1、建立Alzheimer氏病動物模型方法的研究進展                 關鍵詞：Alzheimer氏病動物模型進展 摘要AD型癡呆占老年性癡呆50%以上，嚴重危害著老年人的健康。國內外許多學者進行了大量有關AD的研究，特別是近年關于AD疾病的研究日益受到國內外學者高度重視。建立一個可靠的模型是研究該病的關鍵。迄今為止尚無一個公認理想的AD模型，本文綜述了六十年代以來有關AD模型建立方法的研究進展狀況，闡明了各種方法的優缺點。

2、隨著人口老齡化的發展，老年性疾患已成為一個明顯影響人類健康突出的問題，其中老年性癡呆（Seniledementia,SD）是最常見的老年性疾病之一，它和惡性腫瘤、心腦血管意外并列為導致老年人死亡的三大疾病。據國外報道，SD患病率占老年人群4-5%，其中半數以上為Alzheimer氏病（簡稱AD）。國內報道，我國老年性癡呆患病率為4.36%，其中AD患者占2.8%1。AD是一種原發變性型老年性癡呆，其特點是發病年齡較早，多在65歲以前，故又稱作早老年性癡呆，病程進展緩慢，主要表現為近期記憶力明顯減退，在神經化學方面，往往多種神經遞質系統受損。 自1906年德國神經病理學家AloisAlzheim

3、er發現AD以來，許多科學工作者進行了近一個世紀的潛心探究,從形態學、神經生物學和臨床研究等方面做了大量工作，在AD的病理改變、發病機制及治療等方面都取得了可喜的成績。關于AD病因有下述多種學說：遺傳學說2；微量元素學說，其中提出最多的是鋁和硅3-4；神經遞質學說，AD患者神經遞質活動改變主要在海馬、基底前腦核及大腦新皮質區。多數學者認為主要與乙酰膽堿能系統改變有關，其次為5-羥色氨能系統等5-6；免疫反應學說，可能是獨立因素，也可能是與感染、遺傳和環境中毒相關的繼發因素，并提出與白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-6（IL-6）等有關7-8；慢病毒學說9；雌激素水平下降10。對上述病因學

4、說，諸多學者互有輾段鬧姨醄建立Alzheimer氏病動物模型方法的研究進展 椋形摶恢氯鮮丁?臨床上AD患者主要表現為大腦認知功能障礙，如健忘、記憶力和空間辨別能力減退以及反應遲鈍等。關于AD的病理機制，目前較為明確的是：基底前腦核群內乙酰膽堿（ACh）能神經元的變性和丟失；患者腦內形成神經原纖維纏結；新皮質和海馬結構內出現大量的淀粉樣沉積，其數量的多寡與AD的嚴重程度呈正相關11。近年已從淀粉樣沉積核心中分離和鑒別出一種肽類物質，稱為-淀粉樣肽（-AP或/A4蛋白）。-AP是-淀粉樣前體蛋白（-APP）的病理性裂解產物，正常情況下不表達，在正常老年人有極少量的表達。（4）腦內形成AMY斑塊。這

5、一病理改變是Trojanowski等人的最新發現，其與神經原纖維纏結、淀粉樣沉積一起為AD病人的三大特征性病理改變12。由于AD疾病嚴重危害著老年人的健康，同時也給家庭和社會帶來巨大的財政負擔，因而，關于AD疾病的研究日益受到國內外學者高度重視。建立一個可靠的AD動物模型是研究AD的重要環節。有關AD動物模型建立的方法較多，各有利弊，本文將有關方法比較綜術如下。 1化學損傷 1.1神經毒氨基酸損毀基底大細胞核（nucleusbasalismagnocellularis,NBM） 1980年Ben-An、1985年Sofroniew等分別報道用興奮性神經毒氨基酸，如紅藻氨酸（KA）、鵝膏蕈氨酸（

6、IBD）、使君子氨酸（QUIS）、N-甲基-D-天門冬氨酸（NMDA）注入大鼠NBM，以損毀大鼠NBM建立癡呆模型13-15，隨后國內外一些科研工作者采用上述方法建立了AD模型，并在此基礎上進行了關于AD的一系列研究。1987年Dunnett等人用這四種神經毒氨基酸同時進行對比實驗，結果表明使君子氨基酸特異性最高，對非膽堿能神經元損傷最小；KA對非膽堿能神經元損傷最大，且毒性作用是其它三種的2-3倍。使君子氨酸毒性作用相對緩和，劑量較易掌握，動物死亡率低，模型建立成功率高，因素基優于其它三種16。我們采用紅藻氨酸進行實驗證實了其毒性作用較強，很難掌握用量，動物易死亡，這與Dunnett等人的實

7、驗結果是一致的。總的來看這些神經毒氨基酸都可導致NBM的膽堿能神經元變性和減少，繼而引進相應大腦新皮質區的膽堿能纖維減少，細胞變性與死亡，膽堿能的標志酶ChAT和AChE含量下降，學習記憶行為減退，所以可以用來建立AD的模型。但有以下幾個缺陷：無神經炎斑及神經纖維纏結的組織病理學改變17；神經毒氨基酸對非膽堿能神經元也有影響；ChAT的活性在海馬末受影響；據報道神經毒氨基酸對乙酰膽堿系統的損傷可逆轉18；業已證明AD病的基底核膽堿能神經元的喪失是逆行性引起的，即繼發于大腦皮層的病理變化。1993年在第23屆美國神經科學年會上Dunbar等也提出此種方法關非為AD的理想模型19。 1.2AF64

8、A（Ethylcholinemustardaziridiniumion） AF64A是一種特異的突觸前膽堿毒。Mantione等人用AF64A注射入小鼠側腦室進行其神經毒性的研究，發現AF64A可引起小鼠乙酰膽堿能系統的特異性損傷。如果用AF64A直接向大鼠背海馬內注射，其對膽堿能神經系統的毒性較注入側腦室強20。另有實驗報道用AF64A直接向NBM注射，造成膽堿能功能損害來建立AD模型21。用AF64A制做的AD模型表現為膽堿能系統和記憶功能損害，但不影響非膽堿能神經元，這點優于興奮性神經毒氨基酸。然而，用此方法也不出現老年斑和神經原纖維纏結形成的組織病理學改變。 1.3192IgG-Sap

9、orin 近年Lappi和Gary等人用192IgG-Saporin向大鼠側腦室有前腦基底區注射進行有關AD的研究22-23。192IgG-Saporin是一種抗神經免疫毒。用其向大鼠腦內NBM注射，可選擇性損害與基底前腦核有關的乙酰膽堿系統，如內側隔區、斜角帶，同時出現記憶減退的表現，但仍然不能出現AD所特有的其它組織病理學改變。 1.4喹啉酸（Quinolinicacid,QUIN） 喹啉酸是一種興奮性神經毒素。1995年宋前流等人用其注入海馬CAI區，通過其選擇性破壞谷氨酸（Glu）能神經元，擬制成Glu能損毀的AD模型。本模型的制做是基于Maragos提出的AD-Glu假說24。喹啉酸

10、為Glu類似物，是腦內潛在的內源性興奮性毒素25，當以較高濃度應用于細胞時，產生與海人酸和鵝膏蕈氨酸相似的病理和生化改變，實驗表明，其可引起大鼠空間辨別能力和學習記憶障礙。但是它能否導致其它組織病理學改變未見文獻報道。 1.5東莨菪堿（Scopolamine） 東莨菪堿是一種抗膽堿能藥。東莨菪堿可阻斷大腦皮層中的乙酰膽堿受體的結合位點，從而引起膽堿能系統功能障礙。Caulfield等將東莨菪堿注入小鼠、大鼠、猴等哺乳動物的側腦室進行了有關乙酰膽堿功能及AD方面的研究26。與神經毒氨基酸和AF64A比較，此方法建立的AD模型主要是出現與AD一致的記憶、認知功能障礙，有關AD特有的組織病理學改變是

11、否發生未見文獻報道：據文獻提示東莨菪堿引起的膽堿能功能損害可逆轉，而AD是一種慢性、進行性不可逆轉的神經性疾病。所以用此方法不能完全模擬出AD的各種特征。 1.6鋁元素中毒 正常人腦組織鋁的含量1.8±0.8g/g（干重）或1.22g/g（濕重），正常大鼠腦內鋁含量為1.1g/g（干重）27-28。已被公認，鋁在體內一些部位的異常蓄積可產生毒性作用。早在1937年Scherp和Church就提出鋁可引起神經元退化的看法28。1965年Klatzo和Terry等提出鋁中毒可能與AD發病有關，他發現AD病人與鋁中毒病人腦中均可見NFT3。此后1973年Crapper等人提出鋁可能是神經毒素，他們給貓腦內直接注射鋁鹽，發現鋁具有神經毒素樣作用，導致神經纖維變性4。國內有學者采用給大鼠或小鼠腹腔注射及口服鋁鹽建立AD模