1、東院區檢驗科HBYD2YDJ-SC-01-2013質量手冊第1版 第0次修訂第12頁 共12頁臨床免疫實驗室室內質量控制操作程序前 言河北醫科大學第二醫院檢驗科免疫實驗室開展的定量檢測項目室內質量控制措施均遵從臨床免疫實驗室室內質量控制操作程序。具體定量檢測項目包括：乙型肝炎表面抗原測定(ELISA法或化學發光法)乙型肝炎表面抗體測定(ELISA法或化學發光法)乙型肝炎e抗原測定(ELISA法或化學發光法)乙型肝炎e抗體測定(ELISA法或化學發光法)乙型肝炎核心抗體測定(ELISA法或化學發光法)免疫球蛋白A測定免疫球蛋白G測定免疫球蛋白M測定補體C3測定補體C4測定抗鏈O測定C反應蛋白測定

2、類風濕因子測定轉鐵蛋白測定銅藍蛋白測定甲胎蛋白測定癌胚抗原測定 臨床免疫實驗室室內質量控制操作程序1.術語質量控制（質控）：為達到質量要求所采取的作業技術和活動。（1）質量控制包括作業技術和活動，其目的在于監視過程，并排除質量環中所有階段中導致不滿意的原因，以取得經濟效益。（2）質量控制和質量保證的某些活動是相互聯系的（GB/T 6583 1994）。室內質控：實驗室內為達到質量要求的操作技術和活動。（1）在醫學實驗室，室內質控的目的在于監測過程，以評價檢驗結果是否可靠，以及排除質量環節中所有階段中導致不滿意的的原因。（2）廣義上室內質控適用于得出檢驗結果所有步驟的活動，從臨床需要考慮，從收集

3、標本，檢測直至報告測定結果。室間質量評價：由第三方機構采用一系列的辦法連續地、客觀地評價各實驗室的試驗結果，并發現實驗室本身不易發現的不準確性，了解各實驗室之間結果的差異，幫助其校正，使其結果在具有可比性。這種評價是一種回顧性評價，旨在建立實驗室間結果的可比性。校準物/校準品：準備用于建立一個或多個定量值的任何物質。控制限：判斷質控品測定的允許范圍的上、下限，通常以標準差的倍數表示。質控規則：從質控品的測定數據分析該批測定操作是否合格的判斷標準。用符號AL(或A-L)表示, 其中A是測定的標本數或超過控制限(L)的質控測定值的個數，L是控制限。當質控測定值滿足規則要求的條件時，判斷該分析批違背

4、此規則。操作過程規范圖：顯示測定方法的不精密度、不準確度和已知質量保證水平達到規定質量要求需要采用的質控方法之間的關系的一種線性圖。精密度：在一定條件下進行多次測定時，所得測定結果之間的符合程度，通常表示測量結果中隨機誤差的大小。準確度：是測量結果中系統誤差與隨機誤差的綜合，表示測量結果與真值的一致程度。偏倚：指測定結果與真值的偏離程度。變異系數：測定結果的標準差與平均值的百分比值，通常用CV%表示。溯源性：通過一條具有規定不確定度的不間斷比較鏈，使測量結果或測量標準的值能夠與規定的參考標準，通常是國家標準或國際標準聯系起來的一種特性。在控：質控結果在控制限之內。失控：質控結果在控制限之外。誤

5、差檢出概率：對常規測定過程中分析誤差的檢出概率稱為誤差檢出概率。假失控概率：當測定操作正確進行，除了方法的固有的誤差外，在沒有其它誤差加入情況下如果質控過程中出現了失控信號,稱為"假失控"，假失控出現的概率稱為假失控概率。2. 室內質控的目的室內質控是由實驗室的工作人員采用一系列統計學的方法，連續地評價本實驗室測定工作的可靠程度，判斷檢驗報告是否可發出的過程。室內質控的目的是檢測、控制本實驗室測定工作的精密度，并檢測其準確度的改變，提高常規測定工作的批間、批內標本檢測結果的一致性。3. 開展室內質控前的準備工作3.1 培訓實驗室工作人員（人員培訓）在開展質控前，每個實驗室工

6、作人員都應對質控的重要性、基礎知識、一般方法有較充分的了解，并在質控的實際過程中不斷進行培訓提高，在實際工作中培養一些質控工作的技術骨干。3.2 建立標準操作規程（操作文件的建立）實施質控需要有一套完整的標準操作規程文件（SOP）做保障。例如儀器的使用、維護操作規程，試劑、質控品、校準品等的使用操作規程等。所有實驗室都應建立一套較完整的SOP。3.3 儀器的檢定與校準（儀器的校準和保養）對所用酶標儀、量具要定期進行計量檢定。對測定臨床樣本的儀器要按一定要求進行校準，校準時要選擇合適的（配套的）標準品；如有可能，校準品應能溯源到參考方法或/和參考物質；對不同的分析項目要根據其特性確立各自的校準頻

7、度。3.4 質控品的選擇質控品是保證質控工作的重要物質基礎。根據質控品物理性狀可有凍干質控品、液體質控品和混合血清等；根據有無測定值可有定值質控品和非定值質控品。實驗室可根據各自的情況選用以上任何一種質控品作為室內質控品。但做為較理想的質控品至少應具備以下一些特性：（1）人血清基質，分布均勻；（2）無傳染性；（3）添加劑和調制物的數量少；（4）瓶間變異小；（5）凍干品其復溶后穩定，2-8時不少于24小時，-20時不少于20天；某些不穩定成分（如膽紅素、ALP等）在復溶后前4小時的變異應小于2%；（6）到實驗室后的有效期應在1年以上。(7) ELISA定性試驗可留取Cut Off值附近的陽性血清

8、，或由強陽性標本稀釋后作為質控血清，質控血清-20凍存備用,使用前室溫復融。3.5 質控品的正確使用與保存在使用和保管質控品時應注意以下幾個方面：（1）嚴格按質控品說明書操作；（2）凍干質控品的復溶要確保所用溶劑的質量；（3）凍干質控品復溶時所加溶劑的量要準確，并盡量保持每次加入量的一致性；（4）凍干質控品復溶時應輕輕搖勻，使內容物完全溶解，切忌劇烈振搖；（5）質控品應嚴格按使用說明書規定的方法保存，不使用超過保質期的質控品；（6）質控品要在與患者標本同樣測定條件下進行測定。4. 室內質控方法的設計各實驗組可根據各自的情況及測定項目的不同選用不同的室內質控方法。5. 室內質控的實際操作5.1

9、設定靶值5.1.1 穩定性較長的質控品在開始室內質控時，首先要設定質控品的靶值。各實驗室應對新批號的質控品的各個測定項目自行確定靶值。靶值必須在實驗室內使用自己現行的測定方法進行確定。定值質控品的標定值只能做為確定靶值的參考。5.1.1.1 暫定靶值的設定為了確定靶值，新批號的質控品應與當前使用的質控品一起進行測定。根據20或更多獨立批獲得的至少20次質控測定結果，計算出平均數，作為暫定靶值。以此暫定靶值作為下一個月室內質控圖的靶值進行室內質控；一個月結束后，將該月的在控結果與前20個質控測定結果匯集在一起，計算累積平均數（第一個月），以此累積的平均數做為下一個月質控圖的靶值。重復上述操作過程

10、，連續三至五個月。5.1.1.2 常用靶值的設立以最初20個數據和三至五個月在控數據匯集的所有數據計算的累積平均數作為質控品有效期內的常用靶值，并以此作為以后室內質控圖的平均數。對個別在有效期內濃度水平不斷變化的項目，則需不斷調整靶值。5.1.2 穩定性較短的質控品在3-4天內，每天分析每水平質控品3-4瓶，每瓶進行2-3次重復。 收集數據后，計算平均數、標準差和變異系數。對數據進行異常值檢驗。如果發現異常值，需重新計算余下數據的平均數和標準差。以此均值作為質控圖的靶值。5.1.3 外圍值的剔除在初次靶值設立時，當某次的測定值與均值之差大于或等于2.75倍的標準差時，該次測定值應予剔除（為外圍

11、值）。其余數據再重新計算。5.2 設定控制限對新批號質控品應確定控制限，控制限通常以標準差倍數表示。5.2.1 穩定性較長的質控品5.2.1.1 暫定標準差的設定為了確定標準差，新批號的質控品應與當前使用的質控品一起進行測定。根據20或更多獨立批獲得的至少20次質控測定結果，計算出標準差，并作為暫定標準差。以此暫定標準差作為下一個月室內質控圖的標準差進行室內質控；一個月結束后，將該月的在控結果與前20次質控測定結果匯集在一起，計算累積標準差（第一個月），以此累積的標準差作為下一個月質控圖的標準差。重復上述操作過程，連續三至五個月。5.2.1.2 常用標準差的設定以最初20次質控測定結果和三至五

12、個月在控質控結果匯集的所有數據計算的累積標準差作為質控品有效期內的常用標準差，并以此作為以后室內質控圖的標準差。5.2.2 穩定性較短的質控品至于標準差，使用的數據量越大，其標準差估計值將更好。由于這個原因，不推薦使用5.2.1中的重復數據來建立新的標準差。而是采用以前變異系數（CV）來估計新的標準差。以前的標準差是幾個月數據的簡單平均或甚至是累積的標準差。這就考慮了檢測過程中更多的變異。標準差等于5.2.1的平均數乘以以前變異系數（CV）。5.2.3 控制限的設定控制限通常是以標準差的倍數表示。臨床實驗室不同項目（定量測定）的控制限的設定要根據其采用的控制規則來決定。5.3 特殊情況的處理（

13、Grubbs氏法）對于某些不是每天開展的項目、有效期較短的試劑盒的項目，用上述方法計算獲得平均數和標準差有很大的難度。采用Crubbs氏法，只需連續測定3次，即可對第3次檢驗結果進行檢驗和控制。具體計算方法如下：（1）計算出測定結果（至少3次）的平均值（x）和標準差（s）。（2）計算SI上限值和SI下限值：SI上限=（x 最大值 x）/sSI下限=（x - x最小值）/s（3）查表3，將SI上限 和 SI下限 與SI值表中的數值進行比較。表3 SI值表Nn3sn2snn3sn2s31.151.05122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.376

14、1.941.82152.702.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56當SI上限和SI下限 值 n2s 時，表示處于控制范圍之內，可以繼續進行測定，并重復以上計算；當SI上限 和 SI下限 有一值處于n2s 和 n3s 值之間時，說明該值在2s 3s范圍，處于“警告”狀態；當SI上限 和 SI下限有一值 n3s 時，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數字處于“警告”和“失控”狀態應舍去，重新測定該項質控品和病人樣本。舍去的只是失控的

15、這次數值，其它次測定值仍可繼續使用。當檢測的數字超過20次以后，可轉入使用常規的質控方法進行質控。5.5 更換質控品擬更換新批號的質控品時，應在“舊”批號質控品使用結束前與“舊”批號質控品一起測定，重復5.1和5.2的過程，設立新的靶值和控制限。5.5 繪制質控圖及記錄質控結果根據質控品的靶值和控制限繪制Levey-Jennings控制圖（單一濃度水平），或將不同濃度水平繪制在同一圖上的Z-分數圖，或Youden圖。將原始質控結果記錄在質控圖表上。保留打印的原始質控記錄。5.6 質控方法（規則）的應用將設計的質控規則應用于質控數據，判斷每一分析批是在控還是失控。常用以下質控規則進行判斷：(1)

16、 12s 1個質控品測定值超過x±2s控制限，在臨床檢驗工作中，常作為警告界限。(2) 13s 1個質控品測定值超過x±3s控制限,判定控制失效。(3) 22s 2個連續的控制品測定值同時超過x+2s或x-2s控制限，提示系統誤差。(4) R4s 在同一批內質控品中，最高測定值和最低測定值之間的差值超過4s，提示嚴重隨機誤差。(5) 41s 4個連續的控制品測定值同時超過x+s或x-s,提示系統誤差。(6) 10x 10個連續的控制品測定值落在均值的一側，提示系統誤差。5.7 失控情況處理及原因分析5.7.1 失控情況處理操作者在測定質控時，如發現質控數據違背了控制規則，應

17、填寫失控報告單，上交實驗組主管（組長），由實驗組主管（組長）做出是否發出與測定質控品相關的那批患者標本檢驗報告的決定。5.7.2 失控原因分析失控信號的出現受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、試劑、校準物、質控品的失效，儀器維護不良以及采用的質控規則、控制限范圍、一次測定的質控標本數等等。失控信號一旦出現就意味著與測定質控品相關的那批病人標本報告可能作廢。此時，首先要盡量查明導致的原因，然后再隨機挑選出一定比例（例如5%或10%）的患者標本進行重新測定，最后根據既定標準判斷先前測定結果是否可接受，對失控做出恰當的判斷。對判斷為真失控的情況，應該在重做質控結果在控以后，對相應的所有失控患

18、者標本進行重新測定。如失控信號被判斷為假失控時，常規測定報告可以按原先測定結果發出，不必重做。當得到失控信號時，可以采用如下步驟去尋找原因：（1）立即重測定同一質控品。此步是主要是用以查明人為誤差，每一步都認真仔細得操作，以查明質控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測的結果應在允許范圍內（在控）。如果重測結果仍不在允許范圍，則可以進行下一步操作。（2）新開一瓶質控品，重測失控項目。如果新開的質控血清結果正常，那么原來那瓶質控血清可能過期或在室溫放置時間過長而變質，或者被污染。如果結果仍不在允許范圍，則進行下一步。（3）進行儀器維護，重測失控項目。檢查儀器狀態，查明光源是否需要更換，比色杯是否需要清洗或更換？對儀器進行清洗等維護。另外還要檢查試劑，此時可更換試劑以查明原因。如果結果仍不在允許范圍，則進行下一步。（4）重新校準，重測失控項目。用新的校準液校準儀器，排除校準液的原因。（5）請專家幫助。如果前五步都未能得到在控結果，那可能是儀器或試劑的原因，只有和儀器或試劑廠家聯系請求他們的技術支援了。6. 室內質控數據的管