1、 by Dr Baiqing LI免疫學教研室免疫學教研室 -1-流式細胞儀在臨床檢測和流式細胞儀在臨床檢測和臨床科研中的應用臨床科研中的應用李李 柏柏 青青蚌埠醫學院免疫學教研室蚌埠醫學院免疫學教研室All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-2-=流式細胞儀和流式細胞術概述流式細胞儀和流式細胞術概述=流式細胞儀的工作原理和測量參數流式細胞儀的工作原理和測量參數=流式細胞儀在臨床檢測和科研中的應用流式細胞儀在臨床檢測和科研中的應用=免疫學檢測和科研應用免疫學檢測和科研應

2、用=血液病檢測和科研應用血液病檢測和科研應用=腫瘤學檢測和科研應用腫瘤學檢測和科研應用流式細胞儀的基本工作原理以及在基礎流式細胞儀的基本工作原理以及在基礎和臨床科研中的應用和臨床科研中的應用All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-3-一、流式細胞儀和流式細胞術的基本概念一、流式細胞儀和流式細胞術的基本概念=流式細胞儀流式細胞儀(Flow Cytometer， FCM):是集合光電子物理，光電測量技術，是集合光電子物理，光電測量技術， 液流技術，計算機技術等現代高科技液

3、流技術，計算機技術等現代高科技技術為一體的細胞測量和分析儀器。技術為一體的細胞測量和分析儀器。All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-4-一、流式細胞儀和流式細胞術的基本概念一、流式細胞儀和流式細胞術的基本概念=流式細胞術流式細胞術(Flow Cytometry，FCM):是應用流式細胞儀，對處于快速流動是應用流式細胞儀，對處于快速流動液體中的細胞或生物顆粒進行多參數、液體中的細胞或生物顆粒進行多參數、快速測量和定量分析，以及分選的技快速測量和定量分析，以及分選的技術

4、。術。All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-5-一、流式細胞儀和流式細胞術特點一、流式細胞儀和流式細胞術特點=多參數測量和分析（散射光和熒光）多參數測量和分析（散射光和熒光） ；=快速測量和分析快速測量和分析=每秒可達每秒可達1000-100001000-10000個細胞個細胞=分選純度可達分選純度可達99%99%以上。以上。=獲取的數據分析結果更具有統計學意義；獲取的數據分析結果更具有統計學意義；=通常測量的對象如各種細胞細胞必須處在單通常測量的對象如各種細胞細胞

5、必須處在單個細胞懸液中。此外，也可測量微生物等生個細胞懸液中。此外，也可測量微生物等生物顆粒，或者工合成微球非生物顆粒，物顆粒，或者工合成微球非生物顆粒，All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-6-臺式機臺式機FACSCaliburFACSCalibur=雙激光雙激光 488nm 635nm=四熒光參數四熒光參數=分選、濃縮系統分選、濃縮系統7All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Depa

6、rtment of Immunology-8-大型機大型機FACSVantage SEFACSVantage SE=科研型科研型=八熒光參數八熒光參數=高速分選高速分選=多路分選多路分選All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-9- 流式細胞儀與熒光顯微鏡比較流式細胞儀與熒光顯微鏡比較 流式細胞儀流式細胞儀 熒光顯微鏡熒光顯微鏡 流動的細胞流動的細胞 靜止的細胞樣本靜止的細胞樣本 數量大數量大 數量少數量少 高速分選高速分選 樣本難以再利用樣本難以再利用 細胞群體特征量

7、分布細胞群體特征量分布 可揭示細胞內部結構信息可揭示細胞內部結構信息All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-10-二、流式細胞儀的工作原理和測量參數二、流式細胞儀的工作原理和測量參數l光路系統光路系統： 激光光源，光路系統（透鏡、濾光片）激光光源，光路系統（透鏡、濾光片）l電子系統：電子系統：光電倍增管（光電倍增管（PMT），補償電路），補償電路l液流系統液流系統： 鞘液系統，樣品流動系統鞘液系統，樣品流動系統l數據系統：數據系統：計算機，數據測量和分析軟件計算機，數

8、據測量和分析軟件。l細胞分選系統細胞分選系統（一）（一） 流式細胞儀的結構流式細胞儀的結構 All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-11-流式細胞儀光路系統流式細胞儀光路系統=激光激光 (Laser)(Laser)是一種相干光源，它能提供是一種相干光源，它能提供單一波長、單一方向、同步的穩定光照單一波長、單一方向、同步的穩定光照=激光波長激光波長: 488nm, 635nm: 488nm, 635nm=光收集系統是由若干組透鏡光收集系統是由若干組透鏡, , 濾波片濾波

9、片, , 小孔組成，將產生的光信號引導至檢測器小孔組成，將產生的光信號引導至檢測器All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-12-光路系統光路系統All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-13-Injector TipAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Depart

10、ment of Immunology-14-Injector TipSheath fluidAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-15-流式細胞儀光學系統流式細胞儀光學系統激發光源與熒光標記物激發光源與熒光標記物All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-16-光學檢測信號光學檢測信號All rights reserved by Dr Baiq

11、ing LIBengbu Medical College Department of Immunology-17-流式細胞儀的光學系統流式細胞儀的光學系統 FACSCaliburAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-18-流式細胞儀液流系統流式細胞儀液流系統All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-19-液流系統：液流系統：鞘液系統樣品流動系

12、統鞘液系統樣品流動系統All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-20-流式細胞儀的電子系統流式細胞儀的電子系統 信號檢測和分析信號檢測和分析=當細胞攜帶熒光素當細胞攜帶熒光素, , 通過激光照射區通過激光照射區, , 受到激發產受到激發產生不同波長的、代表細胞內不同物質的熒光信號生不同波長的、代表細胞內不同物質的熒光信號=熒光信號由光電接收器接收，轉變為電脈沖信號，熒光信號由光電接收器接收，轉變為電脈沖信號，=電脈沖信號經電脈沖信號經A/DA/D轉換成數字信號轉換成數字

13、信號=數字信號傳送到計算機，進行儲存、作圖和統計分數字信號傳送到計算機，進行儲存、作圖和統計分析析All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-21-數據系統數據系統All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-22-（二）（二） 流式細胞儀可檢測的細胞參數流式細胞儀可檢測的細胞參數細胞結構細胞結構=細胞大小細胞大小=細胞顆粒性程度細胞顆粒性程度=細胞表

14、面面積細胞表面面積=核漿比例核漿比例=DNADNA含量與細胞周期含量與細胞周期=RNARNA含量含量細胞功能細胞功能=細胞表面蛋白抗原細胞表面蛋白抗原=細胞胞漿內蛋白性細胞胞漿內蛋白性抗原抗原=細胞內細胞因子細胞內細胞因子=細胞增殖細胞增殖=細胞內鈣離子濃度細胞內鈣離子濃度二、流式細胞儀的工作原理和測量參數二、流式細胞儀的工作原理和測量參數All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-23-（二） 流式細胞儀可檢測的細胞的參數： 散射光信號散射光信號=前向角散射光（前向角散

15、射光（FSC, Forward ScatterFSC, Forward Scatter） 入射光的前向入射光的前向 ( (5 5 ) )散射光信號散射光信號, , 可反映：可反映：細胞相對大小及其表面積細胞相對大小及其表面積 =側向角散射光（側向角散射光（SSC, Side ScatterSSC, Side Scatter） 入射光入射光9090 角的角的散射光信號，散射光信號， 可反映：可反映：細胞顆粒性程度細胞顆粒性程度 （胞內成分和構造和表面結構的復雜性）（胞內成分和構造和表面結構的復雜性）All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medica

16、l College Department of Immunology-24-散射光信號散射光信號=前向角散射光前向角散射光FSCFALS SensorLaserAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-25-散射光信號散射光信號=側向角散射光側向角散射光SSCFALS Sensor90LS SensorLaserAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunol

17、ogy-26-流式細胞的基本信息流式細胞的基本信息: “形態形態”All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-27-All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-28-外周全血細胞外周全血細胞（紅細胞溶解后）（紅細胞溶解后） 以散射光表示的以散射光表示的 雙參數雙參數 點圖點圖All rights reserved by Dr Baiqing LIBe

18、ngbu Medical College Department of Immunology-29-外周全血細胞外周全血細胞（紅細胞溶解后）（紅細胞溶解后） 以散射光表示的以散射光表示的 雙參數雙參數 點圖點圖中性粒細胞中性粒細胞單核細胞單核細胞淋巴細胞淋巴細胞All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-30-（二）（二） 流式細胞檢測細胞參數流式細胞檢測細胞參數: 特征信息熒光（特征信息熒光（FluorescenceFluorescence）信號）信號=熒光素吸收激光（激

19、發光波長）能量熒光素吸收激光（激發光波長）能量=熒光素將吸收能量釋放，轉換為熒光素將吸收能量釋放，轉換為釋放較入射光波長更長的光量子（發射光波長）釋放較入射光波長更長的光量子（發射光波長）=熒光素與特異抗體結合（熒光抗體）熒光素與特異抗體結合（熒光抗體）=熒光抗體與細胞抗原結合越多，產生熒光信號越強熒光抗體與細胞抗原結合越多，產生熒光信號越強=熒光素與細胞核酸結合，熒光強度反映核酸含量熒光素與細胞核酸結合，熒光強度反映核酸含量All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-3

20、1-（二）（二） 流式細胞檢測細胞參數流式細胞檢測細胞參數: 特征信息熒光（特征信息熒光（FluorescenceFluorescence）信號）信號lForward scatter (FSC)lSide scatter (SSC)lFL1 （第一熒光）（第一熒光） -FITC(異硫氰酸熒光素）異硫氰酸熒光素）lFL2 （第二熒光）（第二熒光） -PE（藻紅蛋白）（藻紅蛋白）lFL3 （第三熒光）（第三熒光） -PerCP, PeCy5等等lPL4 （第四熒光）（第四熒光） -APC（藻青蛋白）（藻青蛋白）All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu M

21、edical College Department of Immunology-32-熒光信號熒光信號FreqFluorescenceFALS SensorFluorescence detector(PMT3, PMT4 etc.)All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-33-All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-34-熒光信號熒光信號雙色

22、直接染色雙色直接染色All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-35-（三）（三） 流式細胞儀分析數據常見圖形：流式細胞儀分析數據常見圖形：（二維）點陳圖（二維）點陳圖 (Dot Plot)適用于：雙參數分析適用于：雙參數分析All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-36-（三）（三） 流式細胞儀分析數據常見圖形：流式細胞儀分析數據常見圖形： 直方

23、圖直方圖(Histogram Plot)適用于：適用于：單參數分析單參數分析僅需要觀察某僅需要觀察某個熒光強度的個熒光強度的變化變化All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-37-流式細胞術檢測細胞的熒光流式細胞術檢測細胞的熒光 標記方法標記方法單標： 一種單抗一種單抗 : FL1, FSC, SSC: FL1, FSC, SSC（三參數）（三參數）雙標： 兩種單抗：兩種單抗：FL1, FL1, FSC, SSCFL1, FL1, FSC, SSC（四參數）（四參數）三

24、標： 三種單抗：三種單抗：FL1,FL2, FL3,FSC, SSCFL1,FL2, FL3,FSC, SSC（五參數）（五參數）四標四種熒光標記抗體：四種單抗：四種單抗：FL1,FL2,FL3,FL4,FSC,SSCFL1,FL2,FL3,FL4,FSC,SSC（六參數）（六參數）All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-38-淋巴細胞亞群分析淋巴細胞亞群分析細細 胞胞 凋凋 亡亡 腫瘤學腫瘤學移植免疫移植免疫三 流式細胞儀在臨床檢測和科研中的應用血小板血小板其其 它

25、它All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-39-淋巴細胞亞群分析淋巴細胞亞群分析All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-40-AdhesionMetabolicAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-41-All r

26、ights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-42-All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-43- T淋巴細胞淋巴細胞亞群檢測：淋巴細胞亞群檢測： T cells, T subsets, NK cells, B cellsT cells, T subsets, NK cells, B cellsAll rights reserved by Dr Baiqin

27、g LIBengbu Medical College Department of Immunology-44-淋巴細胞亞群淋巴細胞亞群T淋巴細胞淋巴細胞(CD3+)名名 稱稱功功 能能輔助性/誘導性T細胞(Th/Ti)輔助和誘導細胞免疫和體液免疫 CD3+CD4+CD29+ CD3+CD4+CD29-輔助性T細胞(Th)誘導性T細胞(Ti)輔助細胞免疫和體液免疫誘導細胞免疫和體液免疫抑制性/殺傷性T細胞(Ts/Tc)抑制免疫反應/殺傷異源細胞 CD3+CD8+CD28- CD3+CD4+CD29-抑制性T細胞(Ts)殺傷性T細胞(Tc)抑制細胞和體液免疫細胞毒性T細胞CD3+CD4+CD8+活

28、化的T細胞在T細胞惡性增生時升高 CD3+CD4-CD8- 有調節功能的T細胞,其表達 / T細胞受體(TCR / ) CD45RA+CD45RO- 幼稚的/靜止的T淋巴細胞 當免疫系統沒有能力更新輔助性或抑制性/細胞毒性淋巴細胞的祖細胞時此細胞亞群較低 CD45RA-CD45RO+ 記憶性T淋巴細胞 病菌感染時升高, 但在慢性病毒感染, 如HIV患者中降低CD45RA+CD45RO+ 活化的T細胞, 感染時升高 感染時升高All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-45

29、-淋巴細胞亞群淋巴細胞亞群活化活化T淋巴細胞淋巴細胞名名 稱稱功功 能能CD3+HLA-DR+活化T細胞CD4+HLA-DR+ 活化的輔助性/誘導性T細胞CD8+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細胞CD4+CD25+ 活化的輔助性/誘導性T細胞CD8+ CD25+ CD8+CD38+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細胞在病毒感染的患者中增加; 其增加意味著HIV患者的預后較差CD19+CD23+ 活化的B細胞過敏患者中升高 CD19+CD5+ 在自身免疫性疾病中升高 CD19+CD5+CD23+ 慢性B細胞白血病及單克隆B淋巴細胞 自身免疫性疾病時降低, 而病毒感染時升高 CD3+CD

30、57+CMV(巨細胞病毒)感染的強烈征兆 All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-46-淋巴細胞亞群與疾病淋巴細胞亞群與疾病疾疾 病病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病 系統性紅斑狼瘡 類風濕性關節炎 自身免疫性溶血性貧血 重癥肌無力免疫缺陷病 愛滋病病毒感染 傳染性單核細胞增多癥慢性活動性肝炎活動性肝硬化腫瘤 消化道癌, 肝癌, 肺癌再生障礙性貧血粒細胞減少癥All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Med

31、ical College Department of Immunology-47-淋巴細胞亞群檢測意義淋巴細胞亞群檢測意義疾病機理研究 疾病輔助診斷移植后免疫檢測治療方案的確定及療效評價CD25高于正常值5-10%, 表明即將或已發生排斥CD4/CD8比值下降提示并發兇險感染 0.2時, 必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%, 且不伴有CD25的增加, 提 示巨細胞病毒感染慢性疲勞, 感染后綜合征, 纖維肌痛, 類風濕性關節炎, 過敏等 疾病預防All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Departm

32、ent of Immunology-48-淋巴細胞亞群檢測意義淋巴細胞亞群檢測意義Control （n=20)Active SLE (n=17)Stable SLE (n=13)CD370.4 5.8765.8 10.968.5 8.95CD435.0 5.7022.1 4.15*34.5 4.23CD827.9 5.7345.7 9.58*32.7 9.01CD4/CD81.27 0.140.43 0.12*1.05 0.26*NK17.8 5. 484.37 3.31*7.59 5.01*鑒別活動期和非活動期SLEAll rights reserved by Dr Baiqing LIBe

33、ngbu Medical College Department of Immunology-49-HIV AND AIDSAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-50-Th1/Th2細胞細胞All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-51-Th1/Th2細胞細胞lTh1型細胞因子介導型細胞因子介導 細胞免疫反應細胞免疫反應n引起遲發型過敏反應、巨

34、噬細胞活化、局部炎癥引起遲發型過敏反應、巨噬細胞活化、局部炎癥n刺激來源：病毒、某些細菌刺激來源：病毒、某些細菌lTh2型介導體液免疫反應型介導體液免疫反應n引起引起B細胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、細胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、n促進促進I型變態反應（過敏反應）型變態反應（過敏反應）n刺激來源：多細胞寄生蟲、過敏原刺激來源：多細胞寄生蟲、過敏原All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-52-Th1/Th2細胞細胞PMA+Ionomycin 刺激4-All right

35、s reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-53-流式細胞儀檢測胞內細胞因子流式細胞儀檢測胞內細胞因子 l新鮮分離新鮮分離PBMC l加加PMAIo刺激后刺激后6hl測定胞內細胞因子測定胞內細胞因子IL-4和和IFN- 檢測免疫細胞表型和檢測免疫細胞表型和結合檢測胞內細胞因結合檢測胞內細胞因子：子： 操作和分析方法操作和分析方法； All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunol

36、ogy-54-四色標記胞內因子四色標記胞內因子FCM檢測檢測All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-55-Th1/Th2失衡相關疾病失衡相關疾病嗜酸性細胞增多和嗜酸性細胞增多和IgE升高相關疾病升高相關疾病 Ommens Syndrome(Ommens綜合征) Hyperosinophilic Syndrome(高嗜曙紅細胞綜合征) Kimuras Disease(Kimuras疾病) Wells Syndrome(Wells 綜合征)傳染病傳染病 病毒性疾病病毒性疾

37、病 人類免疫缺陷性病毒感染和愛滋病(AIDS) 麻疹 呼吸道合胞體病毒感染 慢性活動性乙型肝炎病毒感染 分枝桿菌和其它細菌感染分枝桿菌和其它細菌感染 麻瘋病/肺結核 鳥結核分枝桿菌復合感染 滑膜炎反應性關節炎 淋病和梅毒All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-56-Th1/Th2失衡相關疾病失衡相關疾病寄生蟲病 原寄生蟲感染：皮膚和內臟利什曼病 蠕蟲?。航z蟲病和血吸蟲病真菌性疾病 過敏性支氣管肺霉菌病 念珠菌病 隱球菌病 類球孢子菌病 球孢子菌病 組織胞漿菌病惡性腫瘤

38、 皮膚基底細胞和鱗細胞癌 Sezary Syndrome (Sezary綜合征) 淋巴瘤 EBV相關的B細胞和非何杰金氏淋巴瘤 何杰金氏淋巴瘤 大細胞退行性(CD30+)淋巴瘤 多發性骨髓瘤和Castlemans綜合征 卡氏肉瘤All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-57-Th1/Th2失衡相關疾病失衡相關疾病變應性疾病變應性疾病 皮膚性哮喘 變應性哮喘 春季結膜炎炎性和自身免疫性疾病炎性和自身免疫性疾病 巨細胞(暫時性的)動脈炎 系統性紅斑狼瘡 類風濕性關節炎 自身

39、免疫性甲狀腺疾病 類肉瘤病 銀屑病(牛皮癬) IgA腎病 多發性硬化All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-58-Th1/Th2細胞檢測意義細胞檢測意義疾病治療發病機制研究使用Th1和Th2相關的細胞因子 IFN-治療麻瘋病 用抗Th1和Th2相關細胞因子或其受體的抗體 抗IL-4抗體治療真菌和寄生蟲感染 使用調節Th2/Th2細胞因子平衡的藥物: 薩力多胺(Thaliodomide) 治療巨細胞動脈炎疾病治療監測All rights reserved by Dr B

40、aiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-59- 腫瘤學腫瘤學All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-60-腫瘤發生發展腫瘤發生發展All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-61-0 200 400 600 8001000PI 熒光強度熒光強度(DNA含量含量)0 75 1

41、50 225 300DNA含量分析含量分析CountsG0/G1G2/MS異倍體All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-62-DNA含量分析含量分析70%人類癌癥中存在著異倍體或細胞周期的改變1. Ross JS. DNA Ploidy and Cell Cycle Analysis in Pathology. New York: Igaku-Shoin;1996:47-60DNA倍體和S期比例-指導治療2 卵巢癌，乳腺癌，結腸癌，子宮內膜癌，原發部位不明的癌癥 -早

42、期 (I/II期)DNA倍體和DNA指數-預后長期和無病生存期2 卵巢癌-晚期 2. The Recommend Medicare National Coverage Policy for Flow Cytometry. HCFA Website,1999 All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-63-P53/Bcl-All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Imm

43、unology-64-P53乳腺癌 與病理學分級有關, 并與乳腺癌的淋巴結轉移顯著相關 大腸腫瘤 早期發現大腸癌胃 癌 與預后相關肝細胞癌 與組織分級, 腫瘤預后, 轉移及腫瘤大小密切相關All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-65-Bcl-2Bcl-2在正常組織中的表達 造血系統細胞 淋巴, 單核細胞等 受激素或生長因子調節的腺上皮 前列腺上皮, 子宮內膜等 干細胞或增值細胞 皮膚的基底細胞, 腸上皮 壽命長的分裂細胞 神經元 胚胎組織Bcl-2在腫瘤組織中的表達

44、腎臟腫瘤 腎癌, 腎盂乳頭瘤, Wilms瘤, 腎嗜酸細胞瘤 前列腺癌 B細胞性淋巴瘤 乳腺癌 (43%) 甲狀腺癌All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-66-nm23nm23與多種腫瘤的轉移及預后相關 肝細胞癌 甲狀腺腫瘤 乳腺癌 結腸癌 肉瘤All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-67-CD44(CD44s/CD44v)人人 體體 腫腫

45、 瘤瘤CD44 亞亞 型型與腫瘤的臨床相關性與腫瘤的臨床相關性肺癌非特異總 CD44 表達的下調與較差的預后相關胃腸道癌CD44v9胃腸道腫瘤的獨立的預后指標CD44v8-v10與肝轉移相關,并為結直腸癌的獨立的預后指標CD44v6與腸癌的浸潤相關惡性黑色素瘤CD44v5與侵潤性相關乳腺癌CD44v6受雌激素和孕激素調控CD44v3/v4, CD44v6腫瘤分級,但不是獨立的預后指標CD44s, CD44v6腫瘤分級,但不是獨立的預后指標甲狀腺癌(乳頭型)CD44v6與淋巴節轉移相關非何杰金氏淋巴瘤CDv3, v6, v9與較差預后相關神經母細胞瘤CD44s總 CD44 表達的下調與較差的預后

46、相關All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-68-腫瘤多藥耐藥性腫瘤多藥耐藥性(MDR)檢測檢測P-gp在腫瘤組織中的表達 乳腺癌, 膀胱癌, 胃癌, 食管癌, 卵巢癌, 前列腺癌等 化療前高表達化療后高表達 腎細胞癌, 結腸癌, 肝癌,腎上腺皮質癌, 胰腺癌等 化療前低表達 非何杰金氏淋巴瘤, 成神經細胞瘤, 急性髓白血病等 化療不敏感化療敏感化療不敏感All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical Colleg

47、e Department of Immunology-69-乳腺癌乳腺癌石蠟切片脫臘ER(雌激素受體)ER抗體染色酶解流式檢測固定(多聚甲醛)破膜(70%甲醇)細 胞 All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-70-Cyclin(細胞周期蛋白細胞周期蛋白)All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-71-細細 胞胞 凋凋 亡亡All rights

48、reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-72-細胞凋亡分析 All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-73-DNA斷裂斷裂All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-74-Fas/FasL與疾病與疾病慢性病毒性肝炎慢性病毒性肝炎惡性腫瘤細胞惡性

49、腫瘤細胞-黑色素瘤、結腸癌、肺癌、肝癌等黑色素瘤、結腸癌、肺癌、肝癌等腦缺血后細胞凋亡腦缺血后細胞凋亡自身免疫性疾病自身免疫性疾病系統性紅斑狼瘡系統性紅斑狼瘡Fas/FasL(CD95/CD95L)All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-75-Caspases早期細胞凋亡早期細胞凋亡Annexin V/PIAll rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunolog

50、y-76-移植免疫移植免疫All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-77-CD25高于正常值高于正常值5-10%, 表明即將或已發生排斥表明即將或已發生排斥CD4/CD8比值下降提示并發兇險感染比值下降提示并發兇險感染 0.2時時, 必須停用免疫抑制劑必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加增加5-10%, 且不伴有且不伴有CD25的增加的增加 提示巨細胞病毒感染提示巨細胞病毒感染移植后免疫監測移植后免疫監測All rights reserved by Dr Bai

51、qing LIBengbu Medical College Department of Immunology-78-血小板血小板All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-79-血小板活化血小板活化靜止血小板活化血小板All rights reserved by Dr Baiqing LIBengbu Medical College Department of Immunology-80-血小板活化血小板活化流式全血法流式全血法血小板聚集儀血小板聚集儀樣本處理樣本處理抗凝全血PRP(富血小板血漿)人為活化人為活化最低強烈(經離心, 洗滌)樣本量樣本量低至2uL10mL靈敏度靈敏度5%不高相關病癥相關病癥檢測指標檢測指標臨床意義臨床意義貯存血小板CD62與輸注血小板恢復負相關心肺分流術(CPB)冠狀血管形成術腎透析不穩定心絞痛急性心肌梗塞中風腦血管局部缺血糖尿病產前痙攣子癇癥心肺分流術(CPB)急性冠狀動脈綜合征血小板-白細胞聚集較血小板活化敏感監測和預后生物相容性Cd62p, CD63Cd62p, CDAll rights res