1、實驗6肝炎甲、乙、丙的意義實驗六一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）測定二、分析肝炎標志物檢驗結果三、類風濕因子（RF）的測定四、分析生化全項結果一、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）測定 乙型肝炎的病原體是乙肝病毒（HBV），由于至今還不能成功地對該病毒進行分離培養(yǎng)，所以，乙肝的診斷主要依賴于乙肝標志物（HBsAg、HBsAb 、 HBeAg 、HBeAb 、抗HBc)的檢測，在大型醫(yī)院檢驗科應用PCR技術進行HBVDNA（乙肝核酸）檢測，來判斷HBV是否復制，乙肝患者傳染性強弱。 HBsAg是臨床使用最廣泛的診斷乙肝的指標。因此，本實驗來介紹HBsAg的檢測。常用方法1、ELISA 2 、金標法

2、洗板待測抗原底物溫育顯色YYYEY酶標抗體EYEYYYYYYYEYEYEYYYYEYEYEY洗板固相抗體1、ELISA結果判斷按照試劑盒確定的Cut-off值判斷結果 ELISA測定的“灰區(qū)” （可疑結果的含義）定性酶免疫測定的CUT-OFF值2、HBsAg 膠體金法【測定原理】 HBsAg 膠體金法檢測試劑條采用高度特異性的抗體抗原反應及免疫層析分析技術，試劑條含有被預先固定于膜上測試區(qū)（T）和質控區(qū)（C）的抗體。雙抗體夾心法G區(qū)：金標特異性抗體(兔型)C區(qū)：羊抗兔IgT區(qū)：特異性抗體 吸水紙標本這條帶是HBsAg 抗體-HBsAg-金標粒子的復合物在膜上結合形成的。如是陰性，則測試區(qū)（T）

3、內將沒有紫紅色條帶。無論HBsAg是否存在于標本血樣中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質控區(qū)（C）內。質控區(qū)（C）內所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標本，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內控標準。【操作步驟】在進行測試前必須先完整閱讀使用說明書，使用前將試劑條和血樣標本恢復至室溫（20-30）。 1 從原包裝鋁箔袋中取出試劑條，在1小時內應盡快地使用。 2 將試劑條插入血清/血漿標本中。注意：血清/血漿標本液面不能超過試劑條的標記線。 3 等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結果應在15分鐘時讀取。 30分鐘后判定無效。弱陽性標本會在15分鐘至30分鐘出現(xiàn)T線。【結果判定】陽性（+）：兩條紫紅色條帶

4、出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內，另一條位于質控區(qū)（C）。陽性結果表明：標本中含有乙肝表面抗原（HBsAg）。 陰性（-）：僅質控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內無紫紅色條帶出現(xiàn)。陰性結果表明：標本中檢測不出乙肝表面抗原（HBsAg）。 無效：質控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑條已變質損壞。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系。 金溶膠標記蛋白質，膠體金顆粒具有高電子密度的特性，故在金標蛋白的抗原抗體結合處，顯微鏡下可見黑褐色顆粒；當這些標記物在相應的標記處大量聚集時，可在載體膜上

5、呈現(xiàn)肉眼可見紅色或粉紅色斑點(線)，從而用于抗原或抗體物質的定位或定性。 注意：測試區(qū)（T）內的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時間內，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應判為陽性結果。【靈敏度和特異性】HBsAg 試劑條在15 分鐘時可檢測出5ng/mlHBsAg，30分鐘時可檢測出1ng/ml HBsAg。 并與ELISA 試劑條比較，實驗表明HBsAg 試劑條的靈敏度可達到99.7%，特異性為99.66%。二、分析肝炎標志物檢驗結果 （一） 乙型肝炎的診斷標志物乙型肝炎表面抗原（HBsAg）乙肝病毒前S1抗原抗乙肝病毒前S1抗體乙肝病毒前S2抗原抗乙肝病毒前S

6、2抗體 乙型肝炎核心抗原（HBcAg） 乙肝核心抗體-IgG 乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）乙型肝炎e抗原（HBeAg）乙型肝炎e抗體（抗-HBe ）乙肝核心抗體-IgM乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 生物學性狀 存在于Dane顆粒的表面 位于病毒表面 是一種糖蛋白 4種亞型(adr,adw,ayr,ayw) 判斷HBV感染的指標之一 刺激機體產(chǎn)生保護性抗體即抗-HBs乙型肝炎病毒 ( Hepatitis B Virus )Dane 顆粒 (schematicSurface AgCore Ag(also “e” Ag)DNAHBV 陽性血清電鏡圖Dane 顆粒 檢測方法： SPRIA（固相放射

7、免疫法） ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗） RPHA（反向間接血凝試驗） 化學發(fā)光法 可對血清中的HBsAg進行定量檢測，對肝炎病人動態(tài)療效觀察很有價值臨床意義（1）乙肝的篩選和普查。（2）HBsAg陰性不能完全排除乙型肝炎。（3）同時出現(xiàn)HBsAg和抗-HBs，可能是不同亞型重復感染。 （4）如果僅表現(xiàn)為HBsAg陽性者，傳染性較弱。 乙型肝炎表面抗體(HBsAb) 生物學性狀 是一種保護性抗體 位于病毒表面 是機體感染或接種乙肝疫苗的標志 如一過性HBsAg陽性，則抗-HBs可以為陰性臨床意義（1）抗-HBs陽性提示急性感染后的康復。（2）在接受抗-HBs陽性血液的受血者中，可出現(xiàn)短暫性的抗

8、-HBs陽性。（3）HBV疫苗接種后，可出現(xiàn)抗-HBs陽性。（4）抗-HBs與HBsAg同時陽性可見于暴發(fā)性肝炎或慢性活動性肝炎患者。（5）HBsAg含量消失同時伴抗-HBs的出現(xiàn)，是目前臨床上慢性乙型肝炎治療的最終目標。 乙型肝炎e抗原(HBeAg) 生物學性狀 是乙肝傳染性的標志 HBeAg陽性可能性越大 HBsAg效價越高檢出率就越高 HBeAg陽性標志著較強的感染和傳染性 乙型肝炎e抗體(HBeAb) 生物學性狀 多出現(xiàn)于急性肝炎恢復期的病人中 比抗-HBs轉陽要早 常在HBsAg即將消失或已經(jīng)消失時檢出 存在于乙肝恢復期及痊愈的病人血清中 也可出現(xiàn)于慢性肝炎 肝硬化或無癥狀的HBsA

9、g攜帶者可長期存在乙型肝炎核心抗體(HBcAb-IgM) 生物學性狀 早期HBV感染的特異性血清學標志 效價降低常提示預后較好 有助于區(qū)分慢性活動性或非活動性肝炎 暴發(fā)型乙型肝炎診斷 乙型肝炎核心抗體(HBcAb-IgG) 生物學性狀 出現(xiàn)較早 不是保護性抗體 有流行病學調查意義HBV血清學標物臨床意義血液傳染性HBsAg抗HBs抗HBcHBeAg抗HBe+-+-潛伏期或者急性乙肝早期高+-+-急性或者慢性感染，以抗HBV-IgM鑒別（“大三陽”）高+-+-+乙肝后期或者慢性攜帶者（“小三陽”）低-+-+痊愈或者恢復期，有免疫力無-+-痊愈，有免疫力無-+-過去感染，但無法檢出抗HBs；低水平

10、慢性感染未知-+-疫苗接種或者很早以前曾感染過無 不同血清標志物組合模式的臨床意義乙肝病毒前S1蛋白(pre-S1) 生物學性狀 僅在HBV-DNA陽性血清中檢出 傳播病毒的危險性明顯高前S抗原 屬HBV表面抗原的組成部分，前S1抗原（蛋白）反映病毒的復制，與HBV的傳染性有關。前S1抗原檢出率以慢型活動性肝炎（乙肝）最高，急性乙肝時，前S1抗原與HBeAg平行存在，比HBsAg消失早，作為反映病毒消除的指標優(yōu)于HBsAg。前S1抗原與HBV-DNA的相關性優(yōu)于HBeAg，可作為病毒復制與傳染性標志。血清前S1抗原相對含量的變化可以提示HBV的愈后，持續(xù)陽性，則預示HBV向慢性化轉變。前S1抗

11、原已成為檢測乙型肝炎的新指標。 兩對半和三對的檢測方法檢測方法兩對半三對雙抗夾心法前S1雙抗夾心法表面抗原HBsAg雙抗夾心法表面抗體HBsAb雙抗夾心法e抗原HBeAg竟爭法e抗體HBeAb竟爭法核心抗體HBcAb病例分析2006年3月16日我院檢驗科檢測1名RA患者，其結果 HBsAg(-) HBeAg(-) HBsAb(-) HBeAb(-) HBcAb (-) Pre-S1Ag(+)HBV DNA與大三陽 1. 樣本取樣有問題，比如溶血、血脂含量高、還有其他許多未明的抑制因子。2. 突變，一般國內試劑盒PCR檢測時設計的靶位點都是針對主流的流行株，個別少見毒株或突變的毒株則無法檢測。

12、檢驗人員通過復查結果正確，在檢驗報告單上注明建議臨床作HBV DNA檢查。 理由：將ELISA檢測陰性的血清，使用PCR技術檢測乙肝核酸，結果發(fā)現(xiàn)，在HBSAg陰性的血清中HBV DNA陽性率占10，索鳳霜等人報道，在295例HBSAg陰性的血清標本中Pre-S1Ag(+)13例，占4.4%。 說明在HBSAg陰性的血清中Pre-S1Ag(+)確實存在，如果只作乙肝兩對半，就會造成漏檢，漏檢的這部分患者如果參加義務獻血，將對輸血的安全性造成危害。所有，當存在上述模式時，乙肝建議再作乙肝核酸檢查，看病毒是否復制生物學性狀免疫學檢測學檢測免疫免疫 屬小RNA病毒科 特異性抗體檢測 ELISA 化學

13、發(fā)光法（二）甲型肝炎病毒機體感染HAV后，可產(chǎn)生IgM、IgA、IgG抗體，抗HAV-IgM是病毒衣殼蛋白抗體。抗HAV-IgA是腸道粘膜分泌的局部抗體，抗HAV-IgG病愈后可長期存在。抗HAV-IgG陽性，提示即往感染，可作為流行病學調查的指標。抗HAV-IgM陽性，甲肝主要表現(xiàn)為急性黃疸性肝炎，所以，甲肝重在早期診斷，2周為100%是陽性，1月為76.5%，3月為23.5%，6月為5.9%，12月可為陰性。（三）丙型肝炎病毒感染 生物學性狀 丙肝病毒（heptatitis C Virus，HCV） 是導致丙型肝炎的重要病原體 抗HCV不是中和抗體，無保護性 抗HCV是HCV感染的標志性物

14、質 免疫學檢測 HCV-IgM陽性可作為HCV活動性復制的血清學標志。 HCV-IgM與慢性丙肝患者的急性發(fā)作有關。 抗HCV-IgG （RNA） 機體感染HCV后，可產(chǎn)生IgM、 IgG抗體，一般在發(fā)病4周后抗HCV-IgM可陽性，持續(xù)1-4周。 HCV感染后多為慢性肝炎。所以，HCV的診斷多檢測IgG，測HCV-IgG陽性，說明患者有感染，輸血后肝炎有80%-90%的患者抗HCV-IgG陽性。 HCV感染后還可用PCR技術檢測病毒核酸，其為HCV的確診試驗。判斷病毒是否復制。 抗HCV-IgM超過半年不能轉陰者，可能已轉為慢性丙型肝炎。 抗HCV-IgG陽性表明已有HCV感染，經(jīng)常輸血、接

15、受血制品治療的患者，易合并HCV感染，并且易轉為慢性肝硬化、肝Ca。 三、類風濕因子（RF）的測定膠乳凝集試驗也是一種間接凝集試驗，它是以聚苯乙烯膠乳微粒作為惰性載體。早在1956年，Singer等首先以膠乳吸附IgG，檢測了人血清中類風濕因子(RF)。類風濕因子(rheumatoid factor,RF)是由于感染因子（細菌、病毒等）引起體內產(chǎn)生的以變性IgG（一種抗體）為抗原的一種抗體，故又稱抗抗體。屬IgM型。可與IgGFc段結合,常見的類風濕因子有I gM型、IgG型IgA型和IgE型。只有類風濕因子的量超過一定的滴度時稱類風濕因子陽性。由于I gM型類風濕因子是類風濕因子的主要類型，

16、而且具有高凝集的特點，易于沉淀，故臨床上主要測定IgM型類風濕因子，測定方法為乳膠凝集法和酶聯(lián)免疫吸附法。 乳膠凝集法一、原理： RF是一種主要發(fā)生于類風濕性關節(jié)炎患者體內的抗人變性IgG抗體，可與IgG的Fc段結合。將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，此致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時，即可發(fā)生肉眼可見的凝集。 二、操作： 1、在反應孔中加1滴未稀釋血清（20ul）； 2、然后加1滴乳膠RF試劑在血清中； 3 、充分混勻后搖動反應板2分鐘，于直射光下觀察，出現(xiàn)肉眼可見的凝集為陽性，均勻渾濁為陰性。陽性與陰性對照操作同上。 三、結果觀察：凝集出現(xiàn)RF20IU/mL為陽性無凝集出現(xiàn)RF20I

17、U/mL為陽性，須稀釋，血清以生理鹽水倍比稀釋以測定滴度，1：2，1：4，1：8，1：16等四、參考值： 成人 RF20IU/mL臨床意義RF主要為IgM類自身抗體，但也有IgG類、IgA類和IgE類。各類RF臨床意義有所不同。RF是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體。未經(jīng)治療的類風濕性關節(jié)炎患者其陽性率為80%，且滴定度常在1：160以上。臨床上動態(tài)觀察滴定度多少，可作為病變活動及藥物治療后療效的評價。其他風濕性疾病如SLE陽性率為20%25%；硬皮病與皮肌炎陽性率為10%24%，滴定度較低。類風濕性關節(jié)炎（RA）患者和約50%的健康人體內都存在有產(chǎn)生RF的B細胞克隆，在變性IgG（與抗原結

18、合的IgG）或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。健康人產(chǎn)生RF的細胞克隆較少，且單核細胞分泌的可溶性因子可抑制RF的產(chǎn)生，故一般不易測出。 RF有IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五類，用凝集試驗法測出的主要是IgM類。多數(shù)作者認為，IgM類RF的含量與RA的活動性無密切關系；IgG類RF的含量與RA患者的滑膜炎、血管炎和關節(jié)外癥狀密切相關。IgA類RF見于RA、硬皮病、SLE，是RA臨床活動的一個指標。IgD類RF研究甚少。IgE類RF除RA患者外，也見于青年型RA。在RA患者，高效價的RF存在并伴有嚴重的關節(jié)功能受限時，常提示預后不良。在非類風濕患者中，RF的陽性率隨年齡的增加而增加

19、，但這些人以后發(fā)生RA者極少。 謝謝四、分析生化全項結果1.總膽紅素 正常情況： (5.1-17.1)umol/L 增高： 急、慢性肝炎，梗阻性黃疸，血色素沉著癥，肝癌，膽結石，膽管炎，肝硬化，溶血性疾病。2.間接膽紅素 正常情況： (1.7-13.7)umol/L 增高： 溶血性疾病,葡萄糖醛酸轉移酶缺乏癥。 3.直接膽紅素 正常情況： (0-3.4)ummol/L 增高： 肝炎,肝硬化,藥物性肝損害,肝癌,肝內結石,膽道阻塞。四、分析生化全項結果4谷丙轉氨酶（ALT）升高：肝膽疾病包括：傳染性肝炎、肝癌、肝硬化、脂肪肝、膽管炎、膽囊炎心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、腦出血等骨骼肌疾病：多發(fā)性

20、肌炎、肌營養(yǎng)不良某些藥物和毒物可引起活性升高，如酒精等生理性：休息不好、疲勞、精神緊張等均可引起輕度升高5谷草轉氨酶（AST）升高：心肌梗塞時，血清中AST活力升高，AST也可來源于肝細胞，各種肝病（甲、乙、丙、丁、戊）都可以引起升高，中毒性肝炎會更高；肌炎、胸膜炎、腎炎、肺炎輕度升高6堿性磷酸酶(ALP)：正常值：50-170U/L。升高見于急、慢性黃疸型肝炎、阻塞性黃疸、膽道結石癥、膽管癌、肝癌、纖維性骨炎、佝僂病、骨折修復期。7轉肽酶（GGT）：正常值：男性40U/L，女性30U/L。升高見于（1）生理性增高：例如飲酒后；（2）病理性增高：傳染性肝炎、肝硬化、胰腺炎、原發(fā)或繼發(fā)性肝癌、肝

21、阻塞性黃疸、膽汁性肝硬化、膽管炎、胰頭癌、膽道癌等。8三蛋白（總蛋白TP、白蛋白ALB、球蛋白GLB）總蛋白升高(TP)：急性失水時如嘔吐、腹瀉、高熱等血液濃縮、 合成增加，如骨髓瘤患者總蛋白減低：營養(yǎng)不良或消耗過多，如慢性腸道疾病引起吸收不良；結核病、甲亢和惡性腫瘤等。 白蛋白降低：合成障礙如肝功能異常、嚴重燙傷、腎病綜合征、潰瘍性結腸炎等球蛋白升高：如果白蛋白降低；球蛋白升高，即白蛋白/球蛋白的比例倒置，提示類風濕性關節(jié)炎、腎炎、結核病、肝硬化等。9尿素(BUN)升高：生理因素有：高蛋白飲食 病理因素有：常見于腎臟因素；其次為非腎臟因素 腎前性：如劇烈嘔吐、幽門梗阻、腸梗阻、長期腹瀉 腎性

22、：急性腎小球腎炎、腎病晚期、腎功能衰竭等 腎后性：前列腺腫大、尿路結石、膀胱腫瘤等尿路阻塞引起血液尿素升高10肌酐(CREA)：腎病初期不升高；腎病晚期直至腎實質性損害，肌酐才升高11血糖(GLU)升高：生理性升高見于餐后12小時。 病理性升高見于糖尿病、顱內壓升高的顱腦外傷、顱內出血、腦膜炎等 由脫水引起的如嘔吐、腹瀉、高熱等可引起血糖輕度升高降低：肌餓和劇烈運動可引起低血糖（生理性） 胰島素分泌過多或嚴重肝病患者（病理性）12尿酸(UA)（對痛風診斷最有意義） 升高：痛風患者尿酸升高，但是有時也會出現(xiàn)正常；腎功能減退、白血病、氯仿中毒、鉛中毒、等常見升高（病理性） 妊娠反應、食用富含核酸的

23、食物均可引起尿酸升高。13總膽固醇(CHOL) 血脂水平取決于生活飲食營養(yǎng)因素，現(xiàn)在國際上以顯著增加冠心病危險的膽固醇水平作為劃分界限，40歲以上人群參考范圍劃分標準如下：正常5.17mmol/l輕度升高：5.176.47mmol/l高膽固醇血癥：6.47mmol/l嚴重高膽固醇血癥：7.76mmol/l影響膽固醇水平的因素有：年齡與性別，隨年齡而升高，但是到70或80歲后有所下降；中青年女性低于男性，50歲后女性高于男性。長期的高膽固醇、高脂肪、高熱量飲食可升高膽固醇；遺傳因素其他如缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可使膽固醇升高14甘油三脂(TG)：正常：2.3mmol/l輕度升高：2.34.

24、5 mmol/L高甘油三脂血癥：4.5 mmol/l高危：11.3 mmol/l 高甘油三脂血癥有原發(fā)的和繼發(fā)的兩種 原發(fā)的指-遺傳因素,如家族性的高甘油三脂血癥； 繼發(fā)的可見于糖尿病、腎病、妊娠等； 單獨的高甘油三脂(TG)不是冠心病的危險因素，只有伴以高膽固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL-C)升高、高密度脂蛋白(HDL-C)降低等情況時才有病理意義。15高密度脂蛋白（HDL-C）：降低不好，（表明血管彈性差、脆性大，易破裂）：降低 冠心病的危險增加：多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化； 高甘油三脂血癥，常伴有高密度脂蛋白結果降低； 肥胖者、吸煙者也多半有高密度脂蛋白降低升高： 適量

25、飲用葡萄酒、長期體力勞動會使高密度脂蛋白升高（血管彈性較好）16低密度脂蛋白（LDL-C）：，升高不好，是動脈粥樣硬化發(fā)展的危險因素升高：動脈粥樣硬化的指標一般：3.36mmol/l以下（合適水平）邊緣或輕度危險：3.364.1mmol/l危險水平：4.41以上mmol/l(是指動脈粥樣硬化發(fā)生的潛在危險性)17血清載脂蛋白(apoA1)降低不好，(apoA1)可以代表高密度脂蛋白的水平，但是升降不一定與高密度脂蛋白呈比例， 降低：冠心病、腦血管病患者：高密度脂蛋白偏低（HDL-C）、載脂蛋白(apoA1) 也偏低家族性的高甘油三脂患者：高密度脂蛋白偏低（HDL-C），但是載脂蛋白(apoA1

26、)不一定低，不增加冠心病的危險。家族性混合型的高脂血癥患者，載脂蛋白(apoA1)與高密度脂蛋白（HDL-C）都會降低，冠心病的危險性高。18載脂蛋白(apoB)升高不好， 因此降低載脂蛋白(apoB)，可以降低冠心病的發(fā)病，促進動脈粥樣斑塊的消退。是各項血脂指標中比較好的動脈粥樣硬化標志物。(apoB)主要代表低密度脂蛋白（LDL-C）的水平。載脂蛋白(apoB)升高，是冠心病的危險因素。 19 膽汁酸（TBA）：正常值：0-10mol/L（微摩爾/升）。能特異性地反映肝臟的功能，當肝功能損害時，血清膽汁酸升高往往比膽紅素早而明顯。 20.血清鉀K 增高：嚴重溶血，感染燒傷，心功能不全呼吸障礙，休克，腎功衰竭，洋地黃大量用。降低：堿中毒，使用胰島素后，腎上腺皮質功能亢進，消化道失鉀，嘔吐及腹瀉，腎小管性酸中毒 21.血清鈉NA 增高：嚴重脫水，大量出汗，高燒，燒傷，糖尿病性多尿，腎上腺皮脂功能亢進，原發(fā)及繼發(fā)性醛固酮增多癥。降低：腎皮質功能不全，重癥腎盂腎炎，糖尿病，嘔吐及腹瀉，抗利尿激素過多 22.血清氯CL 增高：高鈉癥，呼吸性堿中毒，高滲性脫水，腎炎少尿及尿道梗塞。降低；低鈉血癥，嚴重嘔吐，腹瀉，胃液胰液膽汁大量丟失，腎功減退，及阿狄森氏病 23.血清鈣CA 增高：骨腫瘤，甲狀旁腺機能亢進，急性骨萎縮，腎上腺皮質功能減退等。降低：維生素