（一）名詞解釋4.Southern雜交通常是指（）1．原位雜交ADNA和RNA雜交2．核酸分子雜交技術BDNA和DNA雜交3．探針CRNA和RNA雜交4．反向點雜交D蛋白質和蛋白質雜交5．缺口平移標記法EDNA和蛋白質雜交6．隨機引物標記法7．末端標記法8.Southernblot雜交9．熒光原位雜交ABCD最容易降解的核酸探針是（）探針探針探針探針10.菌落雜交E:RNA（二）選擇題6.探針基因芯片技術的本質就是（）【A型題】A核酸分子雜交技術1.DNA鏈的Tm值主要取決于核酸分子的（）BC蛋白質分子雜交技術聚合酶鏈反應技術AG—C含量BA—T含量D基因重組技術CA—G含量E酶切技術DA—C含量ET—G含量AB探針的長度通常為0個堿基?個堿基2.液相雜交是下列哪一種（）印跡雜交印跡雜交CDE?個堿基?個堿基.＜個1堿0基0印跡雜交印跡雜交實驗A寡核苷酸探針的最大的優勢是（）雜化分子穩定3.研究得最早的核酸分子雜交種類是（）B可以區分僅僅一個堿基差別的靶序列A菌落雜交C易標記BSouthern雜交D易合成CNorthern雜交E易分解第二章核酸雜交技術E原位雜交.在印跡中常用的核酸變性劑是D液相雜交甲醛甲醛B乙醛C氫氧化鈉D碳酸鈉E鹽酸10．鹽酸硝酸纖維素膜最大的優點是（）A脆性大B本底低C共價鍵結合D非共價鍵結合E高結合力1最常用的探針標記方法是A隨機引物B切口平移‘末端標記‘末端標記法12．為了除去探針，重復使用濾膜，以下哪種情況不可以發生（）A探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經干燥過B探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經濕潤過C探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經溫浴過D探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經漂洗過E探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經標記過3’一末端的探針標記主要依靠的酶是（）14多聚核苷酸激酶B末端轉移酶IIEDNApol14．血友病是一種（）A染色體病BX連鎖遺傳病C先天性代謝缺陷病D先天畸形E常染色體隱性遺傳病1．5預雜交中最常用的封閉劑是（）溶液.檢測目標是RNA的技術是（）ASouthern雜交BWestern雜交CNorthern雜交DEastern雜交E雜交淋巴瘤.檢測靶序列是DNA的技術是（）ASouthern雜交BWestern雜交CNorthern雜交DEastern雜交E雜交淋巴瘤.DNA雙螺旋之間氫鍵斷裂，雙螺旋解開，DNA分子成為單鏈，這一過程稱（）A變性B復性C復雜性

D雜交E探針19．具有堿基互補區域的單鏈又可以重新結合形成雙鏈，這一過程稱()A變性B復性C復雜性D雜交E探針20．一種標記核酸與另一種核酸單鏈進行配對形成異源核酸分子的雙鏈，這一過程稱()A變性B復性C復雜性D雜交E探針21．點/狹縫雜交可以用于()A快速確定是否存在目的基因B不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息C用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測22．放射自顯影時反射光產生的潛影在低溫下較穩定，最適溫度是()A-70℃B-30℃C-20℃D-10℃E4℃A不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息B檢測的目標是RNAC用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測.寡核苷酸探針的簡單計算公式為ATm=4(G+C)+2(A+T)BTm=2(G+C)+4(A+T)CTm=6(G+C)+4(A+T)DTm=2(G+C)+6(A+T)ETm=6(G+C)+2(A+T).Northern印跡雜交可以用于()A快速確定是否存在目的基因B不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息C檢測的目標是RNAD用于基因定位分析E陽性菌落的篩選26.熒光原位雜交可以用于()A快速確定是否存在目的基因B檢測的目標是RNAC用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測23.Southern23.Southern印跡雜交可以用于()A正常人B雜合體患者C純合體患者D攜帶者E不能確定.在為下述何種范圍時，值變化不明顯ApH為3?5BpH為4?5CpH為5?6DpH為5?9EpH為8?1129．一般來說，設計的寡核苷酸探針的長度為()A2-10bpB17-50bpC60-100bpD100-200bpE200-300bpo變性劑可使核酸的值降低，常用的變性劑是()A甲酰胺B氫氧化鈉C濃鹽酸D稀鹽酸E甲醇31.下列有關cDNA探針的描述不正確的為()A利用mRNA通過RT-PCR在體外反轉錄可制備大量的cDNA探針BcDNA探針不包含內含子CcDNA探針不包含大量的高度重復序列D由于cDNA探針自身所攜帶的poly(dT),有可能產生非特異性雜交的問題EcDNA探針合成方便，成為探針的重要來源2一般來說核酸雜交的溫度低于其值的多少度進行()A15?25℃B10?15℃C5?10℃D30?40℃E40?50℃.對于寡核苷酸探針，雜交溫度一般般低于其值()A30?40℃B20?30℃C15?30℃D10?15℃E5℃34.一般情況下，不含變性劑甲酰胺時，雜交反應常在多少℃下進行()A90B80C75D68E5835.在含50甲%酰胺時，雜交反應在多少℃進行()A70B65C55D42E3536.雜交時的溫度與錯配率有關，錯配率每增加1%，則值下降A0.5℃B1?1.5℃C2?2.5℃D3?3.S℃E4?4.5℃.的雜交體的值一般應增加A1?5℃B5?10℃C10?15℃D15?20℃E20?25℃8雜交的時間一般為CotI/2勺Al倍B1?3倍C3?5倍D5?8倍E10倍以上39．為封閉非特異性雜交位點，可在預雜交液中加入()AssDNABIxSSCC10xSSCD5xTBECE50xTAE0隨機引物法標記探針常用的AG、聚合體的數目是()A4個B6個C8個D10個E12個【X型題】1下列哪些是影響復性的因素濃度的分子量、溫度D堿基組成的來源.DNA探針的優點有()A制備方法簡單BDNA探針易降解CDNA探針的標記方法成熟，有多種方法可以選擇D克隆在質粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡E單鏈，不存在競爭性的自身復性.以下哪些方法可以用于探針的全程標記()ADNA加尾法BDNA切口平移標記法C隨機引物標記法D末端標記E尾端標記4關于變性的描述正確的是A二級結構破B一級結構破壞、黏度降低D生物活性喪失E浮力密度增加.以下哪些因素可以使DNA變性()A增加溶液的濃度B加熱C改變溶液的pH值D有機溶劑E冷藏.預雜交中，下列能起封閉作用的是()AssDNABBSA小牛胸腺D脫脂奶粉EDTT.變性的DNA會發生哪些理化性質的變化()A粘度下降B沉降速度增加C浮力下降D紫外光吸收增加E紫外光吸收減少48下.列物質適于非放射性探針標記的是()AAKPBA、P、生物素D地高辛E熒光素49.關于人工合成的寡核苷酸探針，下列描述正確的是()A特異性高B可依賴氨基酸序列推測其序列C分子量小D可用于相似基因順序差異性分析可用末端轉移酶進行5端標記50．通過哪些措施可以提高雜交反應的速度()A采用大片段探針B少量的反應體積C高反應溫度D不斷的振搖E大量的反應體積51．關于切口平移法下述正確的是()可標記線性可標記松散螺旋可標記超螺旋可標記存在缺口的雙鏈E可標記隨機引物.以下哪些方法可以用于從凝膠上轉移DNA()A毛細轉移B真空轉移C負壓轉移D電泳轉移E冷凍轉移.關于隨機引物法標記探針下述正確的是()可標記單鏈可標記雙鏈可標記單鏈比活性高達108cpm/DNA以上常經過SephadexG-50純化才可使用54.可以采用哪些方法來標記探針()A雜交標記法B切口平移標記法C5’-末端的標記D3’-末端的標記E化學法延長標記55．整個雜交反應主要以下哪些步驟組成()A預雜交B雜交C洗脫D固定E轉移56.放射自顯影可以被分為()A直接放射自顯影B氧化顯影C封閉顯影D間接放射自顯影E固定顯影57.關于電轉移下列描述正確的是()A快速、高效B需要特殊設備緩沖液用或D可產生高溫常用膜作為支持介質58.預雜交的主要目的是()A平衡濾膜B封閉非特異性雜交的位置C提高雜交信號的檢測效率D便于從濾膜上除去探針E清除用于雜交反應檢測的顯色物質59關.于非放射性探針標記，下列描述正確的是()A對人體危害小B需要特殊設備C可長時間使用D靈敏度不如放射性探針E重新雜交新探比較容易.對于改變DNA片段長度的突變，可以由于缺失或插入產生，或由于限制性酶切位點改變而導致

限制性片段長度改變。可以通過哪些方法檢測（）APCR擴增BRAPDCSoutherm印跡雜交DNorthern印跡雜交E以上都不是.重組DNA的篩選可用核酸分子雜交的方法，常用于檢測DNA的雜交方法有哪些（）A菌落印跡雜交BNorthern印跡雜交CWestern印跡雜交D原位雜交E斑點雜交2關于探針的描述下列正確的是A可用于隨機引物標記B特異性高C靈敏度高D可用非同位素標記法標記E不易降解63．下列哪些可以作為核酸探針使用（）AmicroRNAB單鏈DNAC寡核苷酸DmRNAE雙鏈RNA64．關于核酸探針的描述下列正確的是（）可以是可以是幾類？2．簡述反義核酸技術的基本原理及其應用范圍.試述Northernblot雜交的操作步驟？4．什么是肽核酸？并簡述其應用？.請舉例說明雜交技術在臨床檢驗科基因診斷方面的應用。.請敘述雜交探針標記方法的種類?？捎梅派湫詷擞浛捎梅欠派湫詷擞洷仨毷菃捂満怂幔ㄈ﹩柎痤}可用放射性標記可用非放射性標記必須是單鏈核酸（三）問答題1.根據哪三種不同的分類標準可以將雜交分為哪參考答案（一）名詞解釋1．原位雜交：是首先應用核酸探針與組織或細胞中的核酸按堿基互補配對原則進行特異性結合形成雜交體，然后應用組織化學或免疫組織化學方法在顯微鏡下進行細胞內基因定位或基因表達的檢測技術。2．核酸分子雜交技術：單鏈的核酸分子在合適的條件下，與具有堿基互補序列的異源核酸形成雙鏈雜交體的過程稱作核酸分子雜交。利用核酸分子雜交檢測靶序列的一類技術稱核酸分子雜交技術。3．探針：是一段單鏈或雙鏈核苷酸，用放射性核素或非放射性物質標記其末端或全鏈，可依堿基配對規律與具有互補序列的待測核酸進行雜交，以探測它們的同源程度。這一段標記的核苷酸被稱為探針。4.反向點雜交：是將多種探針固定在同一膜上，同時參與檢測的樣品DNA又互不干擾，故能一次性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統的雜交法，一次僅能檢測一個未知序列。5．缺口平移標記法：該法是利用低濃度DNaseI在DNA雙鏈上隨機切開若干個切口，然后利用E.coliDNA聚合酶I的5'■‘外切酶活性和5‘?‘聚合酶活性，使DNA鏈上的核苷酸不斷被切除，而帶放射性核素標記的dNTP不斷地被填入缺口位置，從而形成兩條鏈被均勻標記的高放射活性的探針。6．隨機引物標記法：隨機引物是各種可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺DNA的DNaseI降解物。隨機引物在較低的退火溫度下，能與各種單鏈DNA模板結合。首先使雙鏈DNA分子變性成為單鏈，然后退火使隨機引物結合于兩條單鏈模板上，當反應液中存在的4種dNTP中有一種帶放射性核素標記時，在DNA聚合酶催化下合成新的帶標記的DNA鏈。反應結束后經純化即可得到標記的DNA探針。7．末端標記法：寡核苷酸探針由于較其他類型的探針短，需要采用末端標記法。該法需要DNA分子的末端帶有羥基，而人工合成寡核苷酸的5’端本身即為羥基。其原理是利用多核苷酸激酶將[?32]ATP分子上7位磷酸基轉移至寡核苷酸鏈的5’末端，末端標記也可在3’端進行。.Southernblot雜交：是研究DNA圖譜的基本技術，在遺傳診斷、DNA圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。Southern印跡雜交的方法是將標本DNA用限制性內切酶消化后，經瓊脂糖電泳分離各酶切片段，接著，使酶切片段DNA發生變性并轉印到一固相支持物（通常是硝酸纖維素薄膜或尼龍膜）上，經固定后和標記探針進行雜交。這種方法不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息。.熒光原位雜交：是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術。它將熒光信號的高靈敏度、安全性，熒光信號的直觀性和原位雜交的高準確性結合起來，通過熒光標記的DNA探針與待測樣本的DNA進行原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進行辨別和計數，從而對染色體或基因異常的細胞、組織樣本進行檢測和診斷，為各種基因相關疾病的分型、預前和預后提供準確的依據。據。與DNA雜交，DNA與RNA雜交，RNA與RNA10．菌落雜交：用于重組細菌克隆篩選的固相雜交，稱菌落雜交，主要步驟包括：①菌落平板培養；②濾膜滅菌后放到細菌平板上，是菌落粘附到經適當飽和的吸水紙上；③菌斑溶解產生單練的、固定，用32標記的探針與菌落進行雜交；④雜交后，洗脫未結合的探針，將濾膜暴露于線膠片進行放射自顯影；⑤將自顯影膠片、濾膜、培養平板相比較，就可以確定陽性菌落。（二）選擇題【型題】1．A2．E3．D4．B5．E6．A7．C8．B9．C10．B11．A12．A13．A14．B15．A16．C17．A18．A19．B20．D21．A22．A23．A24．A25．C26．C27．D28．D29．B30．A31．E32．A33．E34．D35．D36．B37．E38．B39．A40.B【X型題】41.ABCD42.ACD43.BC47.ABD48.ACDE49.ABCD53.ABCD54.BCD55.ABC59.ABCD60.AC61.ADE（三）問答題1．根據哪三種不同的分類標準可以將雜交分為哪幾類？①根據雜交核酸分子的種類，可以分為DNA雜交；②根據雜交探針標記的不同，可以分為同位素雜交和非同位素雜交；③根據雜交介質的不同，可以分為液相雜交、固相雜交和原位雜交；其中固相雜交又可以分為菌落雜交、Southern雜交、Northern雜交、點雜交和狹縫雜交。2．簡述反義核酸技術的基本原理及其應用范圍反義核酸技術是近幾年發展起來的一項新的生物技術。它是根據堿基互補的原理，設計出能特異地同相應靶基因結合的RNA或DNA,從而影響靶基因的轉錄和翻譯，以達到調控靶基因表達的目的。反義核酸技術包括反義RNA技術，反義DNA技術及核酶技術。3.試述Northernblot雜交的操作步驟？①RNA的變性瓊脂糖電泳；②將硝酸纖維薄膜放在含有RNA電泳條帶的凝膠上；③轉印盤中的轉移緩沖液將逐漸為膠和膜上覆蓋的吸水紙吸收，從而利用④毛細作用將膠中的變性RNA分子轉移到硝酸纖維薄膜上；⑤轉印完成后，使RNA分子固定到膜上；⑥膜上的RNA分子與探針雜交;.⑦經DE射自顯影或BC他檢測技術顯示出雜交區帶。.4BC什么是肽核酸?八并簡述其應用?ABD肽核酸是一種全新的DNA類似物，在20世紀56.AD57.ABCD58.AB90年代由丹麥科學家發明。肽核酸中以中性的肽鏈62.酰刪氨基乙基苷氨酸鍵取代了4DNBCD勺戊糖磷酸二酯鍵，其余結構與DNA相似。PNA可以通過堿基互補配對的形式識別并結合DNA或RNA序歹U,形成穩定的雙螺旋結構。由于PNA不帶電荷，與DNA和RNA之間不存在靜電斥力，因而結合的穩定性和特異性都大為提高;PNA與DNA或RNA的雜交能力遠遠優于DNA、DNA或DNA、RNA床檢驗科進行基因診斷的例子。雜交，表現在很高的雜交穩定性、優良的特異性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鑒于上述諸多優點，近年來，PNA被廣泛應用在許多高科技領域。如：病原體、遺傳病的檢測，抗癌、抗病毒反義核酸的研究和應用。特別是PNA可取代核酸用于基因芯片的制備，被認為是基因芯片的升級產品。PNA還可用于定量PCR分析。隨著對PNA研究的不斷深入，PNA將顯示出更大的優越性和更為廣闊的應用前景。5．請舉例說明雜交技術在臨床檢驗科基因診斷方面的應用在臨床檢驗科，雜交技術最常用于基因診斷的例子是鐮狀細胞貧血病的基因診斷。鐮狀細胞貧血是一種單基因遺傳性疾病，病因是編碼血紅蛋白的基因發生點突變導致編碼■鏈第6位的谷氨酸被纈氨酸取代，表示為?(A3)谷一纈。在血紅蛋白基因的堿基序列上表現為第6位密碼子GAA突變為GTA，也就是在這一位點發生了A到T的點突變。由于這一突變導致基因內部一個MstII限制性酶切位點丟失，因而針對這一情況，可以設計與■珠蛋白基因雜交的核酸探針。先擴增靶片斷，并用MstII消化擴增的DNA片斷，電泳分離消化的DNA片斷。將DNA片斷轉印到硝酸纖維素薄膜上，采用Southern雜交技術檢測DNA片斷。以此將正常人、攜帶者和患者區分開來。此外，還可以用凝血因子IX基因探針檢測B型血友病，凝血因子XIII基因探針檢測A型血友病，用胰島素基因探針檢測糖尿病，用苯丙氨酸羥化酶基因探針檢測苯丙酮尿癥。以上都是雜交技術在臨6．請敘述雜交探針標記方法的種類探針的標記方法可分為放射性核素標記法和非放射性核素標記法兩大類。(1)放射性核素標記的探針，靈敏度高、特異性強，主要缺點是容易造成放射性污染，而且放射性核素的半衰期較短，必須隨用隨標。標記手段主要有：缺口平移法、隨機引物合成法和末端標記法。(