1、細胞工程：是指以細胞為對象，應用生命科學理論，借助工程學原理與技術，有目的地利用或改造生物遺傳性狀，以獲得特定的細胞、組織產品或新型物種的一門綜合性科學技術。細胞培養的操作方式有：分批式培養(batch culture)，流加式培養(feeding culture)， 半連續式培養(semi-continuous culture)，連續式培養(continuous culture) ，灌流式培養(perfusion culture)分批式培養(batch culture)，細胞和培養基一次性加入培養容器中，待細胞增長和產物積累到適當時間，一次性收獲細胞、產物和培養基的方法。流加式培養(feed

2、ing culture)在分批培養的過程中，間歇或連續補加一種或多種培養成分的培養方法。一般接種體積為容器總體積的1/2-1/3?？煞譃閱我谎a料和反復補料兩種類型。半連續式培養(semi-continuous culture)，重復分批式培養或換液培養。在培養過程中，每間隔一段時間從中取出部分培養基和細胞（一般取出1/4-1/2體積），再用新的培養液補足到原有體積，使培養容器內的原有體積不變。連續式培養(semi-continuous culture)，在培養過程中以一定速度連續不斷地加入新鮮培養液，并以同樣速度收獲含有細胞的培養液，以保持培養體積的恒定。灌流式培養(perfusion cul

3、ture)，在培養過程中，不斷補充新鮮培養液，同時回收原來的培養液，細胞保留在培養容器中。植物無性繁殖過程中器官發生方式：不定芽型，器官型，器官發生型，胚狀體型，原球莖型。 胚狀體：是在組織培養中分化產生的具有芽端和根端，類似合子胚的結構。細胞分化和形態建成途徑一：外植體愈傷組織分生細胞團不定芽或不定根完整小植株途徑二：外植體頂芽或腋芽（無菌扦插）不定根完整小植株途徑三：外植體愈傷組織胚狀體完整小植株途徑四：莖尖或側芽原球莖毛狀假根完整小植株培養基的配制成分：大、微、鐵、有、糖、瓊、激、pH、其他配制：1、配制貯備液。2、先加約3/4的蒸餾水，再加瓊脂和糖，煮至瓊脂溶化，注意攪拌，勿使沸出。3

4、、加貯備液（大、微、鐵、有）、激素及其他成份。4、定容至110%（通常情況下）。5、充分攪拌，調pH，檢查是否遺漏。6、分裝至培養容器中，蓋好覆蓋物。注意不時攪動，勿使培養基沾污培養容器開口。7、高壓滅菌后取出，冷至室溫即可使用。（若需加入高溫高壓下易分解的物質？）人工種子又稱合成種子或體細胞種子：指將植物離體培養中產生的胚狀體或芽包裹在含有養分和保護功能的人工胚乳和人工種皮中形成的類似種子的顆粒。（人工種子又稱合成種子或體細胞種子，是一種含有植物胚狀體或芽、營養成分、激素以及其他成分的類似于種子結構的人工膠囊）人工種子的優勢v 體積小，結構完整，便于貯存和運輸。v 繁殖速度快，數量大，效率高

5、。v 成本低于試管苗，便于機械化播種。v 人工胚乳可根據不同植物的要求配制，可加入適量營養物、激素、有益微生物、抗病抗蟲成分，使人工種子優于天然種子。v 可作為植物基因工程和遺傳工程的載體。v 可固定雜種優勢，加速良種繁育。v 不受季節限制，適于工廠化生產。人工種子的制備a 暗處理后的成熟體細胞胚；b 用無菌吸管吸取與包埋劑混合的體細胞胚； c 帶體細胞胚的液滴滴入2CaCl2溶液后形成的白色半透明的包埋丸；d 人工種皮包埋制成的人工種子胚狀體的同步發育?脫毒方法 物理方法：高溫（熱療）法和低溫（冷療）法 化學方法：可抑制病毒在植物體內的復制 生物方法：莖尖培養、微體嫁接、愈傷組織誘導、花藥培

6、養和珠心胚培養 莖尖脫毒是控制植物病毒的有效途徑 (1)、藥物防治病毒病效率低 (2)、抗病毒育種步履艱難 (3)、組培的高效隔離防止了病毒的再侵染莖尖脫毒技術v 母體植株的選擇 欲脫毒材料的品種典型性及外植體的健康程度。v 取材和滅菌 盡量取剛長出的莖尖或取休眠莖段在人工氣候箱中催芽（2530），頂芽腋芽均可。一般選較健壯的芽，用自來水沖洗干凈，剝去外層葉片，然后在超凈工作臺上進行嚴格的表面滅菌處理，待用。 v 剝離和接種 利用無菌操作，將滅過菌的芽放在解剖鏡下，用解剖針一層一層地仔細剝離葉片，直至露出圓滑生長點。用鋒利的解剖刀小心切取0.5mm大小的帶12個葉原基的莖尖，隨即將莖尖接種于培

7、養基上，放入培養室進行培養。 v 培養 選擇合適的培養基是莖尖培養成功與否的關鍵，多數植物可首先考慮和選擇MS培養基，同時要篩選出激素種類及配比，添加適量的其他促進物質和活性物質。接種的莖尖放在培養室內培養，通常溫度25，光照10003000lx，以日光燈為光源，每天照光1216h為宜。 體外受精動物也稱試管動物：指將供體的精子和卵子在體外受精，體外培養胚胎發育到一定階段，通過胚胎移植移入受體完成發育出生的動物。超數排卵：是指在發情周期的適當時間，用人工方法促使動物有更多的卵泡發育、成熟并排卵的一項技術。胚胎移植也稱受精卵移植，是指一頭母畜（稱為“供體”）發情排卵并經過配種后，在一定時間內從其

8、生殖道（輸卵管或子宮角）取出受精卵或胚胎，或取體外受精并培育至一定階段的胚胎，移植到另外一頭與供體同時發情排卵、但未經配種的母畜（稱為“受體”）的輸卵管或子宮角。這個來自供體的胚胎能夠在受體的子宮著床，并繼續生長和發育，最后產下供體的后代。也就是通常說的“借腹懷胎”。試管嬰兒是指由體外受精結合胚胎移植技術（）獲得的嬰兒。是將卵子與精子分別取出后，在體外使其受精，并發育成胚胎后，再植回母體子宮內發育，出生后獲得嬰兒的一種技術。第三代試管嬰兒胚胎種植前遺傳學診斷（PGD第二代試管嬰兒顯微受精第一代試管嬰兒常規試管嬰兒克?。╟lone）的概念原指用于扦插的枝條，也就是指無性繁殖。N.是指遺傳上完全相

9、同的分子、細胞或來自同一祖先的生物個體的無性繁殖群體。V.是指實現無性繁殖的操作。廣義的克?。喊ɑ蛩健⒓毎?、胚胎水平和個體水平的復制。狹義的克?。杭兇獾臒o性繁殖方式?？寺游锏囊饬x與存在的問題克隆動物的應用與意義1檢驗動物細胞的全能性 2加速動物繁殖、優良育種3保護珍貴動物4醫藥領域存在的問題：1技術尚不成熟2克隆動物的體細胞突變、壽命及其它遺傳問題3克隆動物的可應用性4社會學和倫理學問題微細胞又稱為微核體，是指含有一條或幾條染色體，外有一薄層細胞質和一個完整質膜的核質體。細胞質工程是研究真核細胞的核質關系以及細胞器，細胞質基因轉移的技術。細胞融合定義：也稱體細胞雜交，是指將不同來源

10、的原生質體（除去細胞壁的細胞）相融合并使之分化、再生形成新物種或新品種的技術對稱融合：是兩個完整細胞間的融合。不對稱融合：是利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質失活后再與另外一個完整的原生質體融合。細胞融合方法生物法仙臺病毒法化學法PEG結合高Ca、高pH誘導法物理法電融合誘導法來源前處理融合方法主要應用動物細胞分散仙臺病毒、PEG、電融合單克隆抗體植物細胞脫壁PEG、電融合作物育種微生物細胞脫壁PEG新菌種培育雌核發育俗稱“假受精”，指精子正常鉆入和激活卵子，但精子的細胞核很快消失，并未參與卵球的發育，胚胎發育僅在母體遺傳控制下進行的一種發育方式。組織培養與誘變育種即原生質體的再生步驟1選

11、擇合適的受體與部位2選擇適宜的處理方法、處理劑與劑量3采用正確的篩選方法自然多倍體，的發生方式？是異源多倍體植物細胞培養的特點概念：植物細胞培養是在離體條件下，將分離的植物細胞通過繼代培養增殖，獲得大量細胞群體的一種技術。植物細胞培養的特點：1細胞體積大 2通常以非均相細胞團的形式存在 3有細胞壁和大液泡，易被剪切力損傷 4生長慢，周期長 5培養基復雜，易污染 6需要光照和通氣生物反應器的廣義概念：是指能較大規模培養生物或生產生物制品的機器設備或能較大規模生產生物制品的生物體。狹義概念：為細胞生長提供合適的化學和物理環境并能檢測控制細胞生長的裝置。兩相培養概念：是在培養體系中加入水溶性或脂溶性

12、的有機物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培養體系形成上下兩相，細胞在水相中生長，合成的次生代謝物質分泌出來后轉移至有機相中。微藻的培養方式：光能自養培養，光自養大規模培養，異養/兼性異養培養，敞開式跑道池培養系統，光生物反應器單克隆抗體：是經免疫的哺乳類動物單一的B淋巴細胞分泌的單一抗體，具有特異性和同質性。動物細胞的保存常溫保存：常溫下通過傳代保存，一般保存幾天至十幾天。低溫冷藏：4左右可保存幾十天至幾個月。超低溫凍存：-196 下可保存幾十年甚至更長。轉基因動物反應器主要有乳腺、血液、膀胱、禽蛋及昆蟲等生物反應器。干細胞：是具有自我更新和分化潛能的細胞。干細胞特征形態特征：圓形或橢圓形，體

13、積小，核質比大。生化特征：有較高的端粒酶活性增殖特性：緩慢性和自穩性1）有分裂為其它細胞的可能2）有無限增殖或分裂潛能3）能連續分裂幾代，或較長時間靜止4）以對稱或不對稱的方式生長單能干細胞：表皮干細胞、神經干細胞、精原細胞、成肌細胞等胚胎干細胞：即ES細胞，是從著床前胚胎內細胞團或原始生殖細胞經體外分化抑制培養分離的一種全能性細胞，可以分化成任何一種組織類型的細胞。成體干細胞是成體組織內具有進一步分化潛能的細胞，是多能或單能干細胞。特征：可塑性和自穩性優點：來源方便、無倫理學問題、無排異反應、較ES細胞安全。缺點：數量少、難于分離；可塑性機制尚不清楚；體外增殖困難；存在安全隱患。組織工程定義：是應用生命科學、醫學和工程