1、抗壞血酸有機鍺倍半氧化物抑制雞胚尿囊膜血管生成作用的研究                  作者：陳芳 閆靜 郭冷秋 賈桂芝 張基慶【摘要】  目的研究抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對雞胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法在七日齡CAM上植入含不同劑量試藥的甲基纖維素膜片，并孵化48 h。解剖顯微鏡下計數加藥組和對照組局部血管數，以此來反映試藥對CAM新生血管形成的影響。結果抗壞血酸有機鍺倍半氧化物2.5，1.5，0.5 mg

2、/egg劑量相關性減少CAM局部的血管數。結論 抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對CAM新生血管有顯著的抑制作用。 【關鍵詞】  抗壞血酸有機鍺倍半氧化物 雞胚尿囊膜(CAM) 抗血管生成   Abstract：ObjectiveTo investigate the antiangiogenesis effect of the ascorbic Acid SesquioxyGe()  on chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM). MethodsThe ascorbic acid SesquioxyGe() l

3、oaded with methylcellulose membranes was applied on chicken CAM surface of 7-day-old eggs and incubated for 48 hours .Local vessel density was measured under dissection microscope . The inhibitory effect on CAM angiogenesis was evaluated.ResultsThe Ge() complex with ascorbic acid at 2.5，1.5 mg/egg a

4、nd 0.5 mg/egg dose-dependently decreased the density of local blood vessels. ConclusionAscorbic acid SesquioxyGe() significantly inhibits chicken CAM angiogenesis .   Key words：Ascorbic Acid  SesquioxyGe();  Chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM);   Antiangiogene

5、sis   腫瘤生長和轉移與新生血管的形成密切相關。臨床與動物實驗證明，當腫瘤組織生長超過2 mm3時，如果沒有新生血管供應充足的氧氣和營養物質，腫瘤組織將保持靜止或發生退化。近年來,有研究發現某些化療藥物,在小劑量、高頻率的給藥方式下可以選擇性地顯著抑制腫瘤組織內新生血管內皮細胞的生長,使腫瘤細胞因為血供不足而生長受阻。這種特殊的給藥模式,化療藥物的作用靶位已經不是腫瘤細胞,而是新生的血管內皮細胞,這就稱為小劑量化療(metronomic chemotherapy)或抗血管生成化療( antiangiogenic chemotherapy)1，2。  

6、 因此新生血管生成是腫瘤生長和擴散的必要條件，抑制腫瘤血管的生成可以使腫瘤因缺氧、缺血而部分死亡，從而延緩腫瘤生長和抑制腫瘤轉移3。開展抑制腫瘤血管的藥物篩選研究目前已成為抗腫瘤研究的熱點。有機鍺化合物是人們熟知的具有廣譜生物活性的有機化合物，特別是它的抗癌活性研究已引起人們的極大興趣4，5?？箟难嵊袡C鍺倍半氧化物是本實驗室研制合成的一種新型有機鍺化合物，經動物腫瘤抑制實驗證明，該化合物具有顯著的抗腫瘤活性。雞胚尿囊膜(CAM)是研究體內血管發生的常用模型之一6，7。本研究應用CAM技術，觀察了抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對CAM血管生成的影響，從抗血管生成途徑對抗壞血酸有機鍺倍半氧化物的抗癌作

7、用機制進行了初步探討。   1  材料與儀器   1.1  動物與材料昆明種小鼠,體重(20 ±2) g,由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。小鼠S180腹水型瘤株由哈爾濱腫瘤醫院實驗動物中心提供。受精種蛋購于東北農業大學孵化場。   1.2  試劑 甲基纖維素（M450，英國進口分裝，北京索萊寶科技有限公司哈爾濱分公司），丙酮（天津市化學試劑六廠三分廠），甲醇（北京化工廠），雙蒸水（哈爾濱蒸餾水廠），新潔爾滅（齊齊哈爾市鶴城化學藥物有限責任公司）。   1.3 

8、儀器與設備恒溫恒濕箱（SPX-250型，上海博迅實業有限公司醫療設備廠），解剖鏡（BA400/500型，麥克奧迪實業有限公司），凈化工作臺（SW-CJ-/F型，蘇州型凈化設備廠）。   2  方法    2.1  動物腫瘤抑制實驗   2.2  抑制雞胚尿囊膜（CAM）血管生成的實驗            利用SPSS13.0軟件對CMA實驗數據分析，給藥組與對照組相比有顯著差異（P0.01。 &

9、#160; 3  結果    3.1  抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對小鼠S180的抑制作用見表1，可見抗壞血酸有機鍺倍半氧化物能明顯減輕瘤重，利用SPSS13.0軟件分析，給藥組與生理鹽水對照組相比有顯著差異（P0.01，且與劑量成正相關。實驗重復3次，結果相近，取平均值。表1  不同劑量抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對小鼠S180的抑制作用（3 次平均）與對照組比較，P 0.01；n=10   3.2  抑制雞胚尿囊膜（CAM）血管生成實驗   由圖1和表2可知，高劑量實驗組對血管生成有明顯的抑制作用

10、，中劑量實驗組血管數量明顯減少且出現受損情況，低劑量實驗組的血管雖未出現破損現象，但血管變細。綜合可知不同劑量的實驗組對CAM血管生成具有不同程度的抑制作用。表2  不同劑量抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對CAM血管數目的影響   4  討論   早在20世紀70年代，美國的Folkman博士就證實了腫瘤的生長和轉移依賴于血管的生長這一假說。因此，抑制腫瘤血管生成，阻斷腫瘤的營養供應，以達到控制腫瘤的生長和轉移，對于實體腫瘤的治療具有重要的意義?？箟难嵊袡C鍺倍半氧化物是我們實驗室合成的一種新型有機鍺化合物，在證明了其對小鼠S180和H22

11、抗腫瘤作用后（另文報道），為進一步揭示其抗腫瘤的作用機制，我們應用雞胚尿囊膜(CAM)模型首次證明了抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對腫瘤血管生成的抑制作用。雞胚尿囊膜(CAM)方法是一種經典的研究新生血管的方法，采用7日齡的雞胚，是因為尿囊膜上的微血管仍在進一步發展，且雞胚已經具有抵抗外界環境的改變對它產生的影響的能力，減小了環境對雞胚成活率和血管生成方面的影響。在選擇載體方面，雖然是固體藥物，但仍采用甲基纖維素做載體，以減少藥物直接接觸尿囊膜時對它產生的刺激。   實驗結果表明，抗壞血酸有機鍺倍半氧化物對于CAM血管形成具有較強的抑制作用，可能是一種具有應用前景的抗腫瘤藥物，在

12、抗腫瘤治療中具有很大的潛在應用價值?！緟⒖嘉墨I】  1 Hanahan D, Bergers G, Bergsland E. Less ismore, regularly: metronomic dosing of cytotoxic drugs can target tumor angiogenesis in miceJ. Clin Investig, 2000, 105 (8)：1045.2 Browder T, Butterfield CE, Kraling BM, et al. Antiangiogenic scheduling of chemotherapy imp rov

13、es efficacy against experimental drug-resistant cancerJ. Cancer Res, 2000, 60(7)：1878.3 LIN H. Progress of tumor angiogenesis inhibitor TNP-470J.Foreign Medical Science Cancer Section，1998，25（4）：1182.4 Yang K L, Li X S, Zhang L, et al. Synthesis of some medicine compounds containing germanium moiety

14、 and their anticancerous activityJ.Chinese Journal of Applied Chemistr y, 2004, 21（1）：101.5 LI X S. Synthesis and antitumor activity of a new organo-germanium compoundJ.Ningxia Petroleum and Chemical Industry，2003, 1: 20.6 Kim J S , Yu HK,Ahn J H , et al. Human apolipoprotein(a) kringle V inhibits a

15、ngiogenesis in vitro and in vivo by interfering with the activation of focal adhesion kinasesJ.Biophys Res commun,2004,313(3):534.7 Crivellato E , Nico B , Vacca A, et al. Recombinant human erythropoietin induces intussusceptive microvascular growth in vivoJ.Leukemia , 2004,18(2):331.8 徐叔云，卞如濂，陳 修. 藥理實驗方法學,第3版M.北京：人民衛生出版社，1990：1761.9 蔣 霞，李 勇，范維琥. 部分冠心病常用中藥對雞胚尿囊膜的促血管生