的測定方法及用折光率因素法測定藥物含量的基本原理及方法，并能進行測定及有關計算。2學會阿貝折光計的使用方法及維護。二、實驗原理根據藥物濃度與折光率的關系式：可知，計算藥物的濃度，必須先測出藥物在一定濃度（與所求供試品濃度接近）范圍內的F值，然后再把，值代入上式，根據測定的折光率(n)與同溫度水的折光率（n0），計算藥物的濃度。三、實驗藥品和器材儀器：容量瓶，洗瓶、阿貝折光計等 材料：10%氯化鉀注射液，氯化鉀，乙醚等。四、實驗內容（一）氯化鉀折光率

4、因素(F)的測定1配制標準氯化鉀溶液取130干燥至恒溫的氯化鉀(AR)約5g，精密稱定，用水溶解后，轉移至50ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法共配制四份標準氯化鉀溶液。2測定折光率用已校正的阿貝折光計按折光計的用法中所述的測定方法，分別測定以上配制的四份標準氯化鉀溶液的折光率：并同時測定同溫度水的折光率，按實驗表l作妤記錄，用下式分別計算氯化鉀的折光率因素(F)值，并取其平均值為結果。實驗表1 10%氯化鉀溶液的F值次數氯化鉀注射液濃度%折光率同溫度水折光率計算F值F平均值1234（二）10%氯化鉀注射液的含量測定.用已校正的阿貝氏折光計，按折光計用法中所述的測定方法，測定氯化鉀溶液的

5、折光率，并同時測定同溫度水的折光率。按下式計算氯化鉀溶液的含量或標示量的百分比。 含量百分比計算公式：標示量的百分比計算公式：中國藥典2000年版規定本品含氯化鉀(KCI)應為標示量的95.0%105.0%。五、注意事項1本教材所指的水，除另有規定外，均系指純化水。2測定標準溶液或供試液的折光率時，每份實驗需要三次讀數，三次讀數相差不能大于0.0002，取其平均值為測定的折光率。3因溫度對折光率有影響，故測定時最好采用恒溫水浴裝置。如恒溫水浴溫度為20，則測定時可不再測同溫度水的折光率。實驗二 葡萄糖中的雜質檢查一、目的和要求1了解藥物中一般雜質檢查的目的和意義2掌握葡萄糖中一般雜質檢查的項目

6、和限量計算方法。3掌握葡萄糖中氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷巖限量檢查的基本原理和方法。二、實驗原理（一）氯化物氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀微粒而顯白色渾濁，再與一定量的標準氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下用同法處理生成的氯化銀渾濁程度相比較，測定供試品中氯化物的限量。 Cl-+AgNO3 AgCl（白色）（二）硫酸鹽硫酸鹽在鹽酸溶液中與氯化鋇作用生成硫酸鋇白色渾濁，與一定量的標準硫酸鉀溶液在同一操作條件下生成的渾濁比較，以判斷供試品中硫酸鹽的量是否超過限量。 SO42- 十BaCl2 BaSO4（白色）（三）鐵鹽鐵鹽在鹽酸溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性的硫氰酸鐵配位離子，與

7、一定量標準鐵溶液用同法處理后進行比色，以判斷供試品中的鐵鹽是否超過限量。 Fe3+ + 6SCNFe(SCN)63- （紅色）（四）重金屬藥物中重金屬離子在pH 3.5條件下與CH3CSNH2的分解產物H2S反應，生成黃色至棕黑色的硫化物均勻懸浮液，與一定量的標準Pb2+在相同條件下反應生成的有色懸浮液比色，以判斷供試品中的重金屬是否超過限量。CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S Pb2+十H2SPbS （五）砷鹽檢查（古蔡氏法）是利用金屬鋅與酸作用產生新生態的氫，與藥物中微量砷鹽作用生成具揮發性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產生黃色至棕色的砷斑，與定量標準砷溶液所生成的砷斑比較，以判斷

8、藥物中砷鹽的限量。AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+2HgBr22HBr+AsH (HgBr)2 （黃色）AsH3+3HgBr23HBr+As (HgBr)3 （棕色）五價砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫的速度較三價砷慢，故在反應液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價砷還原為三價砷，碘化鉀被氧化生成碘，碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。AsO43+2I-+2H+AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2+AsO33-+Sn4+H2OI2+Sn2+2I-+Sn4+溶液中的碘離子，又可與反應中產生的鋅離子生成穩定的配離子，有利于生成砷化氫的反應不斷進

9、行。（六）干燥失重 藥品的干燥失重系指藥品在規定的條件下，經干燥減失的質量，主要是指水分，也包括其他揮發性的物質，如乙醇等。三、儀器與材料儀器：干燥箱，稱量瓶，電子天平，量筒，燒杯，納氏比色管等材料：氯化鈉，鹽酸，硫酸鉀，氯化鋇，過硫酸銨，硫氰酸銨，硝酸鉛，醋酸銨，硫代乙酰胺，硝酸鉛，氫氧化鈉，蒸餾水等四、實驗內容（一）氯化物取本品0.60g，查教材加水溶解使成25ml(溶液如顯堿性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml;溶液如不澄清，應濾過;置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試溶液。另取標準氯化鈉溶液(10g Cl-/m1)6.0ml，置50ml納氏比色管中，加稀硝

10、酸10ml，加水使成約40ml，搖勻，即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，供試溶液不得比對照溶液更濃。（二）硫酸鹽檢查取本品2.0g，加水溶解使成40ml（如顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試紙顯中性反應）。溶液如不澄清，濾過置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml，加25%氯化鋇溶液5ml，加水稀釋使成50ml，搖勻，放置10min，如發生渾濁，與對照標準液取標準硫酸鉀（100g SO4/ml）溶液2ml，置50ml納氏比色管中，加水稀釋使成40ml，加稀鹽酸2ml，加25%氯化鋇

11、溶液5ml，加水稀釋使成50ml，搖勻，放置10min比較，不得更濃（0.010%）。（三）鐵鹽檢查取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5分鐘，放冷，加水稀釋使成45ml，加30%硫氰酸銨溶液3ml，搖勻，如顯色，與標準鐵溶液（10gFe/ml）2.0ml，用同一方法制成的對照液比較，不得更深（0.001%）。（四）重金屬檢查取25ml納氏比色管兩支。一管加標準鉛溶液（10gPb/ml）2.0ml，醋酸鹽緩沖液2ml，加水至25ml，另一管取本品4.0g，加水23ml溶解。加pH3.5醋酸鹽緩沖液2ml。兩管各加硫代乙酸胺試液各2ml。搖勻，放置2分鐘。同置白紙上，自上面透

12、視，供試液顯出的顏色不得更深。含重金屬不得過百萬分之五（5ppm）。（五）砷鹽檢查（古蔡法） 取本品2.0g，置檢砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml與溴化鉀-溴試液0.5ml，置水浴上加熱約20min。使保持稍過量的溴存在，必要時，再補加溴化鉀-溴試液適量，并隨時補充蒸發的水分，放冷。加鹽酸5ml與水適量使成28ml。加碘化鉀試液5ml，及酸性氯化亞錫試液5滴在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g。迅速將瓶塞塞緊（瓶塞上已安裝好裝有醋酸鉛棉花及溴化汞試紙的檢砷管）保持反應溫度在2540間（視反應快慢而定，但不應該超過40）。1小時后，取出溴化汞試紙，將生成的砷斑與標準砷溶液（1gAs/ml）一

13、定量制成的標準砷斑比較。顏色不得更深。含砷量不得過百萬分之一（1ppm）。標準砷斑的制備：精密吸取標準砷溶液2ml，置另一檢砷瓶中，加鹽酸5ml及水21ml，照上述方法，自“加碘化鉀試液5ml. .”起依法操作即得。（六）干燥失重測定取本品約1g（如為較大的結晶，應先迅速搗碎使成2mm以下的小粒），置已干燥至恒重的扁形稱量瓶中，加蓋，精密稱定。然后在105干燥至恒重，減失重量不得超過9.5%。（供試品干燥時，應平鋪在扁形稱量瓶中，厚度不可超過5mm，如為疏松物質，厚度不可超過10mm。放入烘箱或干燥器進行干燥時，應將瓶蓋取下，置稱量瓶旁，或將瓶蓋半開進行干燥；取出時，須將稱量瓶蓋好。置烘箱內干

14、燥的供試品，應在干燥后取出置干燥器中放冷至室溫，然后稱定重量。） 五、注意事項1限度檢查應遵循平行操作原則，即供試管與對照管的實驗條件應盡可能一致，包括實驗用具的選擇、試劑與試液的量取方法及加入順序，反應時間的長短等。2比色、比濁前應使比色管內試劑充分混勻。比色方法是將兩管同置白色背景上，從側面或自上而下觀察；比濁方法是將兩管同置于黑色背景上，從上向下垂直觀察。所用比色管刻度高低差異不應超過2mm，使用過的比色管應及時清洗、注意不能用毛刷刷洗，可用重鉻酸鉀洗液浸泡。3一般情況下供試品取樣1份進行檢查即可。如結果不符合規定或在限度邊緣時，應對供試品和對照管各復檢2份，方可判定。實驗三 阿司匹林片

15、的分析一、目的和要求1掌握片劑分析的特點及賦形劑的干擾與排除方法。2掌握阿司匹林片鑒別、檢查、含量測定的原理及方法。二、實驗原理（一）鑒別阿司匹林分子具有酯結構，與碳酸鈉試液共熱，水解生成水楊酸鈉和醋酸鈉，前者可與三氯化鐵試液生成紫堇色化合物，后者放冷后用稀硫酸酸化，析出白色的水楊酸沉淀，并產生醋酸的臭氣。（二）雜質檢查 1水楊酸與三氯化鐵試液顯紫堇色。 2檢查溶出度是利用在堿性條件下，加熱，使阿司匹林水解，測定水解產物水楊酸的吸收度，按為265計算水楊酸的含量，故用阿司匹林的含量表示溶出度時應乘以換算因數。換算因數=MASPMSA=1.304。（3） 含量測定為消除阿司匹林水解產物水楊酸，醋

16、酸及穩定劑枸椽酸、酒石酸對含量測定的影響故采用兩步滴定法。第一次滴定：CH3COOHNaOHCH3COONaH2O第二次滴定：四、實驗內容（一）鑒別1取本品約0.lg，加水l0ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液l滴，即顯紫堇色。2取本品約0.5g，加碳酸鈉試液l0ml，煮沸2分鐘后，放冷，加過量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發生醋酸的臭氣。（二）雜志檢查1游離水楊酸取本品的細粉適量(約相當于阿司匹林0.1g)，加乙醇lml溶解后，加冷水適量使成50ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液 取鹽酸液(1mol/L)1ml，加硫酸鐵銨指示液2ml后，再加水適量使成100ml 1ml，搖勻；30秒鐘內如顯色，與

17、對照液(精密稱取水楊酸0.1g，置1000ml量瓶中，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水適量至刻度，搖勻，精密量取1.5ml，加無水乙醇2ml與5乙醇使成50ml，再加上述新制的稀硫酸鐵銨溶液1ml，搖勻)比較，不得更深。2溶出度 取本品1片，照溶出度測定法第一法（2010年藥典二部附錄），以稀鹽酸24ml加水至1000ml為溶劑，轉籃轉速為每分鐘100±5轉，依法操作，經30分鐘時，取溶液10ml濾過，精密量取續濾液3ml置50ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉液5ml，置水浴中煮沸5分鐘，放冷，加硫酸液2.5ml；并加水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法，在303nm的波長處測定吸收度，按C7

18、H6O3的吸收系數)為265計算，再乘以1.304，計算出每片的溶出量；不得少于標示量的80%。其他應符合片劑項下有關的各項規定。（3） 含量測定取本品10片，精密稱定，研細，精密稱出適量(約相當于阿司匹林0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性)20ml，振搖，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15分鐘并時時振搖，迅速放冷至室溫，有硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當于18.02mg的

19、C9H8O4。本品含阿司匹林(C9H8O4)應為標示量的95.0105.0。實驗四 葡萄糖氯化鈉注射液的質量檢查一、目的和要求 1. 通過對葡萄糖氯化鈉注射液的全面分析，進一步樹立藥品質量的全面觀點。 2. 熟練使用旋光儀，掌握旋光法測定葡萄糖含量的操作并能進行有關計算。3熟悉用法楊司法測定氯化鈉含量的操作并能進行有關計算。4. 熟悉用紫外分光光度計檢查藥物中雜質的操作。二、實驗原理（一）鑒別1葡萄糖本品分子中含有醛式結構而具還原性，能還原堿性酒石酸銅試液（斐林試液）生成氧化亞銅紅色沉淀。2氯化鈉(1)利用氯化物與硝酸銀生成白色凝乳狀氯化銀沉淀，沉淀能溶于氨試液中，若再加硝酸，沉淀復生成。(2

20、)利用鈉鹽與醋酸氧鈾鋅試液反應，生成醋酸氧鈾鋅鈉的黃色沉淀：(3)利用鈉鹽的焰色反應呈持久亮黃色。（二）雜質檢查采用紫外分光法檢查5-羥甲基糖醛。檢查是利用5-羥甲基糖醛在284nm波長處有最大吸收。本品每l00ml中含0.2g葡萄糖的水溶液在284nm波長處的吸收度不得大于0.25。（三）含量測定 1葡萄糖采用旋光法測定其含量。根據測得供試品的旋光度與2.0852相乘，計算出葡萄糖在供試品中的百分比濃度和標示量的百分比。 2氯化鈉 采用法楊司法測定其含量。利用氯化鈉與硝酸銀定量反應生成氯化銀，采用吸附指示劑確定終點。常用的吸附指示劑有熒光黃、曙紅等。三、儀器與材料儀器：酸度計，旋光儀，水浴鍋

21、，燒杯，納氏比色管，量筒，納氏比色管等。材料：葡萄糖氯化鈉注射液，硫酸銅，酒石酸鉀鈉，硝酸，濃氨水，冰醋酸等。四、實驗內容（一）性狀：觀察葡萄糖氯化鈉注射液的性狀，本品應為無色的澄明液體。（二）鑒別1葡萄糖鑒別：取本品，緩緩漓入溫熱的堿性酒石酸銅試液，生成氧化亞銅紅色沉淀。2氯化鈉的鑒別 (1)取本品數滴，加稀硝酸及硝酸銀試液各1滴，即產生白色凝乳狀沉淀，分離，沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復生成。 (2)取本品1ml，加醋酸氧鈾鋅試液數滴，即發生黃色沉淀。(3)取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（三）雜質檢查中國藥典2000年版規定本品應檢查酸度、5-羥

22、甲基糠醛、重金屬、不溶性微粒、細菌內毒素及其他有關注射劑項下的各項規定。本次實驗僅做酸度檢查。酸度中國藥典2000年版規定本品的pH應為3.55.5。采用玻璃電極為指示電極，用電位法進行測定。 (1) pH計的調節與校準：按pH計的使用步驟經預熱、溫度補償調節、量程調節等，再將鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液(pH= 4.00)置小燒杯中，接通pH計測量電路，按照該測定溫度下標準緩沖液的pH，調節定位調節器旋鈕，使儀器上的讀數與標準緩沖液的pH一致。(2)測定注射液的pH：將葡萄糖氯化鈉注射液置小燒杯中，按照pH值測定方法進行測定，讀取其pH。 25-羥甲基糠醛(1)測定液的配制：精密量取本品1ml（約相

23、當于葡萄糖0.lg）置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。(2)測定：取配制的測定液盛入lcm厚的石英池中，置預先校正好的紫外分光光度計的試樣室中，以水為空白，在284nm波長處測定其吸收度，重復三次，取其平均值。中國藥典2000年版規定，其吸收度不得大于0.25。(3)雜質限量計算：根據5-羥甲基糠醛的( 284nm)為145，測定液允許的吸收度不得大于0.25，可由下式計算出5-羥甲基糠醛的限量：則l00ml測定液中的5-羥甲基糠醛的最大允許量為：因測定液中葡萄糖濃度為10%，取量為1ml，稀釋為50ml制得，則1ml葡萄糖原液中5-羥甲基糠醛的最大允許量即為0. 00172g。故

24、本品中5-羥甲基糠醛的限量為：3重金屬中國藥典2000年版規定本品含重金屬不得過5%。(1)供試液制取：取本品30ml(約相當于葡萄糖3g)于蒸發皿中，置水浴上蒸發至約20ml，放冷，轉入納氏比色管中，如醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2ml，再加水準確使成25ml，搖勻即得。(2)對照液制取：，于另一支納氏比色管中，精密加入1.5ml標準鉛液，再加醋酸鹽緩沖液(pH= 3.5)2ml與水適量準確使成25 ml，搖勻，即得。(3)于供試液和對照液中分別加入硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，要求供試液所顯的顏色不得比對照液的顏色更深。（四）含量測定中國藥典2000年版

25、規定本品（l00ml：葡萄糖10g，氯化鈉0.9g）含葡萄糖(C6H12O6·H2O)與氯化鈉(NaCI)均應為標示量的95.0%105.0%。葡萄糖含量測定 (1)操作：精密量取本品25 ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，依法測定該溶液的旋光度，與2.0852相乘（測定管長度為ldm）或與1.0425相乘(測定管長度為2dm)，即得供試品中含有C6H12O6·H2O的重量(g)。按下式求出該注射液中葡萄糖標示量的百分比。(2)計算：（五）注意事項1堿性酒石酸銅試液是由堿性酒石酸銅試液I（硫酸銅溶液）與堿性酒石酸銅試液（堿性酒石酸鉀鈉溶液）于臨用前

26、等量混合而得。2鈉鹽與醋酸氧鈾鋅試液的反應若不明顯，可用玻棒磨擦管內壁，即可產生渾濁。 3酸度檢查是以玻璃電極為指示電極，甘汞電極為參比電極。測定中尤其要注意玻璃電極的使用及維護。4紫外分光法檢查5羥甲基糠醛時，由于儀器的不同，測定操作亦可能有所差異。在測定中除應注意光源及波長的選定外，須用溶劑做空白，調吸收度為零，以消除吸收池及溶劑可能帶來的誤差。因是直接通過所測吸收度值來判斷5一羥甲基糠醛的限量，未采取與標準品比較法，故所測吸收度值應準確，儀器必須先校正合格后，方可進行測定。5重金屬檢查是取30ml葡萄糖氯化鈉注射液（相當于3g葡萄糖），其體積已超過重金屬檢查中規定的總體積(27ml)，故

27、應將注射液置水浴上蒸發濃縮至20ml后，再行檢查。蒸發時，不可將蒸發皿直火加熱，以防局部有炭化現象而影響比色結果。實驗五 對乙酰氨基酚片的質量分析一、目的和要求 1. 通過對乙酰氨基酚的全面分析，進一步樹立藥品質量的全面觀點。2. 熟練掌握對乙酰氨基酚含量的操作并能進行有關計算。3熟悉對乙酰氨基酚中雜質檢查的方法。二、實驗原理1.對乙酰氨基酚遇到三氯化鐵即顯藍紫色。對乙酰氨基酚 + FeCl3 藍紫色化合物 2.對乙酰氨基酚具有芳伯氨基，可以發生重氮化-偶合反應。 亞硝酸 堿性條件下+-萘酚對乙酰氨基酚+ 重氮鹽 有色偶氮染料 3.對乙酰氨基酚的測定原理三、實驗內容（一）性狀 本品為白色結晶或

28、結晶性粉末，無臭，味微苦。本品在熱水和乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶。（2） 鑒別 1.取本品的水溶液加三氯化鐵試液，即顯藍紫色。 2.取本品約0.1g，加稀鹽酸0.5ml，置水浴中加熱40分鐘，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉5滴，搖勻，用水3ml稀釋后，加堿性-萘酚試液2ml，搖勻，即顯紅色。（3） 雜質檢查 1.乙醇溶液澄清度與顏色 取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，溶液應澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標準液比較，不得更濃，如顯色，與棕紅色2號或橙紅色2號標準液比較，顏色不得更深。 2.對氨基酚 取本品1.0g，加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加堿性亞硝基鐵氰化鈉試液1ml，搖勻，放置30min；如顯色，與對乙酰氨基酚對照品1.0g加對氨基酚50g用同一方法制成對照液比較，不得更深（0.005%）。（四）對乙酰氨基酚的含量測定藥典