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文檔簡介
1、金養麥對鴨禽流感疫苗免疫效果影響阮涌I,嵇辛勤2,夏先林I,文明心,李世靜I,劉廷江I,陳佳琪(1.貴州大學動物科學學院,貴州貴陽550025;2.貴州省動物疫病研究室.貴州貴陽550003)摘要:一直以來,鴨群對禽流感疫苗免疫應答效果欠佳,為解決該現狀,利用金養麥具有增強免疫力、抗癌和抑菌的功效,按照1%、2%、3%的重量比將金養麥混合于三穗麻鴨日根中c于不同日齡采血后分別采用血凝抑制試驗、MTT法和ELISA方法,檢測禽流感抗體效價、T淋巴細胞轉化效率、IFN-)和IL-2水平。結果顯示,金養麥能夠促進禽流感疫苗對鴨群的體液免疫和細胞免疫水平。關鍵詞:三穗麻鴨;金養麥;禽流感疫苗;免疫中圖
2、分類號:S852.43文獻標識碼:A文章編號:1004-874X(2015)13-0119-04EffectsofFago-conimmuneeffectsofavianinfluenzavaccineforducksRUANYong1,JIXin-qin12,XIAXian-lin1,WENMing-2,LIShi-jing,LIUTing-jiang1,CHENJia-qi1(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversityGuiyang550025,China;2.LaboratoryforAnimalDiseaseofGuizhou,Guiyang5
3、50003,China)Abstract:Inordertosolvethesituationofineffectivenessofavianinfluenzavaccineforducks,1%,2%,3%weightofFago-cwasmixedinSan-Suiduckdietsseparately.Fago-chasthefunctionsofenhancingimmunity,anti-cancerandantibacterial.HI,MTTandELISAwereusedtodetectavianinfluenzaantibodytiter,Tlymphocytetransfo
4、rmationefficiency,IFN-7andIL-2levels,afterducksbloodsampleswerecollectedondifferentdays.TheresultsshowedthatFago-ccouldpromotehumoralandcellularimmunitylevelofavianinfluenzavaccineforducks.Keywords:San-Suiduck;Fago-c;avianinfluenzavaccine;immune近年來,貴州省三穗縣大力發展養鴨業,隨著養殖規模不斷擴大,疾病防控更加重要卜2】。據有關文獻報道口水禽作為禽流
5、感病毒的儲存及變異宿主,對禽流感疫苗的免疫應答效果一直欠佳,為解決該問題,鴨用免疫增強劑的篩選逐步引起科研工作者的重視。金養麥作為我國傳統的中藥材,具有增強免疫力、抗氧化、抗腫瘤和抗菌等功效。同時還有文獻指出,將金養麥代替10%14%的全價日糧喂豬,可提高豬肉的氨基酸含量,同時減低膽固醇含量,說明金養麥在畜牧養殖方面具備良好應用前收稿日期:2014-09-27基金項目:貴州省科技計劃項目(黔科合計省合20137004號,黔科合重大專項字20126004號)作者簡介:阮涌(1987-),男,苗族,碩士,助理實驗師,E-mail:ruan_yong通訊作者:嵇辛勤(1957-),女,教授,E-ma
6、il:jxq972景,但其對水禽免疫功能的影響還未見相關文獻報道。為此,本試驗將金養麥作為飼料添加劑按一定比例混合于鴨日糧中,通過檢測鴨群注射禽流感疫苗后體液和細胞免疫水平,分析金養麥對鴨免疫功能的影響,從而為鴨專用免疫增強劑的篩選工作奠定基礎。1 材料與方法1.1試驗材料試驗于貴州省黔東南州青酒集團養殖基地進行。試驗動物為三穗麻鴨,共175只,隨機平均分為5組(陰性對照組、疫苗對照組、金養麥I組、金養麥II組、金養麥m組);育雛日糧為懷化正大飼料有限公司小鴨料,之后采用常規自配飼料,其中各金養麥試驗組在自配飼料基礎上分別按照I%、2%、3%的重量比添加金養麥干燥粉末,混合均勾后保存備用;每組
7、鴨的飼養管理和條件一致。試劑:H5N1亞型禽流感病毒(Re-6株)滅活疫苗(批號2012015),購自青島易邦生物工程有限公司;金養麥粉末,由養殖場采集金養麥植株曬干磨碎;禽流感HI抗原(批號201206),購自哈爾濱維科生物技術開發公司;MTT試劑,購于Solarbio公司;檢測鴨IFN-7和鴨IL-2試劑盒,均購于上海浩本生物科技有限公司。1.2試驗方法空白對照組只注射等量生理鹽水,常規疫苗組和各金養麥試驗組在10、24日齡按照常規劑量(0.5mL/只)注射禽流感滅活疫苗;育雛期各組均采用正大飼料小鴨料,其中,金養麥I組、II組、DI組分別在正大飼料小鴨料中按1%、2%、3%重量比添加金養
8、麥,育雛期結束后,金養麥I組、II組、m組分別飼喂含1%、2%、3%金養麥重量比的自配飼料,常規疫苗組和空白對照組同期飼喂不含金養麥的自配飼料。在10、24、38、52、66日齡每組隨機選取3只鴨無菌抽取血液,分裝于肝素鈉抗凝管和非抗凝管各5.0mL,肝素鈉抗凝管血液用于MTT試驗,不抗凝血液收集后低速離心分離血清低溫保存。檢測數據采用Excel和SPSS16.0軟件處理。2 結果與分析2.1金養麥對鴨禽流感抗體效價的影響采用HI試驗,對試驗鴨血清進行禽流感抗體效價檢測,結果見圖1。由圖1可知,在10日齡未免疫時,均未產生禽流感抗體效價,符合實驗要求;在第52日齡時,金養麥組禽流感抗體效價達到
9、峰值,且金養麥口組(2%),與疫苗對照組差異顯著;在66日齡時,各組間禽流感抗體效價差異不顯著。表86428642S空白對照組D金養麥I組昌金葬麥in組1024385266日齡圖1愈流感抗體效價動態變化明,金養麥U組能夠促進鴨群對禽流感疫苗的應答水平。2.2金養麥對鴨IFN-y水平的影響采用ELISA試劑盒,將低溫保存血清平衡至室溫,嚴格按照試劑盒說明書操作步驟進行檢測,結果見圖2O由圖2可知,在10-52日齡,各組差異均不顯著,但金養麥II組(2%)IFN-含量整體呈現較高水平;在免疫后66日齡,金養麥U組(2%)與疫苗對照組差異顯著。表明金養麥在一定程度上可提高鴨IFN-)水平。10243
10、85266日齡圖2鴨IFN-y水平動態變化1024385266日齡圖2鴨IFN-y水平動態變化0.80.6a0.40.20金葬麥對鴨T淋巴細胞轉化效率的影響收集當天新鮮血液,采用MTT法檢測鴨T淋巴細胞轉化效率。檢測結果見圖3O由圖3可知,在免疫后24日齡,金養麥I組與疫苗對照組差異顯著,金養麥II組、DI組與疫苗對照組差異極顯著;在免疫后38日齡,金養麥I組、II組與疫苗對照組差異極顯著,金養麥HI組與疫苗對照組差異顯著;在免疫后52日齡,各金養麥組與疫苗對照組差異極顯著;在免疫后66日齡,金養麥II組、IH組與疫苗對照組差異極顯著。表明金養麥可提高鴨T淋巴細胞轉化水平。2.3 金養麥對鴨I
11、L-2水平的影響采用ELISA試劑盒,將低溫保存血清平衡至室溫,嚴格按照試劑盒說明書進行檢測,結果見圖4。由圖4可知,在免疫后24日齡,各金養麥組均與疫苗對照組差異極顯著,在免疫后38日齡各金養麥組IL-2水平均低于疫苗對照組,且與空白對照組無顯著差異;在免疫后52日齡各組差異不顯著,但IL-2水平均高于疫苗對照組;在免疫后66日齡,各組差圖3鴨T淋巴細胞的轉化效率圖3鴨T淋巴細胞的轉化效率一1-=生與蕓空白對照組10套薈歪言蕓蕓至-薈一蕓13疫苗對照組臼金養麥I組(3金養麥II組243852日齡圖4鴨IL-2水平動態變化一蕓ii一蕓g-一一一g=_蕓標易餐易務多三三-二&一=_=一|云_一?
12、&_=!_=三_!_蕓芫_ta金養麥m組66異均不顯著。表明金養麥配合飼料能夠在鴨第24日齡促進IL-2水平的分泌。3 結論與討論水禽作為禽流感病毒的主要儲存宿主,一直以來對禽流感疫苗免疫應答效果欠佳。針對該現狀,本試驗選用具有抗癌抑菌和增強免疫功效的中藥材金葬麥B9】,將其磨成粉末添加于鴨日常飼料中,嚴格按照貴州省三穗縣禽流感疫苗免疫程序,實時監測鴨群禽流感抗體效價、T淋巴細胞轉化效率、IFN-7水平動態變化及IL-2水平動態變化。結果顯示,52日齡時金養麥口組禽流感抗體效價與疫苗對照組差異顯著;66日齡時金養麥D組IFN-7水平與疫苗對照組差異顯著;24日齡時金養麥I、U、DI組IL-2水
13、平均與疫苗對照組差異極顯著;24、38、52日齡時,金養麥I、U、ID組T淋巴細胞轉化效率均與疫苗對照組呈現顯著或極顯著差異,因此,金養麥試驗組禽流感抗體效價整體高于疫苗對照組。本試驗結果表明,金弄麥能夠促進鴨群禽流感抗體的效價,而抗體的分泌與效應B細胞密切相關I,因此,金養麥可以有效誘導機體體液免疫;IFN-7是一組具有多種功能活性的蛋白質,是由單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子,對同種細胞具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長、分化、免疫功能等多種生物活性,也與抗體的產生密切相關本試驗中,金養麥對鴨IFN-7水平的促進效果緩慢,但于24-52日齡各金養麥試驗組IFN-7水平與疫苗對照組相比仍呈現逐步
14、升高的趨勢,且在52日齡時各金養麥試驗組IFN-)水平高于疫苗對照組,原因可能是由于鴨群自身對禽流感疫苗免疫應答水平較低所致IL-2又稱T細胞生長因子,可促進T細胞的增殖,也參與抗體反應,是機體調控免疫應答的重要細胞因子【。本試驗中,在24日齡時L-2水平顯著升高,而疫苗對照組IL-2水平處于最低水平,因此,金養麥在疫苗注射初期能夠促進鴨IL-2的分泌,T淋巴細胞轉化效率與細胞的分化水平呈正相關,是反映細胞免疫功能強弱的重要指標在24日齡后金養麥試驗組T淋巴細胞轉化效率始終高于疫苗對照組,說明金養麥能夠促進鴨群T淋巴細胞的增殖因此,金養麥能夠有效誘導機體細胞免疫和體液免疫,同時還能夠有效促進禽
15、流感疫苗對鴨群的免疫,為今后免疫增強劑的篩選奠定基礎。參考文獻:1 吳道科.三穗麻鴨有了深加工企業N.貴州日報,2009-03-18(2).2 道科,代光.三穗多舉措做大做強三例鴨:N.經濟信息時報,2009-03-04(3).3 AdamsSC,XingZ,LiJ,etal.Immune-relatedgeneexpressioninresponsetoHl1N9lowpathogenicavianinfluenzavirusinfectioninchickenandPekinduckperipheralbloodmononuclearcells_j.Molecularimmunology.
16、2009.46(8):1744-1749.4 王慧影,何大乾.水禽是流感病毒巨大的儲存庫,隱蔽性大、散毒途徑廣而快,水源成媒介一業界上下要警惕水禽流感巨大“隱性”侵害J.中國動物保健,2007(9):87-89.5 盛華剛,朱立俏,林桂濤.金養麥的化學成分與藥理作用研究進展J.西北藥學雜志,2011,26(2):156.6 鄧蓉,向清華,王安娜,等.野生金養麥的營養成分及其飼喂對豬肉品質的影響J.貴州農業科學,2012,40(1):114-116.7 WebsterR,HulseD.ControllingavianfluatthesourceJ.Nature,2005,435(7041):41
17、5-416.8:喬紅杰,丑貴平,李春玲.金養麥根提取物對雞牌淋巴細胞活性影響的血清藥理學研究JJ.動物醫學進展,2010,31(3):44-48.9王繼永,王元忠,曾燕,等.抗癌新藥金養麥中微雖元素的光譜測定J.光譜學與光譜分析,2011,31(1):253-255.10JBaiL,DengS,RebouletR,etal.NaturalkillerT(NKT)-B-ceilinteractionspromoteprolongedantibodyresponsesandlong-termmemorytopneumococcalcapsularpolysaccharidesJ.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2013,110(40):16097-16102.11 劉
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