香果、香精、沙姜和陳皮提取物的體外抗菌作用研究

食品是人類生存和發展的物質基礎。食品安全問題引起了世界各國的關注。盡管現代科技發展已經達到了一定的水平,但是因為食源性致病菌而引發的疾病在全世界都沒有達到很好的控制,它仍然在危害人們的健康,食品安全仍然面臨著嚴峻的挑戰。近些年來,人們對合成食品添加劑感到強烈不安,所以選擇安全性高的天然防腐劑顯得尤為重要。香辛料指通常用作食品調理或飲料調配所用的,能夠給食品呈現具有各種辛、香和辣味等風味的食用香料植物的簡稱[1~2]。它可以用來給各類食品加香和調味,還能用來改善食品的色、香和味,使食品對人產生強烈誘惑感,還能夠提高食品的自身身價和產品的檔次。香辛料多數具有抗氧化和抑菌作用。在食用香辛料中,大多數來自天然,又有很好的抗菌作用,而且它們的安全性已為人們多年的經驗所證實。它們都有各自獨有的香味,既能夠增加香氣、調節氣味、還具有防腐作用、延長食物的保存時間。有研究發現山蒼子、丁香、肉桂和牛至的提取物,對于細菌,霉菌和酵母菌都有很強的殺菌效果;八角茴香、生姜、花椒、大蒜、山蒼子、薄荷、桉葉、牛至和紫蘇9種香辛料提取液對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌均有不同程度的抑制作用,鼠尾草、九層塔、香果和辣椒均能很好地抑制李斯特菌的生長。本文研究了香果、香葉、沙姜和陳皮乙醇提取物對食源性致病菌的抑制作用,為開發天然防腐劑提供理論基礎。1試驗材料和方法1.1試驗設備及儀器香果、香葉、沙姜和陳皮,購于徐州礦西農貿市場;胰蛋白胨大豆瓊脂和胰蛋白胨大豆肉湯,北京陸橋技術有限責任公司;其他試劑均為國產分析純。旋轉蒸發儀,上海申生科技有限公司;微型植物粉碎機,天津市泰斯特儀器有限公司;DNP-9162型電熱恒溫培養箱,上海精宏試驗設備有限公司;SW-CJ-IC標準型雙人凈化工作臺,蘇州凈化設備廠。1.2菌株和菌株單增李斯特菌、英諾克李斯特菌、綿羊李斯特菌、格氏李斯特菌、威爾士李斯特菌、副溶血性弧菌33846、副溶血性弧菌33847和副溶血性弧菌17802購自ATCC;大腸桿菌O157:H7、腸炎沙門氏菌和金黃色葡萄球菌中科院微生物所;惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌、銅綠假單胞菌和耶爾森氏菌,由試驗室分離并經生理生化鑒定。1.3測試方法1.3.1香辛料蒸發作用將香果、香葉、沙姜和陳皮用粉碎機粉碎至顆粒直徑約為0.1mm,各取30g粉碎完的香辛料于蒸餾瓶中,加入300mL體積分數60%的乙醇,在80℃水浴條件下浸提1h,將浸提液抽濾后得到濾液,使用旋轉蒸發儀蒸發濃縮,得到濃縮液。將得到的濃縮液用蒸餾水配成生藥量為1g/mL的提取液備用。1.3.2水浴培養將各供試菌種接種于TSB中,置于37℃水浴中恒溫振蕩培養活化18~24h。活化好的菌種,在無菌條件下,用生理鹽水稀釋,制成106CFU/mL菌懸液。1.3.3香辛料提取物的制備打孔器制備直徑為6mm的定性濾紙圓片,121℃干熱滅菌20min后置于烘箱中烘干備用。用滅菌鑷子取烘干后的滅菌濾紙片到香辛料提取物中浸泡12h,以無菌水浸過的濾紙片做空白。濾紙片經充分浸泡后取出晾干,備用。在培養皿中倒入TSA培養基,待其完全冷卻凝固后,再分別移取各菌懸液0.1mL,用涂布器涂布均勻。以無菌操作將浸泡過香辛料提取物的濾紙片和一個空白濾紙片貼在一個平板上,每皿做4個受試樣品,同時做空白對照,每種香辛料做3個平行。培養皿倒置于恒溫培養箱中,在37℃下培養18~24h。測量抑菌圈直徑大小。2試驗結果2.1抑菌效果的測定由表1可知:香果提取液對各種供試菌種均有較好的抑菌效果,其中對惡臭假單胞菌的抑菌效果最強,對副溶血性弧菌ATCC17802的抑菌效果最弱。2.2菌株抑菌效果由表2可知:香葉提取液對各種供試菌種均有較好的抑菌效果,其中對綿羊李斯特菌的抑菌效果最強,對惡臭假單胞菌和英諾克李斯特菌的抑菌效果最弱。2.3抑菌效果的情況由表3可知:沙姜提取液對各種供試菌均有較好的抑菌效果,且抑菌效果相差不大,其中對單增李斯特菌、耶爾森氏菌屬和英諾克李斯特菌的抑菌效果都較好,對副溶血性弧菌ATCC33847的抑菌效果最弱。2.4陳皮、香果、種子、沙姜和沙姜提取液對哈爾森氏菌屬的抑菌效果由表4可知:陳皮提取液對各種供試菌種均有一定的抑菌效果,但沒有香果、香葉和沙姜提取液的抑菌效果好,陳皮提取液對耶爾森氏菌屬的抑菌效果最好,對惡臭假單胞菌、熒光假單胞菌、副溶血性弧菌ATCC33847和英諾克李斯特菌的抑菌效果最弱。3香辛料的抑菌作用香果、香葉和沙姜對受試食源性致病菌的抑菌效果較好,陳皮提取液的抑菌效果相對較弱。各香辛料的抑