1、第十三章第十三章 凝集反應凝集反應制作人：和燕制作人：和燕 早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發生特異性凝集的現象，有效地診斷傷寒病。-肥達試驗 至1903年，Landsteiner在特異性血凝現象的基礎上發現了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫學獎。 -血型鑒定凝集反應的發現凝集反應的發現凝集反應的定義凝集反應的定義凝集反應：凝集反應： 顆粒性抗原顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應抗細菌、紅細胞等）與相應抗體特異性結合體特異性結合，或，或可溶性抗原可溶性抗原（或抗體）與（或抗體）與載載體體顆粒結合成致敏顆粒（紅細胞、聚苯乙烯乳顆粒結合成致敏顆粒（紅細胞、聚苯乙

2、烯乳膠顆粒、炭粒）后，它們與相應抗體（或抗原）膠顆粒、炭粒）后，它們與相應抗體（或抗原）發生發生特異性反應特異性反應，在適當，在適當電解質電解質存在下，形成存在下，形成肉眼肉眼可見的凝集現象可見的凝集現象。可見反應形成可見反應形成陰性？陰性？陽性？陽性？凝集反應的分型凝集反應的分型凝集反應凝集反應直接凝集反應直接凝集反應間接凝集反應間接凝集反應抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗第一節第一節 直接凝集反應直接凝集反應直接凝集反應：直接凝集反應： 顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質的作用下，出現肉眼可見的凝集現象。質的作用下，出現肉眼可見的凝集現象。凝集原凝集原(agglut

3、inogen)(agglutinogen)：凝集反應中的抗原。凝集反應中的抗原。凝集素凝集素(agglutinin)(agglutinin)：凝集參與反應的抗體凝集參與反應的抗體（一）玻片凝集試驗（一）玻片凝集試驗方法評價方法評價: :定性試驗定性試驗簡便和快速簡便和快速敏感度低敏感度低應用應用: :菌種鑒定菌種鑒定血清學分型血清學分型血型鑒定血型鑒定 在試管內顆粒性抗原直接與抗體結合，在試管內顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質的作用下，出現肉眼可見的凝集在電解質的作用下，出現肉眼可見的凝集現象。現象。（二）試管凝集試驗（二）試管凝集試驗0.50.50.50.50.50.5 0.50.50.5

4、0.5棄掉棄掉0.50.5 試管凝集試驗原理試管凝集試驗原理結結果果 1 2 3 4 5 6 7菌液菌液 結果結果+ +很小的凝集顆粒很小的凝集顆粒混濁混濁- -無凝集現象無凝集現象與對照相同與對照相同+小、部分凝集塊小、部分凝集塊中等混濁中等混濁+大多凝集管底大多凝集管底輕度混濁輕度混濁+大的凝集塊大的凝集塊清亮清亮凝集程度凝集程度沉淀沉淀上清上清管底沉淀管底沉淀凝集程度凝集程度方法評價：方法評價：半定量試驗半定量試驗簡便、快速簡便、快速敏感度低敏感度低可有假陽性可有假陽性臨床應用：臨床應用：肥達試驗肥達試驗外斐試驗外斐試驗交叉配血試驗交叉配血試驗第二節第二節 間接凝集反應間接凝集反應間接凝

5、集反應間接凝集反應: : 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，在電解質的作用下，出現肉眼可見的凝集在電解質的作用下，出現肉眼可見的凝集現象現象. .載體載體可溶性抗原可溶性抗原致敏致敏致敏顆粒致敏顆粒NSNS凝集顆粒凝集顆粒 間接凝集試驗示意圖間接凝集試驗示意圖常用載體常用載體紅細胞紅細胞-間接血凝試驗間接血凝試驗聚苯乙烯乳膠聚苯乙烯乳膠-膠乳凝集試驗膠乳凝集試驗1 1、正向間接凝集試驗、正向間接凝集試驗2 2、反向間接凝集試驗、反向間接凝集試驗3 3、間接凝集抑制試驗、間接凝集抑制試驗 4 4

6、、協同凝集試驗、協同凝集試驗間接凝集反應的類型間接凝集反應的類型用抗原致敏載體用抗原致敏載體-檢測抗體檢測抗體正向間接凝集試驗正向間接凝集試驗反向間接凝集試驗反向間接凝集試驗用抗體致敏載體用抗體致敏載體-檢測抗原檢測抗原間接凝集間接凝集抑制抑制試驗試驗用抗原致敏載體用抗原致敏載體-檢測抗原檢測抗原間接凝集抑制試驗間接凝集抑制試驗待測抗原待測抗原已知抗體已知抗體特異特異結合結合抗原抗體復合物抗原抗體復合物NSNS致敏顆粒致敏顆粒無凝集顆粒無凝集顆粒陽性陽性間接凝集抑制試驗間接凝集抑制試驗待測抗原待測抗原已知抗體已知抗體無結合無結合抗原抗體分散抗原抗體分散NSNS致敏顆粒致敏顆粒有凝集顆粒有凝集顆

7、粒陰性陰性SPA:SPA-IgG Fc;SPA抗體致敏抗體致敏-測抗原測抗原協同凝集試驗協同凝集試驗 原理圖原理圖IgGSPASPA- IgG 待測抗原待測抗原SPA- IgG-待測抗原待測抗原凝集顆粒凝集顆粒混混合合 加入加入間接凝集反應的應用間接凝集反應的應用抗原的檢測抗原的檢測 反向間接凝集試驗可用于檢測病反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質成分。種蛋白質成分。抗體的檢測抗體的檢測檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產生的抗體。后產生的抗體。 抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗又稱又稱Coombs試驗試驗第三節第

8、三節 抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗（一）直接（一）直接CoombsCoombs試驗試驗不完全抗體不完全抗體檢測紅細胞上抗體檢測紅細胞上抗體（二）（二）間接間接CoombsCoombs試驗試驗檢測血清中的檢測血清中的抗紅細胞抗體抗紅細胞抗體臨床應用：臨床應用：在輸血上的應用在輸血上的應用血型抗原抗體的檢查血型抗原抗體的檢查對新生兒溶血性貧血性疾病的診斷對新生兒溶血性貧血性疾病的診斷對溶血性貧血的研究對溶血性貧血的研究對細菌或立克次體的不完全抗體檢查對細菌或立克次體的不完全抗體檢查 冷凝集試驗原理冷凝集試驗原理抗原決定簇隱含，不能與抗體結合抗原決定簇隱含，不能與抗體結合混混合合暴露的抗原決定簇與抗體結

9、合暴露的抗原決定簇與抗體結合混混合合3737443737膠乳凝集試驗膠乳凝集試驗-類風濕因子檢測類風濕因子檢測 抗自身變性抗自身變性IgGIgG抗體，屬于抗體，屬于IgMIgM類，主要類，主要存在于血清中。存在于血清中。 約約90%90%類風濕性關節炎（類風濕性關節炎（RARA）患者的）患者的RFRF呈呈陽性。陽性。 某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進行性全身性硬化癥、干燥綜合征、行性全身性硬化癥、干燥綜合征、SLESLE等等患者都有較高的陽性率；一些其他疾病患者都有較高的陽性率；一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出現如血管炎、肝病、慢性感染也可出現RF

10、RF。 其病因及發病機制仍不完全明了其病因及發病機制仍不完全明了, , 機體出現機體出現免疫系統紊亂免疫系統紊亂, , 進而引起關節滑膜、軟骨組進而引起關節滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的織慢性炎癥和破壞的自身免疫性疾病自身免疫性疾病。 RFRF可與可與IgGIgG的的FcFc段結合。將段結合。將變性變性IgGIgG包被于包被于聚苯乙烯膠乳顆粒聚苯乙烯膠乳顆粒上，此致敏膠乳在與待上，此致敏膠乳在與待測血清中的測血清中的RFRF相遇時，即可發生肉眼可見相遇時，即可發生肉眼可見的凝集。的凝集。 類風濕膠乳診斷試劑類風濕膠乳診斷試劑 RFRF陰性對照陰性對照 RFRF陽性對照陽性對照 反應板反應板 攪

11、拌棒攪拌棒 取陽性血清、陰性血清各取陽性血清、陰性血清各1 1滴于反應滴于反應板上，然后分別加類風濕膠乳診斷板上，然后分別加類風濕膠乳診斷試劑試劑1 1滴。滴。 用攪拌棒充分混勻后，輕輕搖動反用攪拌棒充分混勻后，輕輕搖動反應板應板2 23min3min，觀察結果。，觀察結果。 在室內的光線下觀察，有清晰的凝集在室內的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出現，且液體澄清者為顆粒出現，且液體澄清者為RF陽性陽性 1、凝集反應是指凝集反應是指細菌和紅細胞細菌和紅細胞等等_或或載體載體表面包被表面包被_與相應抗體與相應抗體/ /抗原抗原結合后，可出現肉眼可見的結合后，可出現肉眼可見的_現象現象 2 2、凝集反應的分類？、凝集反應的分類？ 3 3、直接凝集反應包括哪兩類？、直接凝集反應包括哪兩類？ 4 4、間接凝集反應的分類？原理？、間接凝集反應的分類？原理？復習題復習題小結小結 凝集反應是指凝集反應是指細菌和紅細胞細菌和紅細胞等等顆粒性抗原顆粒性抗原或表面包或表面包被抗原被抗原/ /抗體的抗體的顆粒性載體顆粒性載體與相應抗體與相應抗體/ /抗原結合后，抗原結合后，可出現肉眼可見的可出現肉眼可見的凝集凝集現象。現象。 可以分為可以分為直接凝集反應、間接凝集反應直接凝集反應、間接凝集反應和抗球蛋白和抗球蛋白試驗試驗。直接凝集反應直接凝集反應主要有主要有玻片法玻片法和和試管法試管