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文檔簡介

氨基酸的柱前衍生RP一HPLC分析技術(shù)為什么要衍生氨基酸種類較多，結(jié)構(gòu)相近，大部分沒有紫外或熒光響應(yīng)提高分析檢測靈敏度和分離選擇定義柱前衍生反相高效液相色譜法是用衍生劑將氨基酸在柱前轉(zhuǎn)化為適于反相色譜分離并能被靈敏檢測的衍生物，衍生產(chǎn)物通過色譜分離，用紫外或者熒光檢測器檢測。柱前衍生的關(guān)鍵在于衍生劑的選擇理想衍生劑的標(biāo)準(zhǔn)能與各氨基酸定量反應(yīng)每種氨基酸只生成一種化合物且產(chǎn)物有一定的穩(wěn)定性不產(chǎn)生或易于排除干擾物標(biāo)記反應(yīng)條件溫和，確保被標(biāo)示生物基質(zhì)原有化學(xué)性質(zhì)不被破壞，分析時(shí)間短易于合成、保存，無毒形成衍生物在乙睛和甲醇中有足夠溶解度；熒光胺（Fluorescamine，簡稱FA）優(yōu)點(diǎn):以本身不發(fā)熒光OPA與一級(jí)氨基酸的反應(yīng)迅速柱壽命長衍生產(chǎn)物具有高熒光強(qiáng)度缺點(diǎn):OPA與二級(jí)氨基酸形成熒光衍生物OPA試劑本身不穩(wěn)定OPA以與氨基酸的衍生產(chǎn)物也不穩(wěn)定異硫氰酸苯酯pherylisothicoyanate簡稱PITc優(yōu)點(diǎn)可與一級(jí)和二級(jí)氨基酸同時(shí)反應(yīng)衍生產(chǎn)物單一、穩(wěn)定分析時(shí)間短，測定水解氨基酸僅需12min。缺點(diǎn)存在于樣品中的痕量PITC試劑會(huì)縮短分析柱的壽命實(shí)踐中此法不適用于游離氨酸的測定由于只能使用紫外檢測，所以和使用熒光檢測的方法相比，此法檢測靈敏度較低。鄰苯二甲醛(OPA)氯甲酸芴甲酯(FMOC一Cl)異硫氰酸苯酯(PITC)丹酰氧(Dansyl一Cl)二甲胺偶氮苯磺酞氯(Dabsyl一CI)6一氨基喹啉一N一羥基唬珀酰亞胺基氨基甲酸酯(AQc)小結(jié)優(yōu)點(diǎn)通常無需考慮衍生反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)因素衍生化試劑、反應(yīng)條件和反應(yīng)時(shí)間的選擇不受色譜系統(tǒng)的限制不需附加儀器設(shè)備缺點(diǎn)

有些化合物經(jīng)過衍生化后,有時(shí)會(huì)得到不止一種反應(yīng)產(chǎn)物由于氨基酸種類多，結(jié)構(gòu)相近，一種衍生試劑難以達(dá)到同時(shí)對(duì)多種氨基酸進(jìn)行分離小結(jié)

選擇和發(fā)展普適性廣、靈敏度高、分離效能好、重復(fù)性優(yōu)良的分析方法是分析領(lǐng)域探索的重要課題，氨基酸的柱前衍生RP一

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