1、動物細胞培養的應用和概念：動物細胞培養的應用和概念： 從動物有機體中取出相關的從動物有機體中取出相關的組織組織,將它分散成將它分散成單個細胞單個細胞,然后然后,放在適宜的培養基中放在適宜的培養基中,讓這些細讓這些細胞胞生長和增殖生長和增殖.動物細胞培養過程：動物細胞培養過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細胞懸浮液細胞懸浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代細胞代細胞原代培養原代培養50代細胞代細胞傳代培養傳代培養細胞株細胞株無限傳代無限傳代細胞系細胞系單個細胞單個細胞加培養液加培養液遺傳物質遺傳物質未改變未改變遺傳物質遺傳物質已改變已改變動物組織細胞間隙中含動物組織細胞間隙

2、中含有一定量的彈性纖維等有一定量的彈性纖維等蛋白質，將細胞網絡起蛋白質，將細胞網絡起來形成具有一定彈性和來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。韌性的組織和器官。（分解彈性纖維）（分解彈性纖維）細胞貼壁細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁 上，上，稱為細胞貼壁。稱為細胞貼壁。要求：要求：培養瓶或培養皿的內表面光滑、無毒、易于貼培養瓶或培養皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。附。細胞的接觸抑制細胞的接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。會停止分裂增殖，這種現象稱為

3、細胞的接觸抑制。 思考討論：思考討論： 在動物細胞培養過程中，為什么要用在動物細胞培養過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？ 胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞間的膠原纖維和細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞。 原代培養：原代培養：從機體取出后立即培養的細胞從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。為原代細胞。 傳代培養：傳代培養：將原代細胞從培養瓶中取出，將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養。上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養。細胞株：細胞株：原代

4、細胞一般傳至原代細胞一般傳至1010代左右細胞生長停滯，代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到40504050代，這代，這種傳代細胞為細胞株。種傳代細胞為細胞株。細胞系：細胞系：細胞株傳代至細胞株傳代至5050代后又出現細胞生長停滯狀代后又出現細胞生長停滯狀態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。細胞株和細胞系的區別細胞株和細胞系的區別： 細胞系的遺傳物質改變，細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接

5、觸抑制，容易傳代培養。具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養。細胞懸浮液細胞懸浮液細胞株細胞株10代細胞代細胞50代細胞代細胞細胞系細胞系無限傳代無限傳代原代培養原代培養傳代培養傳代培養遺傳物質改變遺傳物質改變概念：原代培養、傳代培養、細胞株、細胞系概念：原代培養、傳代培養、細胞株、細胞系1 1、無菌、無毒、無菌、無毒 2 2、全部的營養物質、全部的營養物質 3 3、適宜的溫度和、適宜的溫度和PHPH值值 4 4、必要的氣體條件、必要的氣體條件（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。（葡萄糖、氨基酸、無機鹽

6、、維生素、動物血清等。）保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖36.5+36.5+（- -）0.50.5度度, 7.2-7.4, 7.2-7.4O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 ）3 3、條件：、條件：維持培養液的維持培養液的PH1 1、無菌、無毒、無菌、無毒 2 2、全部的營養物質、全部的營養物質 3 3、適宜的溫度和、適宜的溫度和PHPH值值 4 4、必要的氣體條件、必要的氣體條件（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、

7、動物血清等。）保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖36.5+36.5+（- -）0.50.5度度, 7.2-7.4, 7.2-7.4O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 ）3 3、條件：、條件：維持培養液的維持培養液的PH4.4.動物細胞培養技術的應用動物細胞培養技術的應用 蛋白質生物制品的生產蛋白質生物制品的生產 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 健康細胞培養健康細胞培養 培養健康細胞用于燒傷病人皮膚移植培養健康細胞用于燒傷病人皮膚移植 細胞的生理、藥理、病理研究細胞的生理、藥理、病理研究 比較項目比較項目植物

8、組織培養植物組織培養動物細胞培養動物細胞培養原理原理細胞的全能性細胞的全能性細胞增殖細胞增殖培養基性質培養基性質固體培養基固體培養基液體培養基液體培養基培養基特有成分培養基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 動物血清動物血清培養結果培養結果植物體植物體細胞株、細胞系細胞株、細胞系培養目的培養目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株無病毒植株獲得細胞或細胞獲得細胞或細胞分泌蛋白分泌蛋白思考：思考：2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養材料？培養材料？1、動物細胞培養液的主要成分是什么？較植物組培培養基、動物細胞

9、培養液的主要成分是什么？較植物組培培養基有何獨特之處？有何獨特之處？3、為什么培養前要將組織細胞分散成單個細胞？、為什么培養前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養能否像綠色植物組織培養那樣最終培養成新個、動物細胞培養能否像綠色植物組織培養那樣最終培養成新個體？體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：獨特之處有：1、液體培養基、液體培養基 2、成分中有動物血清等、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強成塊組織不利培養，分散了做成細

10、胞懸浮液利于培養成塊組織不利培養，分散了做成細胞懸浮液利于培養不能，動物細胞培養只能使細胞數目增多，不能發育成新的不能，動物細胞培養只能使細胞數目增多，不能發育成新的動物個體動物個體二、動物體細胞核移植技術和克隆動物二、動物體細胞核移植技術和克隆動物 動物核移植是將動物的一個細胞的細胞動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核核,移如入一個已經去掉細胞核的卵母細胞移如入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中中.使其重組并發育成一個新的胚胎使其重組并發育成一個新的胚胎,這個這個新的胚胎最終發育為動物個體新的胚胎最終發育為動物個體.用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物分類：分

11、類：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復全能性容易細胞分化程度低，恢復全能性容易細胞分化程度高，恢復全能性困難細胞分化程度高，恢復全能性困難卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質細胞質細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞2.體細胞核移植技術的應用前景體細胞核移植技術的應用前景(1) 在畜牧業中可以在畜牧業中可以加速家畜遺傳改良的加速家畜遺傳改良的進程進程(2) 保護瀕危物種保護瀕危物種(3) 醫藥衛生領域生醫藥衛生領域生產醫用蛋白質及組織產醫用蛋白質及組織器官的移植器官的移植體細胞核移植技術存在的問題體細胞核移植技術存在的問題 在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術效率低，克隆動物畸形率高、制尚不清楚，克隆技術效率低，克隆動物畸形率高