1、常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺（Spermidine）:溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學試劑級，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋

2、白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20。或轉移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。 8mol/L乙酸鉀（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸鈉（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調溶液的pH至5.

3、2，再加水定容到100ml。 0.5mol/LEDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LHEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/LHCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2

4、O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 10mg/mlRnase（無DNase）（DNasefreeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的T

5、risHCl調pH至7.5，于-20貯存。（配制過程中要戴手套） 5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。 10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力

6、攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應在臨用前配制） 2.5Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。 100Denhardt試劑（Denhardtsregent） 成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（組分V） 水 2g 2g 2g 加水至總體積為100ml,依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質，分裝成小份于-20貯存。 10標準DNA連接酶緩沖液（standardDNAligasebuffer）（粘

7、端、平端連接） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L貯液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L貯液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L貯液,2mmol/LATP: 200ul100mmol/L貯液,5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）:50ul1mmol/L貯液,0.5mg/mlBSA（組分V）（可選）:0.5ml10mg/mL貯液 ,水:2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20。 100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions） 可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80可貯存至少6

8、個月。 10mmol/LdNTP混合液 成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/LdATP 10mmol/LdCTP 10mmol/LdGTP 10mmol/LdTTP 水2ul100mmol/LdATP貯液 2ul100mmol/LdCTP貯液 2ul100mmol/LdGTP貯液 2ul100mmol/LdTTP貯液 12ul 20PEG8000/2.5MNaCl 成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量 質量濃度為20聚乙二醇 2.5mol/L氯化鈉 水20g 50ml5mol/L氯化鈉或14.6g固體氯化鈉 補足100ml 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積1

9、00ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。 20SSC 成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L檸檬酸三鈉（二水） 3mol/L氯化鈉 水88.2g 175.3g 補足1L 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10NNaOH溶液調pH為7.0，用水補足體積至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的體積分數為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15psi條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應，不可用DEPC處理Tris緩沖液。 甲酰胺（deionizedformamide） 直接購買或加Do

10、wexXG8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經Whatman1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮氣于-80貯存（防止氧化）。 磷酸緩沖液（phosphatebuffer） 按照下表所給定的體積，混合1mol/L的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1mol/L的磷酸二氫鈉（NaH2PO4H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。 1mol/L磷酸二氫鈉（ml）1mol/L磷酸氫二鈉（ml）最終pH值

11、877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 7206.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE（用于懸浮和貯存DNA） 成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/LTrisHCl 1mmol/LEDTA 水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 98.8ml Tris緩沖液（Tris-HCl

12、buffer） 將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調整終體積至1L。 濃鹽酸的體積（ml）pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 769.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液 電泳緩沖液 50Tris-乙酸（TAE）緩沖液 成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量 2mol/LTris堿 1mol/L乙酸 100mmol/LEDTA 水242g 57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L） 200ml的0.5mol/LEDTA

13、（pH8.0） 補足1L 5Tris-硼酸（TBE）緩沖液 成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量 445mmol/LTris堿 445mmol/L硼酸鹽 10mmol/LEDTA 水54g 27.5g硼酸 20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0） 補足1L 染料 1溴酚藍（bromophenolblue） 加1g水溶性鈉型溴酚藍于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylenecyanoleFF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙錠（ethidiumbromide） 小心稱取1g溴化乙錠，轉移到廣口瓶中，加100ml水

14、，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。 凝膠上樣液（gelloadingsolutions） 6堿性凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量 0.3N氫氧化鈉 6mmol/LEDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚綠 0.25二甲苯青FF 水300ul10N氫氧化鈉 120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 補足到10ml 6聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 15聚蔗糖（400型） 水1.5ml1溴酚藍 1.

15、5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.5g 補足到10ml 6溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚藍 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水2.5ml1溴酚藍 2.5ml1二甲苯青FF 1.5g 補足到10ml 6甘油凝膠上樣液（4貯存） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 50甘油 水1.5ml1溴酚藍 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6蔗糖凝膠上樣液（

16、室溫貯存） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 40聚蔗糖 水1.5ml1溴酚藍 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 4g 補足到10ml 10十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚藍 0.2二甲苯青FF 200mmol/LEDTA 0.1SDS 50甘油 水20mg 20mg 4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0) 100ul10SDS 5ml 補足到10ml 三.常用培養基 LB培養基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨

17、10g 酵母提取物5g 氯化鈉10g 如果需要用1NNaOH（1ml）調整pH至7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。 SOB培養基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化鈉0.5g 1mol/L氯化鉀2.5ml 用水補足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。 SOC培養基 成分、方法同SOB培養基的配制，只是在培養基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖

18、（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌）。 TB培養基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g 酵母提取物24g 甘油4ml 各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌）。 2YT培養基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨16g 酵母提取物10g 氯化鈉4ml 如果需要用1NNaOH（1ml）調整pH至7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板

19、需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。 YPD培養基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物10g 葡萄糖20g 用水補足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸營養缺陷型每升培養基添加1.6g色氨酸，因為YPD培養基是色氨酸限制型培養基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。 四.常用抗生素 氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。 羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg

20、/ml） 溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。 氯霉素（chloramphenicol）（

21、25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以12.5ug/ml25ug/ml的終濃度添加于生長培養基。 鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。 萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培養基。 四環素（tetracyyline）（10mg/ml

22、） 溶解100mg四環素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環素溶于無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。幾種溶液的配制方法1、PBS:取ZLI-90661 PBBS溶于于10000mll的蒸餾餾水中，混混勻，測測pH值應應在7.27.44之間，若若偏離此此范圍，請請用0.1N的的HCLL或NaOOH調整整。2、TBSS：2.1 TTriss緩沖液液配方：（0.5 MM ppH7.6）Tris（三三羥甲基基氨基甲甲烷）60.577g1N HCCL約420mml雙蒸水加至10000mllTris緩緩

23、沖液配配制方法法： 先先以少量量雙蒸水水（30005000ml）溶溶解Trris，加加入HCCl后，用用HCll（1N）或或NaOOH（1N）將pHH調至7.6， 最后雙雙蒸水加加至10000mml。此此液為儲儲備液，4冰箱中保存。2.2 TTBS配配方：Tris-HCII緩沖液液（0.5M pHH7.66）100mllNaCI8.599g (0.115mool/LL)雙蒸水加至10000mllTBS配制制方法： 先先以少量量雙蒸水水溶解NNaCll，再加加入Trris-HCll緩沖液液，最后后加雙蒸蒸水至110000ml，充充分搖勻勻。3、枸櫞酸酸鹽緩沖沖液（CCitrratee buuff

24、eer）：3.1 儲儲存液：A. 0.1M枸枸櫞酸溶溶液：稱稱取211.011g枸櫞櫞酸（CC6H8O7H20）溶于于10000mll蒸餾水水中。B. 0.1M枸枸櫞酸鈉鈉溶液：稱取229.441g枸枸櫞酸鈉鈉（C6H5Na3O72HH20）溶于于10000mll蒸餾水水中。3.2 工工作液：取9ml A液和和41mml BB液加入入4500ml蒸蒸餾水中中，溶液液pH值應應為6.00.14、胰酶（Trypsin）：4.1 ZZLI-90111胰蛋蛋白酶消消化液：常用濃度為為0.125%，即使使用前將將一滴試試劑1胰胰酶溶液液和三滴滴試劑22胰酶稀稀釋液均均勻混合合（1:3稀釋釋），則則可直接

25、接滴加使使用。胰胰酶的最最終濃度度可以根根據使用用者的要要求進行行調整，濃濃度范圍圍可以從從0.005%（1:110稀釋釋）至00.255%（1:11稀釋）。4.2 ZZLI-90110胰蛋蛋白酶：取0.055g或0.11g胰蛋蛋白酶加加入到1100mml 00.055%或0.11% ppH7.8的無無水氯化化鈣水溶溶液中，溶溶解即可可。5、胃酶（Pepsin）：4%胃蛋白白酶，用用0.11moll/L HCLL配制。（我公司備備有ZLLI-990133胃蛋白白酶消化化工作液液，不需需稀釋直直接滴加加使用，歡歡迎選購購）6、DABB：6.1 ZZLI-90332/990333 DAAB Kit

26、t：使用前只需需將試劑劑盒提供供的A、BB、C三三種試劑劑各一滴滴加至11ml雙蒸蒸水中，即即可獲得得1mll DAAB工作作液，簡簡單易用用。6.1 ZZLI-90330 DAAB：6mgDAAB溶于于10mmlTBBS（0.005M pHH7.66），再再加入00.1mml濃度度為3的H2O2，過濾濾掉沉淀淀物，即即可。7、AECC：4mg AAEC溶溶于1mml二甲甲基甲酰酰胺中，加加入144ml濃濃度為00.1MM的醋酸酸緩沖液液（pHH5.22），然然后加入入0.115mll 3%H2O2，過濾濾掉沉淀淀物。8、RIPPA：1PBSS，1%NP 40，00.5 soddiumm de

27、eoxyychoolatte，0.11% SSDS（此此液體可可長期保保存）。以以下抑制制劑以儲儲存液方方式保存存，臨用用前加入入RIPPA中。8.1 110mgg/mll PMMSF異異丙醇溶溶液（用用量為110l/ml）8.2 AAprootinnin（Siggma產產品，用用量為330l/ml）8.3 110000mM soddiumm orrthoovannadaate冷冷凍液（用量為110l/ml）9、Bloottoo A：常規使用11PBSS，5% miilk，0.055% Tweeen 20。10、Bllottto BB：與Phossphootyrrosiine抗抗體共用用，1P

28、BSS，1% miilk，0.055% Tweeen 20。部部分實驗驗中miilk可可完全去去除，但但可能引引起背景景增高。實驗室常用用貯存液液的配制制參數一、核酸及及蛋白質質常用數數據化合物 分子子量 mmax(pH77.0) 1摩爾爾溶液（ppH7.0）中中maax時的的最大吸吸收值 ODD2800/ODD2600 ATP 5507 2259 1154000 0.15CTP 4483 2271 990000 0.97GTP 5523 2253 1137000 0.66UTP 4484 2262 1100000 0.38dATP 4494 2259 1152000 0.15dCTP 446

29、7 2271 993000 0.98dGTP 5507 2253 1137000 0.66dTTP 4482 2267 996000 0.712常用核核酸的長長度與分分子量核酸核苷酸數分子量DNA485022（雙鏈鏈環狀）3.01107pBR32224363（雙雙鏈）2.8110628SrRRNA48001.6110623SrRRNA37001.2110618SrRRNA19006.1110519SrRRNA17005.511055SrRNNA1203.61104tRNA（大大腸桿菌菌）752.511043常用核核酸蛋白白換算數數據（1）重量量換算1g=110-66g 1ppg=110-112

30、g1ng=110-99g 1ffg=110-115g（2）分光光光度換換算：1A2600雙鏈DDNA=50g/mml1A2600單鏈DDNA=30g/mml1A2600單鏈RRNA=40g/mml（3）DNNA摩爾爾換算：1g 1100bbp DDNA=1.552pmmol=3.003pmmol末末端1g ppBR3322 DNAA=0.36ppmoll1pmoll 10000bbp DDNA=0.666gg1pmoll pBBR3222=22.8g1kb雙鏈鏈DNAA（鈉鹽鹽）=66.61055道爾頓頓1kb單鏈鏈DNAA（鈉鹽鹽）=33.31055道爾頓頓1kb單鏈鏈RNAA（鈉鹽鹽）=3

31、3.41055道爾頓頓（4）蛋白白摩爾換換算：100pmmol分分子量1100，0000蛋蛋白質=10g100pmmol分分子量550，0000蛋蛋白質=5gg100pmmol分分子量110，0000蛋蛋白質=1gg氨基酸的平平均分子子量=1126.7道爾爾頓（5）蛋白白質/DDNA換換算：1kb DDNA=3333 個氨氨基酸編編碼容量量=3.71104MMW蛋白白質10，0000MWW蛋白質質=2770bpp DNNA30，0000MWW蛋白質質=8110bpp DNNA50，0000MWW蛋白質質=1.35kkb100，0000MMW蛋白白質=22.7kkb DDNA4常用蛋蛋白質分分子

32、量標標準參照照物（1）高分分子量標標準參照照（2）中分分子量標標準參照照（3）低分分子量標標準參照照肌球蛋白分子量磷酸化酶BB97，4000碳酸酐酶31，000肌球蛋白212，0000牛血清白蛋蛋白66，2000大豆脻蛋白白酶21，5000-半乳糖糖甘酶BB116，0000谷氨酶脫氫氫酶55，0000抑制劑磷酸化酶BB97，4000卵白蛋白42，7000馬心肌球蛋蛋白16，9000牛血清白蛋蛋白66，2000醛縮酶40，0000溶菌酶14，4000過氧化氫酶酶57，0000碳酸酐酶31，0000肌球蛋白（FF1）8，1000醛縮酶40，0000大豆脻蛋白白酶21，5000肌球蛋白（FF2）6，

33、2000抑制劑肌球蛋白（FF3）2，5000溶菌酶14，40005常用DDNA分分子量標標準參照照物DNA/HinndDNA/EcooR/Hinnd+EcooRpBR3222/HHae23130021226621227758712394167421514840510465575804497350489436156434268458802322484335304346420273530202726757564190423451125158421321137519218974184118311247564125續上表pBR3222/HHinff1744/Hiinf1744/Haae 1744/Ta

34、ap16317261401353291451771311810781175506553100872404396500826033273444176631023129841348281141221311422718722024940234541542002419433751511182072二、常用緩緩沖液1分子克克隆常用用緩沖液液2磷酸緩緩沖液（1）255下00.1mmol/L磷酸酸鉀緩沖沖液的配配制pH1mol/L KK2HPOO4(mll)1mol/L KKH2PO4(mll)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.8

35、49.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（2）255下00.1mmol/L磷酸酸鈉緩沖沖液的配配制pH1mol/L NNa2HPOO4(ml)1mol/L NNaH22PO4(mll)5.87.992.16.012.088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8:用蒸餾餾水將混混合的兩兩種1mmol/L貯存存液稀

36、釋釋至10000mml，根根據Heendeersoon-HHassselbbalcch方程程計算其其pH值值：pH=pKK+11g(質子受受體/質子子供體)在此，pKK=66.866(255)。3電泳緩緩沖液測序凝膠加加樣緩沖沖液98%去離離子甲酰酰胺10moll/L EDTTA(ppH8.0)0.0255%二甲甲苯青FFF0.0255%溴酚酚藍甲酰胺：許許多批號號的試劑劑級甲酰酰胺，其其純度符符合使用用要求，無無須再進進行處理理。不過過，一旦旦略呈黃黃色，則則應用在在磁力攪攪拌器上上將甲酰酰胺與DDoweex XXG8混混合床樹樹脂共同同攪拌11小時進進行去離離子處理理，并用用Whaatma

37、an 11號濾紙紙過濾22次，去去離子甲甲酰胺分分裝成小小份，充充氮存于于-700。常用的電泳泳緩沖液液緩沖液使用液濃貯存液（每每升）Tris-乙酸（TTAE）1：0.04mmol/L TTriss-乙酸酸50：2242gg Trris堿堿0.0011moll/L EDTTA57.1mml冰乙乙酸100mll 0.5mool/LL EDDTA(pH88.0)Tris-磷酸（TTPE）1:0.09mmol/L TTriss-磷酸酸10:110g Triis堿0.0022moll/L EDTTA15.5mml855%磷酸酸（1.6799g/mml）40ml 0.55moll/L EDTTA(ppH

38、8.0)Tris-硼酸（TTBE）a0.500.0445mool/LL Trris-硼酸5：544g TTriss堿0.0011moll/L EDTTA27.5硼硼酸20ml 0.55moll/L EDTTA(ppH8.0)堿性緩沖液液b1:500mmool/LL NaaOH1:5mml 110mool/LL NaaOH1mmoll/L EDTTA2ml 00.5mmmoll/L EDTTA(ppH8.0)Tris-甘氨酸酸c1:255mmool/LL Trris5:155.1gg Trris250mmmol/L 甘甘氨酸94g 苷苷氨酸（電電泳級）（ppH8.3）0.1% SDSS50ml

39、10% SDDS(電電泳級)說明：TBE溶溶液長時時間存放放后會形形成沉淀淀物，為為避免這這一問題題，可在在室溫下下用玻璃璃瓶保存存5溶溶液，出出現沉淀淀后則予予以廢棄棄。以片都以11TBBE作為為使用液液（即11：5稀稀釋濃貯貯液）進進行瓊脂脂糖凝膠膠電泳。但但0.55的使使用液已已具備足足夠的緩緩沖容量量。目前前幾乎所所有的瓊瓊脂糖膠膠電泳都都以1：10稀稀釋的貯貯存液作作為使用用液。進行聚丙烯烯酰胺凝凝膠垂直直槽的緩緩沖液槽槽較小， 故通過過緩沖液液的電流流量通常常較大，需需要使用用1TTBE以以提供足足夠的緩緩沖容量量。堿性電泳泳緩沖液液應現用用現配。Triss-甘氨氨酸緩沖沖液用SS

40、DS聚聚丙烯酰酰胺凝膠膠電泳。2SDSS凝膠加加樣緩沖沖液：100mmmol/L TTrissHCCl(66.8)200mmmol/L二硫硫蘇糖醇醇（DTTT）4%SDSS（電泳泳級）0.2%溴溴酚藍20%甘油油不含DTTT的2SDSS凝膠加加樣緩沖沖液可保保存于室室溫，應應在臨用用前取11moll/L貯貯存液現現加于上上述緩沖沖液中。4凝膠加加樣緩沖沖液緩沖液類型型6緩沖液液貯存溫度0.25%溴酚藍藍40.25%二甲苯苯青FFF40%（WW/V）蔗蔗糖水溶溶液0.25溴溴酚藍室溫0.25%二甲苯苯青FFF15%聚蔗蔗糖(FFicooll4400)0.25%溴酚藍藍40.25%二甲苯苯青FFF

41、30%甘油油水溶液液0.25%溴酚藍藍440%(WW/V)蔗糖水水溶液堿性加樣緩緩沖液:300mmmol/L NNaOHH6mmoll/L EDTTA18%聚蔗蔗糖(FFicooll4400)40.15%溴甲酚酚綠0.25%二甲苯苯青FFF使用以上凝凝膠加樣樣緩沖液液的目的的有三：增大樣樣品密度度；以確確保DNNA均勻勻進入樣樣品孔內內；使樣樣品呈現現顏色，從從而使加加樣操作作更為便便利，含含有在電電塊中能能以可預預知速率率向陽極極泳動的的染料。溴溴酚藍在在瓊脂糖糖中移動動的速率率約為二二甲苯青青FF的的2.22倍，而而與瓊脂脂糖濃度度無關。以以0.55TBBF作電電泳液時時，溴酚酚藍在瓊瓊脂

42、糖中中的泳動動速率約約與長3300bbp的雙雙鏈線狀狀DNAA相同，而而二甲苯苯青FFF的泳動動則與長長4kbb的雙鏈鏈線狀DDNA相相同。在在瓊脂糖糖濃度為為0.55%11.4%的范圍圍內，這這些對應應關系受受凝膠濃濃度變化化的影響響并不顯顯著。選用哪一種種加樣染染料純屬屬個人喜喜惡。但但是，對對于堿性性凝膠應應當使用用溴甲酚酚綠作為為示蹤染染料，因因為在堿堿性pHH條件下下其顯色色較溴酚酚更藍為為鮮明。5各種ppH值的的Triis緩沖沖液的配配制各種pH值值的Trris緩緩沖液的的配制 所需pH值值（255）0.1mool/LL HCCl的體體積7145772447734347442075

43、40376385773667834579320802928.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88.58.97.0某一特定ppH值的的0.005mool/LL Trris緩緩沖液的的配制：將500ml 0.11moll/L Triis堿溶溶液與上上表所示示相應體體積（單單位：mml）的的0.11ml/L HHCl混混合，加加水將體體積調至至1000ml（2）溫度度對500mmool/LL TrrisHCll液pHH值的影影響425378175728276738377748478758579768680778781788882798

44、98380908481918582928683938784948885（6）常用用緩沖液液的pKKa值緩沖液分子量pKa值緩沖范圍Trisaa12.18.087.177.9HEPESSb283.337.477.288.2MPOScc209.337.156.677.8PIPESSd304.336.766.277.3MESe195.226.095.466.8a：三羥甲甲基氨基基甲烷；b：NN-2-羥乙基基哌嗪-N-2-乙乙磷酸；c：33-（NN-嗎啉啉代）丙丙磺酸；d：NN，N-雙（22-乙磺磺酸）哌哌嗪；ee：2-（N-嗎啉代代）乙磺磺酸。7溫度對對常用緩緩沖液ppH的影影響緩沖體系pKa(22

45、0)pKa/10Mes6.15-0.1110Ada6.60-0.1110PiPess6.80-0.0885Aces6.90-0.2000Bes7.15-0.1660Mops7.20-0.0113Tes7.50-0.2000Hepess7.55-0.0114Triciine8.15-0.2110Tris8.30-0.3110Bicinne8.35-0.1880Glycyylgllyciine8.40-0.2880三、常用酶酶的配制制1溶菌酶酶用水配制成成50mmg/mml的溶溶菌酶溶溶液，分分裝成小小份并保保存于-20。每一一小份一一經使用用后便予予丟棄。2蛋白水水解酶類類貯存液貯存溫度反應濃度

46、反應緩沖液液溫度預處理0.01mmol/L TTriss(pHH7.88)鏈霉蛋白酶酶a20mg/ml-20（溶溶于水）1mg/mml0.01mmol/L EEDTAA37自消化b0.5% SDSS0.01mmol/L TTriss(pHH7.88)蛋白酶Kcc20mg/ml-20（溶溶于水）50g/ml0.0055moll/L EDTTA37566無須預處理理0.5% SDSSa：鏈霉蛋蛋白酶是是從鏈球球菌（SStreeptoomycces griiseuus）中中分離到到的一種種絲氨酸酸酶和酸酸性蛋白白酶的混混合物。b：自消化化可消除除DNAA酶和RRNA酶酶的污染染，經自自消化的的鏈酶蛋

47、蛋白酶的的配制方方法如下下：把該該酶的粉粉末溶解解于100mmool./L TTrissHCCl(ppH7.5)、110mmmol/L NNaCll中，配配成200mg/ml濃濃度，于于37溫育11h。經經消化的的鏈霉蛋蛋白酶分分裝成小小份放在在密封試試管中，保保存-220。c：蛋白酶酶K是一一種枯草草蛋白酶酶類的高高活性蛋蛋白酶，從從林伯氏氏白色念念球菌（TTrittiraachiium albbum Limmberr）中純純化得到到。該酶酶有兩個個Ca22+結合合位點，它它們離酶酶的活性性中心有有一定距距離，與與催化機機理并無無直接關關系。然然而，如如果從該該酶中除除去Caa2+，由由于出

48、現現遠程的的結構變變化，催催化活性性將喪失失80%左右，但但其剩余余活性通通常已足足以降解解在一般般情況下下污染酸酸制品的的蛋白質質。所以以，蛋白白酶K消消化過程程中通常常加入EEDTAA（以抑抑制依賴賴于Mgg2+的的核酸酶酶的作用用）。但但是，如如果要消消化對蛋蛋白酶KK具有較較強耐性性的蛋白白，如角角蛋白一一類，則則可能需需要使用用含有11mmool/LL Caa2+而而不含EEDTAA的緩沖沖液。在在消化完完畢后、純純化核酸酸前要加加入EGGT（ppH8.0）至至終濃度度為2mmmoll/L,以鰲合合Ca22+。3無DNNA酶的的RNAA酶將胰RNAA酶（RRNA酶酶A）溶溶于100m

49、mool/LL TrrisHCll(pHH7.55)、115mmmol/L NNaCll中，配配成100mg/ml的的濃度，于于1000加熱熱15mmin，緩緩慢冷卻卻至室溫溫，分裝裝成小份份保存于于-200。四、常用抗抗生素溶溶液抗生素貯存液a工作濃度濃度保存條件嚴緊型質粒粒松弛型質粒粒氨芐青霉素素50mg/ml(溶于水水)-2020g/ml60g/ml羧芐青霉素素50mg/ml(溶于水水)-2020g/ml60g/ml氯霉素34mg/ml(溶于乙乙醇)-2025g/ml170gg/mll卡那霉素10mg/ml(溶于水水)-2010g/ml50g/ml鏈霉素10mg/ml(溶于水水)-201

50、0g/ml50g/ml四環素b5mg/mml(溶溶于乙醇醇)-2010g/ml50g/mla：以水為為溶劑的的抗生素素貯存液液通過00.222m濾濾器過濾濾除菌。以以乙醇為為溶劑的的抗生素素溶液無無須除菌菌處理。所所有抗生生素溶液液均應放放于不透透光的容容器保存存。b：鎂離子子是四環環素的拮拮抗劑，四四環素抗抗性菌的的篩選應應使用不不含鎂鹽鹽的培養養基（如如LB培培養基）。五、常用貯貯存液的的配制130%丙烯酰酰胺溶液液【配制方法法】將29g丙丙烯酰胺胺和1gg N，NN-亞亞甲雙丙丙烯酰胺胺溶于總總體積為為60mml的水水中。加加熱至337溶溶解之，補補加水至至終體積積為1000mll。用N

51、Nalggenee濾器（00.455m孔孔徑）過過濾除菌菌，查證證該溶液液的pHH值應不不大于77.0，置置棕色瓶瓶中保存存于室溫溫?！咀⒁狻勘０肪呔哂泻軓姀姷纳窠浗浂拘圆⒉⒖梢酝ㄍㄟ^皮膚膚吸收，其其作用具具累積性性。稱量量丙烯酰酰胺和亞亞甲雙丙丙烯酰胺胺時應戴戴手套和和面具?？煽烧J為聚聚丙烯酰酰胺無毒毒，但也也應謹慎慎操作，因因為它還還可能會會含有少少量未聚聚合材料料。一些價格較較低的丙丙烯酰胺胺和雙丙丙烯酰胺胺通常含含有一些些金屬離離子，在在丙烯酰酰胺貯存存液中加加入大約約0.22體積的的單床混混合樹脂脂（MBB-1 Malllinnckrrodtt），攪攪拌過夜夜，然后后用Whhat

52、mman 1號濾濾紙過濾濾以純化化之。在貯存期間間，丙烯烯酰胺和和雙丙烯烯酰胺會會緩慢轉轉化成丙丙烯酰和和雙丙烯烯酸。240%丙烯酰酰胺【配制方法法】把380gg丙烯酰酰胺（DDNA測測序級）和和20gg N，NN-亞亞甲雙丙丙烯酰胺胺溶于總總體積為為6000ml的的蒸餾水水中。繼繼續按上上述配制制30%丙烯酰酰胺溶液液的方法法處理，但但加熱溶溶解后應應以蒸餾餾水補足足至終體體積為11L?！咀⒁狻恳娚鲜雠渲浦?0%丙烯酰酰胺的說說明，440%丙丙烯酰胺胺溶液用用于DNNA序列列測定。3放線菌菌素D溶溶液【配制方法法】把20mgg放線菌菌素D溶溶解于44ml 1000%乙醇醇中，11：100稀釋

53、貯貯存液，用用1000%乙醇醇作空白白對照讀讀取ODD4400值。放放線菌素素D（分分子量為為12555）純純品在水水溶液中中的摩爾爾消化系系數為221，9900，故故而1mmg/mml的放放線菌素素D溶液液在4440nmm處的吸吸光值為為0.1182，放放線菌素素D的貯貯存液應應放在包包有箔片片的試管管中，保保存于-20?！咀⒁狻糠啪€菌素DD是致畸畸劑和致致癌劑，配配制該溶溶液時必必須戴手手套并在在通風櫥櫥內操作作，而不不能在開開放在實實驗桌面面上進行行，謹防防吸入藥藥粉或讓讓其接觸觸到眼睛睛或皮膚膚。藥廠提供的的作治療療用途的的放線菌菌素D制制品常含含有糖或或鹽等添添加劑。只只要通過過測量

54、貯貯存液在在4400nm波波長處的的光吸收收確定放放線菌素素D的濃濃度，這這類制品品便可用用于抑制制自身引引導作用用。40.11moll/L腺腺苷三磷磷酸（AATP）溶溶液【配制方法法】在0.8mml水中中溶解660mgg ATTP,用用0.11moll/L NaOOH調至至pH值值至7.0，用用蒸餾水水定容11ml，分分裝成小小份保存存于-770510mmol/L乙酸酸酰溶液液【配制方法法】把770gg乙酸酰酰溶解于于8000ml水水中，加加水定容容至1LL后過濾濾除菌。610%過硫酸酸銨溶液液【配制方法法】把1g過硫硫酸銨溶溶解于終終量為110mll的水溶溶液中，該該溶液可可在4保存數數周

55、。7BCIIP溶液液【配制方法法】把0.5gg的5-溴-44-氯-3-吲吲哚磷酸酸二鈉鹽鹽（BCCIP）溶溶解于110mll 1000%的的二甲基基甲酰胺胺中，保保存于4482BBES緩緩沖鹽溶溶液【配制方法法】用總體積990mll的蒸餾餾水溶解解1.007g鹽鹽溶液BBESN，NN-雙（22-羥乙乙基）-2-氨氨基乙磺磺酸、11.6gg NaaCl和和0.0027gg Naa2HPPO4，室室溫下用用HCll調節 該溶液液的pHH值至66.966、然后后加入蒸蒸餾水定定容至1100mml，用用0.222mm濾器過過濾除菌菌，分裝裝成小份份，保存存于-220。91mool/LL CaaCl22

56、溶液【配制方法法】在200mml蒸餾餾水中溶溶解544g CCaCll266H2OO，用00.222m濾濾器過濾濾除菌，分分裝成110mll小份貯貯存于-20?！咀⒁狻恐苽涓惺軕B態細胞時時，取出出一小份份解凍并并用蒸餾餾水稀釋釋至1000mll，用NNalggenee濾器（00.455m孔孔徑）過過濾除菌菌，然后后驟冷至至0。102.5mool/LL CaaCl22溶液【配制方法法】在20mll蒸餾水水中溶解解13.5g CaCCl26H22O，用用0.222mm濾器過過濾除菌菌，分裝裝成1mml小份份貯存于于-200。111mmol/L二硫硫蘇糖醇醇（DTTT）溶溶液【配制方法法】用20ml

57、l 0.01mmol/L乙酸酸鈉溶液液（pHH5.22）溶解解3.009g DTTT，過濾濾除菌后后分裝成成1mll小份貯貯存于-20?！咀⒁狻緿TT或含含有DTTT的溶溶液不能能進行高高壓處理理。12脫氧氧核苷三三磷酸（ddNTPP）溶液液【配制方法法】把每一種ddNTPP溶解于于水至濃濃度各為為1000mmool/LL左右，用用微量移移液器吸吸取0.05mmol/L TTriss堿分別別調節 每一ddNTPP溶液的的pH值值7.00（用ppH試紙紙檢測），把把中和后后的每種種dNTTP溶液液各取一一份作適適當稀釋釋，在下下表中給給出的波波長下讀讀取光密密度計算算出每種種dNTTP的實實際濃

58、度度，然后后用水稀稀釋成終終濃度為為50mmmoll/L的的dNTTP，分分裝成小小份貯存存于-770。堿基波長（nmm）消化系數（）LL/（mmolcm）A2591.541044G2531.371044C2719.101033T2607.401033比色杯光徑徑為1ccm時,吸光度度=MM130.5mool/LL EDDTA(pH88.0)溶液【配制方法法】在800mml水中中加入1186.1g二二水乙二二胺四乙乙酸二鈉鈉（EDDTA-Na2H22O），在在磁力攪攪拌器上上劇烈攪攪拌，用用NaOOH調節節 溶液液的pHH值至88.0（約約需200g NNaOHH顆粒）然然后定容容至1LL，分

59、裝裝后高壓壓滅菌備備用?！咀⒁狻縀DTA二二鈉鹽需需加入NNaOHH將溶液液的pHH值調至至接近88.0，才才能完全全溶解。14溴化化乙錠（110mgg/mll溶液）【配制方法法】在100mml水中中加入11g溴化化乙錠，磁磁力攪拌拌數小時時以確保保其完全全溶解，然然后用鋁鋁箔包裹裹容器或或轉移至至棕色瓶瓶中，保保存于室室溫?！咀⒁狻啃⌒模轰寤义V是是強誘變變劑并有有中度毒毒性，使使用含有有這種染染料的溶溶液時務務必戴上上手套，稱稱量染料料時要戴戴面罩。152HEPPES緩緩沖鹽溶溶液【配制方法法】用總量為990mll的蒸餾餾水溶解解1.66g NNaCll、0.0744g KKCl、00.

60、0227g Na22PO442HH2O、00.2gg葡聚糖糖和1ggHEPPES，用用0.55moll/L NaOOH調節節 pHH值至77.055，再用用蒸餾水水定容至至1000ml。用用0.222mm濾器過過濾除菌菌，分裝裝成5mml小份份，貯存存于-220。16IPPTG溶溶液【配制方法法】IPTG為為異丙基基硫代-DD-半乳乳糖苷（分分子量為為2388.3），在在8mll蒸餾水水中溶解解2g IPTTG后，用用蒸餾水水定容至至10mml，用用0.222mm濾器過過濾除菌菌，分裝裝成1mml小份份貯存于于-200。171mmol/L乙酸酸鎂溶液液【配制方法法】在800mml水中中溶解22