1、麝香保心丸對自發性高血壓大鼠心臟保護作用的研究 胡送友，田登科，陳剛領，劉俊，可燕，卞卡【摘要】目的討論麝香保心丸HP對自發性高血壓大鼠SHR心臟保護作用及其可能的機制。方法將6周齡SHR分為HP治療組、高血壓模型組,將KY大鼠作為正常血壓組，每組分3批在3個時間點給藥6周、給藥14周、停藥9周處死大鼠，尾套法測定血壓；FRAP法進展心臟組織總抗氧化才能測定；采用RT-PR考察炎癥相關因子IA-1、VA-1、IL-1和TNFRNA表達；esternBlt與ELISA法分別考察炎癥相關因子IA-1、VA-1及IL-1、TNF蛋白表達。結果HP對SHR無明顯降壓作用，但能進步SHR心臟組織總抗氧化

2、才能。PR、esternBlt與ELISA顯示給予HP6周和14周后，均能顯著抑制SHR心臟炎性相關因子IA-1、VA-1RNA表達及IA-1蛋白表達；給藥14周后，能顯著抑制炎性相關因子IL-1、TNFRNA表達及蛋白表達；停藥9周后，仍能抑制炎性相關因子IA-1、TNFRNA表達及IA-1蛋白表達。結論HP具有獨立降壓以外的對SHR心臟保護作用，其機制可能與抑制心臟組織炎癥反響及降低組織氧化應激有關。【關鍵詞】麝香保心丸自發性高血壓大鼠炎癥心臟原發性高血壓Keyrds：Heart-prtetinguskpill;Spntaneuslyhypertensiverats;Inflaatin;H

3、eart;Hypertensin高血壓病會引起血流動力學異常變化和血管重塑，導致心、腦、腎等靶器官損害。心肌肥大，心肌間質纖維化及大小冠脈血管構造和功能的改變是高血壓靶器官心臟的主要損害，從預后意義來講，是最嚴重的并發癥。降低并控制血壓的同時，逆轉或減輕高血壓靶器官損害已成為國際上高血壓病治療的主要目的。炎癥反響不僅參與了高血壓的發生開展，更是與高血壓心、腦、腎等多個靶器官損害親密相關1。我們中心先期研究的結果也說明,自發性高血壓大鼠多個靶器官存在著明顯的炎病癥態存在2。麝香保心丸是最具代表性的治療冠心病的有效中成藥，動物實驗和臨床研究證明3，4，有抗心肌缺血、保護心肌作用，但其作用機制仍未說

4、明，本實驗通過觀察麝香保心丸對自發性高血壓大鼠SHR心臟炎病癥態和氧化應激的影響，討論麝香保心丸的心肌保護作用及其可能的機制，為其臨床應用及二次開發提供新的根據。1器材與方法1.1動物與藥物SPF級SHR36只，KY大鼠18只，均為雄性，6周齡，由中科院上海實驗動物中心提供，合格證號SXK滬2022-0005。麝香保心丸由上海和黃藥業消費(批號G060601)。1.2試劑及儀器TrizlRNA提取試劑均購于Siga公司；RT-PR試劑盒為Bi-Dev-Teh公司產品；引物由上海生物工程技術公司合成；抗體均購于Sataruz公司；IL-1ELISA試劑盒批號：RT110371與TNFELISA試

5、劑盒批號：RT110371均購于美國ADL公司。PR擴增儀，德國Bietra公司；UV-1700紫外分光光度計，日本島津公司；GIS凝膠圖像分析系統，上海天能科技產品；NIBP鼠尾無創血壓測量分析系統，上海奧爾科生物科技產品；Spetraax190酶標儀，美國leularDevies公司產品；D-78532高速冷凍離心機，德國Hettih公司產品；超低溫冰箱，美國Ther公司產品。1.3動物分組及給藥將36只SHR隨機分為麝香保心丸HP組和SHR模型SHR組，每組18只，以同周齡的KY大鼠為正常對照KY組，每天上午8：009：00HP組每只大鼠給予麝香保心丸13.5g/kg溶于1l蒸餾水中灌胃

6、；KY組與SHR組給予一樣體積的蒸餾水。分別在給藥6周、給藥14周和停藥9周后分3批處理動物。1.4檢測指標1.5統計學方法各組結果以s表示,組間差異用單因素方差分析和q檢驗。P0.05為差異有統計學意義。2結果2.1HP對SHR血壓值的影響由表2可見，模型組SHR收縮壓較正常對照KY大鼠明顯升高(P0.05)。給藥HP6周，14周及停藥9周后，SHR的收縮壓與模型組大鼠比較無明顯差異(P0.05)。表2HP對SHR血壓值的影響略2.2HP對SHR心臟IA-1和VA-1表達的影響如圖1(a)、1(b)、1()所示，模型組SHR心臟IA-1和VA-1的RNA表達顯著高于正常KY組(P0.05)，

7、HP治療后(給藥6周，給藥14周)可顯著降低SHR心臟IA-1和VA-1的RNA表達程度(P0.05)；停藥9周后，仍可顯著降低IA-1RNA表達程度(P0.05)，但對VA-1RNA影響無統計學差異。如圖2(a)、2(b)、2()所示，與KY大鼠比較，模型組SHR心臟可見IA-1蛋白的高表達(P0.05)。在各處理批次給藥6周，給藥14周，停藥9周HP均可以顯著降低IA-1蛋白的表達程度(P0.05),但對VA-1蛋白影響無統計學差異。2.3HP對SHR心臟IL-1和TNF表達的影響如圖1(a)、1(d)、1(e)所示，模型組SHR心臟TNF的RNA表達顯著高于正常組(P0.05)，HP治療

8、后(給藥6周，給藥14周，停藥9周)可顯著降低SHR心臟TNF的RNA表達程度(P0.05)；但對IL-1而言，僅在HP給藥14周后，能顯著降低SHR心臟的IL-1RNA表達程度(P0.05)，給藥6周后與停藥9周后對對SHR心臟IL-1RNA影響均無統計學差異。如表3所示，與KY大鼠比較，模型組SHR心臟可見TNF與IL-1蛋白的高表達(P0.05)。HP給藥14周后均可以顯著降低IL-1和TNF的蛋白表達程度(P0.05)；給藥6周與停藥9周對SHR心臟TNF與IL-1蛋白影響均無統計學差異。表3HP對SHR心臟炎性因子TNF及IL-1蛋白表達的影響略2.4HP對SHR心臟總抗氧化才能的影

9、響由表4可見，12，20，29周齡SHR心臟組織總抗氧化程度均明顯低于KYP0.05，給予HP6周和14周后，均可以顯著進步SHR心臟組織總抗氧化程度P0.05，在停藥9周后，心臟組織總抗氧化程度仍明顯高于SHR組P0.05。表4HP對SHR心臟總抗氧化才能的影響略轉貼于論文聯盟.ll.3討論高血壓病對靶器官心臟的主要損害是心肌肥大，心肌間質纖維化以及大小冠脈血管構造和功能的改變。長期的壓力負荷會導致心肌細胞肥大、間質膠原增多。心肌膠原基質的聚集和纖維化使心臟的順應性和舒張功能降低。上述變化的發生是由心臟機械因素或體液因素所激活，并有多種生長因子及血管活性物質所介導，如血管緊張素Ang、醛固酮

10、等。Ang通過其型受體ATR介導膠原生成，使蛋白質合成增加，心肌細胞發生肥大。另一方面，緩激肽、前列腺素、N可以使膠原降解。膠原合成與降解比例失調最終導致心肌肥厚的發生。本實驗結果顯示SHR7周齡時動脈收縮壓明顯高于同齡KY，且血壓隨年齡增加而升高，29周齡時血壓已顯著高于同齡KY，提示7周齡SHR可能已產生心肌損傷。HP有抗心肌缺血、保護心肌作用，但其作用機制仍未說明。本實驗以SHR為高血壓心臟損害動物模型，結果發現給予HP6周和14周后，能顯著抑制SHR心臟炎性相關因子IA-1、VA-1RNA表達及IA-1蛋白表達；給藥14周后，能顯著抑制炎性相關因子IL-1、TNFRNA表達及蛋白表達；

11、停藥9周后，仍能抑制炎性相關因子IA-1、TNFRNA表達及IA-1蛋白表達。眾多證據顯示710,炎癥反響可能參與了高血壓心臟損害。使用免疫抑制劑sA影響NF-B依賴信號通路或者使用NF-B的抑制劑治療dTGR大鼠，均能減輕炎癥細胞浸潤和心肌肥厚。IA-1、VA-1可介導白細胞與內皮細胞粘附，白細胞粘附于內皮細胞和組織浸潤，導致組織損傷，是炎癥反響重要的標記物7。Ykyaa報道8心肌細胞與激活的單核細胞體外培養，心肌細胞蛋白合成增加，在參加抗IA-1單克隆抗體后，心肌細胞蛋白合成受到顯著抑制。IL-1可使-腎上腺素受體與腺苷酸環化酶脫耦聯，心肌收縮力降低。研究報道9壓力負荷刺激巨噬細胞趨化因子

12、表達增加，引起巨噬細胞大量聚集，巨噬細胞產生許多細胞因子，以IL-1分泌尤為顯著，其能促進心肌細胞的生長和左室重構。連續給大鼠腹腔注射TNF會使左室功能時間依賴性降低并伴隨左室肥厚，機制可能是使心肌細胞外基質金屬蛋白水解酶活性增加,導致基質降解,同時刺激成纖維細胞增殖,參與心室重構10。Sun2對SHR高血壓靶器官心臟組織炎病癥態考察后，發現SHR心臟組織炎癥相關因子IA-1,TNF,IL-1，PPAR顯著高于KY，提示SHR心臟存在著明顯的炎病癥態。由此可見炎性相關因子IA-1,VA-1，TNF,IL-1在高血壓心臟損害中起著重要作用。本實驗研究發現HP對SHR的血壓無明顯影響，說明HP可能

13、是通過抑制心臟組織炎癥反響對SHR心臟起保護作用，且這種作用是獨立于降壓作用的。已有研究顯示11SHR心臟重量與體重之比在高血壓前期如34周齡以較KY明顯增加，心臟后乳頭肌心肌細胞增大。甚至有研究發現，SHR左室重量與體重之比早在剛出生時即較同齡KY明顯增加。說明SHR心臟肥大可能并不完全與高血壓病有關。炎癥損傷多伴隨大量RS的產生，如-2、H和H22，導致氧化應激的產生。RS可直接修飾蛋白質、脂質、糖類和DNA，引起組織損傷。RS還可通過激活對氧化復原敏感的核轉錄因子NF-B，上調粘附分子、細胞因子、趨化因子等促炎因子的表達，如IA-1、IL-1、TNF等，引起血管炎癥。過量產生的-2可消耗N生成氧化才能更強的過硝基陰離子N-，使N的生物利用度降低，損傷血管的舒張功能12,13。此外，-2程度的增加，能通過下調可溶性鳥苷酸環化酶sG)表達、抑制sG活性和GP依賴性蛋白激酶GK-1活性而影響平滑肌層的N/GP信號途徑從而影響血管功能14。本實驗研究發現12，20，29周齡SHR心臟組織總抗氧化程度均明顯低于KY，提示S