1、金養麥對鴨禽流感疫苗免疫效果影響阮涌I,嵇辛勤2,夏先林I,文明心，李世靜I,劉廷江I,陳佳琪（1.貴州大學動物科學學院，貴州貴陽550025；2.貴州省動物疫病研究室.貴州貴陽550003）摘要：一直以來，鴨群對禽流感疫苗免疫應答效果欠佳，為解決該現狀，利用金養麥具有增強免疫力、抗癌和抑菌的功效，按照1%、2%、3%的重量比將金養麥混合于三穗麻鴨日根中c于不同日齡采血后分別采用血凝抑制試驗、MTT法和ELISA方法，檢測禽流感抗體效價、T淋巴細胞轉化效率、IFN-）和IL-2水平。結果顯示，金養麥能夠促進禽流感疫苗對鴨群的體液免疫和細胞免疫水平。關鍵詞：三穗麻鴨；金養麥；禽流感疫苗；免疫中圖

2、分類號：S852.43文獻標識碼：A文章編號：1004-874X（2015）13-0119-04EffectsofFago-conimmuneeffectsofavianinfluenzavaccineforducksRUANYong1,JIXin-qin12,XIAXian-lin1,WENMing-2,LIShi-jing,LIUTing-jiang1,CHENJia-qi1(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversityGuiyang550025,China;2.LaboratoryforAnimalDiseaseofGuizhou,Guiyang5

3、50003,China)Abstract：Inordertosolvethesituationofineffectivenessofavianinfluenzavaccineforducks,1%,2%,3%weightofFago-cwasmixedinSan-Suiduckdietsseparately.Fago-chasthefunctionsofenhancingimmunity,anti-cancerandantibacterial.HI,MTTandELISAwereusedtodetectavianinfluenzaantibodytiter,Tlymphocytetransfo

4、rmationefficiency,IFN-7andIL-2levels,afterducksbloodsampleswerecollectedondifferentdays.TheresultsshowedthatFago-ccouldpromotehumoralandcellularimmunitylevelofavianinfluenzavaccineforducks.Keywords：San-Suiduck;Fago-c;avianinfluenzavaccine;immune近年來，貴州省三穗縣大力發展養鴨業，隨著養殖規模不斷擴大，疾病防控更加重要卜2】。據有關文獻報道口水禽作為禽流

5、感病毒的儲存及變異宿主，對禽流感疫苗的免疫應答效果一直欠佳，為解決該問題，鴨用免疫增強劑的篩選逐步引起科研工作者的重視。金養麥作為我國傳統的中藥材，具有增強免疫力、抗氧化、抗腫瘤和抗菌等功效。同時還有文獻指出，將金養麥代替10%14%的全價日糧喂豬，可提高豬肉的氨基酸含量，同時減低膽固醇含量，說明金養麥在畜牧養殖方面具備良好應用前收稿日期：2014-09-27基金項目：貴州省科技計劃項目（黔科合計省合20137004號,黔科合重大專項字20126004號）作者簡介：阮涌（1987-）,男，苗族，碩士，助理實驗師，E-mail：ruan_yong通訊作者：嵇辛勤（1957-）,女，教授，E-ma

6、il：jxq972景，但其對水禽免疫功能的影響還未見相關文獻報道。為此，本試驗將金養麥作為飼料添加劑按一定比例混合于鴨日糧中，通過檢測鴨群注射禽流感疫苗后體液和細胞免疫水平，分析金養麥對鴨免疫功能的影響，從而為鴨專用免疫增強劑的篩選工作奠定基礎。1 材料與方法1.1試驗材料試驗于貴州省黔東南州青酒集團養殖基地進行。試驗動物為三穗麻鴨，共175只，隨機平均分為5組（陰性對照組、疫苗對照組、金養麥I組、金養麥II組、金養麥m組）；育雛日糧為懷化正大飼料有限公司小鴨料，之后采用常規自配飼料，其中各金養麥試驗組在自配飼料基礎上分別按照I%、2%、3%的重量比添加金養麥干燥粉末，混合均勾后保存備用；每組

7、鴨的飼養管理和條件一致。試劑：H5N1亞型禽流感病毒（Re-6株）滅活疫苗（批號2012015）,購自青島易邦生物工程有限公司；金養麥粉末，由養殖場采集金養麥植株曬干磨碎；禽流感HI抗原（批號201206）,購自哈爾濱維科生物技術開發公司；MTT試劑，購于Solarbio公司；檢測鴨IFN-7和鴨IL-2試劑盒，均購于上海浩本生物科技有限公司。1.2試驗方法空白對照組只注射等量生理鹽水，常規疫苗組和各金養麥試驗組在10、24日齡按照常規劑量（0.5mL/只）注射禽流感滅活疫苗；育雛期各組均采用正大飼料小鴨料，其中，金養麥I組、II組、DI組分別在正大飼料小鴨料中按1%、2%、3%重量比添加金養

8、麥，育雛期結束后，金養麥I組、II組、m組分別飼喂含1%、2%、3%金養麥重量比的自配飼料，常規疫苗組和空白對照組同期飼喂不含金養麥的自配飼料。在10、24、38、52、66日齡每組隨機選取3只鴨無菌抽取血液，分裝于肝素鈉抗凝管和非抗凝管各5.0mL,肝素鈉抗凝管血液用于MTT試驗，不抗凝血液收集后低速離心分離血清低溫保存。檢測數據采用Excel和SPSS16.0軟件處理。2 結果與分析2.1金養麥對鴨禽流感抗體效價的影響采用HI試驗，對試驗鴨血清進行禽流感抗體效價檢測，結果見圖1。由圖1可知，在10日齡未免疫時，均未產生禽流感抗體效價，符合實驗要求；在第52日齡時，金養麥組禽流感抗體效價達到

9、峰值,且金養麥口組（2%）,與疫苗對照組差異顯著；在66日齡時，各組間禽流感抗體效價差異不顯著。表86428642S空白對照組D金養麥I組昌金葬麥in組1024385266日齡圖1愈流感抗體效價動態變化明，金養麥U組能夠促進鴨群對禽流感疫苗的應答水平。2.2金養麥對鴨IFN-y水平的影響采用ELISA試劑盒，將低溫保存血清平衡至室溫，嚴格按照試劑盒說明書操作步驟進行檢測，結果見圖2O由圖2可知，在10-52日齡，各組差異均不顯著，但金養麥II組（2%）IFN-含量整體呈現較高水平；在免疫后66日齡，金養麥U組（2%）與疫苗對照組差異顯著。表明金養麥在一定程度上可提高鴨IFN-）水平。10243

10、85266日齡圖2鴨IFN-y水平動態變化1024385266日齡圖2鴨IFN-y水平動態變化0.80.6a0.40.20金葬麥對鴨T淋巴細胞轉化效率的影響收集當天新鮮血液，采用MTT法檢測鴨T淋巴細胞轉化效率。檢測結果見圖3O由圖3可知，在免疫后24日齡，金養麥I組與疫苗對照組差異顯著，金養麥II組、DI組與疫苗對照組差異極顯著；在免疫后38日齡，金養麥I組、II組與疫苗對照組差異極顯著，金養麥HI組與疫苗對照組差異顯著；在免疫后52日齡，各金養麥組與疫苗對照組差異極顯著；在免疫后66日齡，金養麥II組、IH組與疫苗對照組差異極顯著。表明金養麥可提高鴨T淋巴細胞轉化水平。2.3 金養麥對鴨I

11、L-2水平的影響采用ELISA試劑盒，將低溫保存血清平衡至室溫，嚴格按照試劑盒說明書進行檢測，結果見圖4。由圖4可知，在免疫后24日齡，各金養麥組均與疫苗對照組差異極顯著，在免疫后38日齡各金養麥組IL-2水平均低于疫苗對照組，且與空白對照組無顯著差異；在免疫后52日齡各組差異不顯著，但IL-2水平均高于疫苗對照組；在免疫后66日齡，各組差圖3鴨T淋巴細胞的轉化效率圖3鴨T淋巴細胞的轉化效率一1-=生與蕓空白對照組10套薈歪言蕓蕓至-薈一蕓13疫苗對照組臼金養麥I組（3金養麥II組243852日齡圖4鴨IL-2水平動態變化一蕓ii一蕓g-一一一g=_蕓標易餐易務多三三-二&一=_=一|云_一?

12、&_=!_=三_!_蕓芫_ta金養麥m組66異均不顯著。表明金養麥配合飼料能夠在鴨第24日齡促進IL-2水平的分泌。3 結論與討論水禽作為禽流感病毒的主要儲存宿主，一直以來對禽流感疫苗免疫應答效果欠佳。針對該現狀，本試驗選用具有抗癌抑菌和增強免疫功效的中藥材金葬麥B9】，將其磨成粉末添加于鴨日常飼料中，嚴格按照貴州省三穗縣禽流感疫苗免疫程序，實時監測鴨群禽流感抗體效價、T淋巴細胞轉化效率、IFN-7水平動態變化及IL-2水平動態變化。結果顯示，52日齡時金養麥口組禽流感抗體效價與疫苗對照組差異顯著；66日齡時金養麥D組IFN-7水平與疫苗對照組差異顯著；24日齡時金養麥I、U、DI組IL-2水

13、平均與疫苗對照組差異極顯著；24、38、52日齡時，金養麥I、U、ID組T淋巴細胞轉化效率均與疫苗對照組呈現顯著或極顯著差異，因此，金養麥試驗組禽流感抗體效價整體高于疫苗對照組。本試驗結果表明，金弄麥能夠促進鴨群禽流感抗體的效價，而抗體的分泌與效應B細胞密切相關I,因此，金養麥可以有效誘導機體體液免疫；IFN-7是一組具有多種功能活性的蛋白質，是由單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子，對同種細胞具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長、分化、免疫功能等多種生物活性，也與抗體的產生密切相關本試驗中，金養麥對鴨IFN-7水平的促進效果緩慢，但于24-52日齡各金養麥試驗組IFN-7水平與疫苗對照組相比仍呈現逐步

14、升高的趨勢，且在52日齡時各金養麥試驗組IFN-）水平高于疫苗對照組，原因可能是由于鴨群自身對禽流感疫苗免疫應答水平較低所致IL-2又稱T細胞生長因子，可促進T細胞的增殖，也參與抗體反應，是機體調控免疫應答的重要細胞因子【。本試驗中，在24日齡時L-2水平顯著升高，而疫苗對照組IL-2水平處于最低水平,因此，金養麥在疫苗注射初期能夠促進鴨IL-2的分泌，T淋巴細胞轉化效率與細胞的分化水平呈正相關，是反映細胞免疫功能強弱的重要指標在24日齡后金養麥試驗組T淋巴細胞轉化效率始終高于疫苗對照組，說明金養麥能夠促進鴨群T淋巴細胞的增殖因此，金養麥能夠有效誘導機體細胞免疫和體液免疫，同時還能夠有效促進禽

15、流感疫苗對鴨群的免疫，為今后免疫增強劑的篩選奠定基礎。參考文獻：1 吳道科.三穗麻鴨有了深加工企業N.貴州日報，2009-03-18(2).2 道科,代光.三穗多舉措做大做強三例鴨：N.經濟信息時報，2009-03-04(3).3 AdamsSC,XingZ,LiJ,etal.Immune-relatedgeneexpressioninresponsetoHl1N9lowpathogenicavianinfluenzavirusinfectioninchickenandPekinduckperipheralbloodmononuclearcells_j.Molecularimmunology.

16、2009.46(8):1744-1749.4 王慧影，何大乾.水禽是流感病毒巨大的儲存庫，隱蔽性大、散毒途徑廣而快，水源成媒介一業界上下要警惕水禽流感巨大“隱性”侵害J.中國動物保健，2007(9)：87-89.5 盛華剛，朱立俏，林桂濤.金養麥的化學成分與藥理作用研究進展J.西北藥學雜志，2011,26(2):156.6 鄧蓉，向清華，王安娜，等.野生金養麥的營養成分及其飼喂對豬肉品質的影響J.貴州農業科學，2012,40(1)：114-116.7 WebsterR,HulseD.ControllingavianfluatthesourceJ.Nature,2005,435(7041)：41

17、5-416.8：喬紅杰，丑貴平，李春玲.金養麥根提取物對雞牌淋巴細胞活性影響的血清藥理學研究JJ.動物醫學進展,2010,31(3):44-48.9王繼永，王元忠，曾燕，等.抗癌新藥金養麥中微雖元素的光譜測定J.光譜學與光譜分析，2011,31(1):253-255.10JBaiL,DengS,RebouletR,etal.NaturalkillerT(NKT)-B-ceilinteractionspromoteprolongedantibodyresponsesandlong-termmemorytopneumococcalcapsularpolysaccharidesJ.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2013,110(40)：16097-16102.11 劉