1、血細胞直方圖血細胞直方圖檢驗科檢驗科 馬燕馬燕血細胞計數原理一、電阻抗法 庫爾特原理(亦稱：電阻法、電脈沖法與電感應區技術)：懸浮在電解液中的顆粒隨電解液通過小孔管時，取代相同體積的電解液，在恒電流設計的電路中導致小孔管內外兩電極間電阻發生瞬時變化，產生電位脈沖。脈沖信號的大小和次數與顆粒的大小和數目成正比。p與等滲電解質溶液相比，血細胞為不良導體，與等滲電解質溶液相比，血細胞為不良導體，血細胞電阻值血細胞電阻值 稀釋液的電阻值稀釋液的電阻值p血細胞通過檢測器小孔管微孔的孔徑感受器區時，檢測器內外電極之間的恒流源電路上血細胞通過檢測器小孔管微孔的孔徑感受器區時，檢測器內外電極之間的恒流源電路上

2、電阻值瞬間增大，產生一個電壓脈沖信號。電阻值瞬間增大，產生一個電壓脈沖信號。脈沖信號數脈沖信號數= =細胞數細胞數小孔管： 電阻抗法細胞計數的一個重要組成部分。 當電流接通，位于小孔兩側的電極產生恒定電流。若供給的阻抗是穩定的，則小孔的電壓不變。 當有一個細胞通過小孔時，電阻會增加，瞬間引起電壓變化，即“通過脈沖”細胞體積越大，脈沖振幅越高；細胞數量越多，脈沖數量越多 各種大小不同細胞產生的脈沖信號分別送入儀器內電腦的各個通道，運算各種大小不同細胞產生的脈沖信號分別送入儀器內電腦的各個通道，運算出各種細胞參數。出各種細胞參數。 細胞群體大小分布情況的圖形，就成為細胞群體大小分布情況的圖形，就成

3、為“細胞體積直方圖細胞體積直方圖”脈沖信號經過以下步驟，得出細胞計數：信號發生信號發生：各種微粒通過檢測小孔時，“信號發生器”產生脈沖信號放放 大：大： 將血細胞產生的微弱脈沖信號，通過“放大器”放大閾值調節：閾值調節： “閾值調節器”在一定范圍內調節參考電平的大小，能區分不同群細胞合適的信號電平，使計數結果盡可能符合實際甄甄 別：別：利用“甄別器” ，根據閾值調節器提供的參考電平，將低于參考電平的假信號（細胞碎片、雜質微粒）去掉整整 形：形：通過“整形器” ，將脈沖信號波形修整成一致標準的平頂波，顯示為不同類群的細胞數計計 數：數：經過以上步驟偶，進入“計數系統” ，得出結果電阻抗法可精確測

4、出細胞（或類似顆粒）大小，是三分類的主要應用原理，也與光學檢測原理，共同應用于五分類血細胞分析儀中。p 儀器將每個細胞的脈沖根據其體積大小分配并儲存在相應體積通道中，每個儀器將每個細胞的脈沖根據其體積大小分配并儲存在相應體積通道中，每個通道收集的數據被統計出：相對數，表示在通道收集的數據被統計出：相對數，表示在Y Y軸上；體積，表示在軸上；體積，表示在X X軸上。軸上。p 白細胞體積從白細胞體積從30-450fl30-450fl分為分為256256個通道，每個通道個通道，每個通道1.64fl1.64fl，依據體積大小分，依據體積大小分別放在不同通道中，得出直方圖。別放在不同通道中，得出直方圖。

5、第一群：小細胞群，第一群：小細胞群， 主要為淋巴，主要為淋巴， 體積體積35-90fl35-90fl第二群：中間細胞群，主要為單核，第二群：中間細胞群，主要為單核， 體積體積90-160fl90-160fl第三群：大細胞群，第三群：大細胞群， 主要為中性粒，體積可主要為中性粒，體積可160fl160flPlat和RBC共用一個孔管。u 正常人RBC體積和Plat體積有明顯的界限，因此Plat計數準確容易。u 當血細胞懸液中含有異常血細胞(如小RBC）時，則劃分界限不清。 為使Plat計數有較高的準確性，計算機對Plat和RBC分布圖進行判斷，將PlatPlat計數的上限閾值判定線放在計數的上限

6、閾值判定線放在RBCRBC和和PlatPlat分布圖交叉部分的最低處計數分布圖交叉部分的最低處計數。白細胞直方圖白細胞直方圖p 三分類血球儀一般以電阻抗原理進行三分類血球儀一般以電阻抗原理進行WBCWBC分類。分類。p 依據大多數正常形態的依據大多數正常形態的WBCWBC在溶血素作用后在溶血素作用后的大小排列，人為設置的大小排列，人為設置4 4個鑒別線，個鑒別線，將直方圖分為三個區域。將直方圖分為三個區域。 計數計數WBCWBC時，加入溶血素，使時，加入溶血素，使RBCRBC破壞，而破壞，而WBCWBC膜受到破壞后胞漿流失，膜受到破壞后胞漿流失，WBCWBC體體積大小發生變化。因此積大小發生變

7、化。因此，WBCWBC直方圖上細胞排列順序不是細胞的原始大小，而直方圖上細胞排列順序不是細胞的原始大小，而是經溶血液修飾后的細胞大小是經溶血液修飾后的細胞大小。電阻抗原理：血細胞非導電性質，懸浮在電解質溶液中的血細胞顆粒，通過檢測小孔時，引起電阻的變化，從而對血細胞計數和分類加入溶血素前的細胞大小加入溶血素前的細胞大小加入溶血素后的細胞大小加入溶血素后的細胞大小一、設置鑒別線：一、設置鑒別線： 低鑒別線(LD)：自動尋找自動尋找30-60fl30-60fl之間最適位置 高鑒別線(UD)：定在定在300fl300fl，用作粒度分布異常監視 鑒別線1(T1):自動尋找自動尋找從LDUDLDUD之間

8、之間WBCWBC分布曲線的波谷分布曲線的波谷，第一波谷值設為“TROUGH”T1 鑒別線2(T2):自動尋找自動尋找從LDUDLDUD之間之間WBCWBC分布曲線的波谷分布曲線的波谷，第二波谷值設為“TROUGH”T2儀器是如何分類儀器是如何分類WBC? 報警信息列表報警信息列表WL：LD的相對度數規定值，可能 存在Plat聚集？較多巨大Plat?WU：UD的相對度數規定值，可能 溶血不充分？較多異常細胞？ T1：當第一谷值不能決定時T2：當第二谷值不能決定時F1：小WBC分布異常。T1的相對度數規定值F2：中WBC分布異常。T1或T2的相對度數規定值F3：小WBC分布異常。T2的相對度數規定

9、值2 2、監視、監視WBCWBC粒度分布的情況，提供異常分布信息粒度分布的情況，提供異常分布信息p分布正常時，直方圖為三峰性分布，在LD、UD之間有兩個谷值T1和T2p當各值鑒別線不能設定，或在設定的鑒別線位置的度數比規定值高時，將標有WBC粒度分布的異常報警。二、鑒別線作用：二、鑒別線作用：1 1、對正常形態的、對正常形態的WBCWBC進行粒度分類進行粒度分類 LDT1：為W-SCR%，相當于LYM% T1T2：為W-MCR%，相當于MEX%(M、E、B） T2UD：為W-LCR%，相當于NEUT%1.3. LD度數高，無度數高，無T1、T2： WBC有結果，但標有報警“WLWL”。 其余結

10、果無，報警“WLWL”。 1.1. LD度數高：度數高： 所有結果都有，但標報警“WLWL”。 常見于：存在RBC溶血不全？有核RBC？大Plat增多？Plat聚集?纖維蛋白析出？1.2. LD度數高、無度數高、無T2： WBC、L%、L#有結果，但標有報警“WLWL”。 其余結果無，報警“WLWL”。 無T2：不能設定中間細胞與中性粒細胞之間的波谷鑒別線 常見于：幼稚粒細胞？RBC溶血不全？標本放置時間過長？WL LD的相對度數規定值1.4. 黃疸病人的特征性改變：黃疸病人的特征性改變： 黃疸病人RBC膜上脂質含量增多，蛋白質含量減少，對溶血素的拮抗作用增加，RBC難于破碎WL：LD的相對度

11、數規定值2. 無無T1、無、無T2： WBC數無報警，但WBC分類結果無,且報警“T1T1” 常見于：幼稚粒細胞？RBC溶血不全？T1T1 T1相對度數規定值,第一谷值不能決定 WBC數無報警，L%、L#結果報警“F1F1”，其余結果無，且報警“T2T2” 常見于：幼稚粒細胞？M增多？E增多？B增多？RBC溶血不全？標本放置時間過長？ T2T2 T2相對度數規定值 第二谷值不能決定F1F1 T1相對度數規定值 小WBC群分布異常3.1. T1高、無高、無T2： WBC數、L%、L#無報警，其余結果無，報警“T2T2”3.2. 僅僅T1高：高： WBC數、N%、N#有結果，無報警； L%、L#結

12、果報警“F1F1”， M%、M#結果報警“F2F2”3.3. 僅僅T2高：高： WBC數、L%、L#有結果，無報警； M%、M#結果報警“F2F2”、N%、N#結果報警“F3F3” 3.4. T1、T2都高都高：WBC數報警“WUWU” ；L%、L#結果報警“F1F1”， M%、M#結果報警“F2F2” ； N%、N#報警“F3F3” 常見于：原始細胞？幼稚粒細胞？常見于：原始細胞？幼稚粒細胞？M M增多？增多？E E增多？增多？B B增多？增多？RBCRBC溶血不全？標本放置時間過長？溶血不全？標本放置時間過長？ F1F1 T1相對度數規定值 小WBC群分布異常F2F2T1或T2相對度數規定

13、值中WBC分布異常F3T2的相對度數規定值大WBC分布異常4. LD高、高、UD高：高： LD高：Plat值標有報警“AGAG” UD高：WBC報警“WUWU”,其余結果無報警 常見：溶血不充分?Plat聚集？異常細胞？WU UD的相對度數規定值小結小結一、一、“結果不輸出結果不輸出”原因分析：原因分析： T1負責監視淋巴區域和中間細胞區域 T2負責監視中間區域和中性粒區域 當WBC粒度分布曲線異常，儀器找不到谷底T1和/或T2時，T1、T2負責監視的細胞群結果就不輸出。二、二、“WBCWBC直方圖異常直方圖異常”原因分析原因分析1 1、病理因素：、病理因素： 直方圖的變化，可反映血液中WBC

14、群體的變化，但無特異性。引起血液學變化的病 因很多，但其直方圖變化是相近的。因此，出現提示報警出現提示報警，就是給檢驗師命令，要求我們進行鏡進行鏡檢復核檢復核。2 2、非病理因素：、非病理因素： 1 1）儀器因素：）儀器因素：凡影響細胞脈沖信號影響細胞脈沖信號的因素，都可以使直方圖發生變化血細胞自身體積、儀器的閾值、孔電壓、脈沖的增益 2 2）試劑因素）試劑因素：試劑性能好壞直接影響直方圖，因此，應使用配套試劑 稀釋液的電導率、滲透壓、離子強度 溶血劑的種類、濃度、用量、溶血時間： 抗凝劑的種類、濃度：EDTAK2 1.5-2.2mg抗凝1ml全血 3 3）樣本放置時間：）樣本放置時間：一般認

15、為樣本采集后樣本采集后2020分鐘分鐘2h2h內檢測內檢測。 過短，可能存在Plat未完全解離，抗凝劑未完全溶解等； 過長，則細胞變形，特別是免疫功能亢進的病人，其淋巴細胞容易變成異型淋巴，從而影響直方圖變形。紅細胞直方圖紅細胞直方圖紅細胞直方圖紅細胞直方圖p 分析范圍：36-360flp 正常正常RBCRBC主要分布在50-200fl50-200flp 直方圖上可見兩個細胞群： 50 - 150 fl 幾乎兩側對稱、較狹窄、正態分布; 125 - 200 fl 大RBC和Ret p 分類規則（按體積）： 在RLRU之間分析 RBC RLRL Plat和RBC的分界線。可反映出小小RBCRBC

16、、大、大Plat Plat 、血小板簇、血小板簇 RURU 可反映出RBCRBC聚集聚集RL與直方圖交點高：與直方圖交點高： 電子噪聲干擾、破碎電子噪聲干擾、破碎RBCRBC、大、大PlatPlat增多、增多、PlatPlat聚集聚集 MCV MCV 高高 MCHC MCHC 低低 RDW RDW 高高RU與直方圖交點高與直方圖交點高 DW：相對度數：相對度數20%處的鑒別線與直方圖曲線交點增高處的鑒別線與直方圖曲線交點增高 RURU：電子噪聲干擾、冷凝集素干擾、：電子噪聲干擾、冷凝集素干擾、WBCWBC極度增高極度增高DW: RBCDW: RBC明顯大小不均明顯大小不均 MCV MCV 高高

17、 MCHC MCHC 低低 RDWRDW無法得出無法得出RBC曲線跨度大曲線跨度大 ： 小小RBCRBC干擾干擾? ?曲線不光滑：曲線不光滑：抬尾抬尾 RDW: RDW:明顯增高明顯增高 Plat: Plat:報警報警PL PL PDW: PDW: 報警報警DWDW MPV: MPV: 報警報警PL PL 無法測出無法測出RBCRBC大小不均大小不均RBCRBC大小不均大小不均主峰位于主峰位于65fl: 小小RBC MCV: MCV: 低低 MCH: MCH: 低低 MCHCMCHC：低：低 RDWRDW： 輕度增高輕度增高抬尾、不與橫坐標重合、浮動界標抬尾、不與橫坐標重合、浮動界標PU在在2

18、0fl定位：小定位：小RBC出現出現 缺鐵性貧血缺鐵性貧血RBC外觀無異常外觀無異常雙峰雙峰 ： 接受貧血治療、輸血，出現多種大小的接受貧血治療、輸血，出現多種大小的RBCRBC群群 MCHC MCHC：低：低 RDW: RDW: 高高 報警報警MPMP治療治療2w后（輸血、鐵劑）：雙峰后（輸血、鐵劑）：雙峰 MCV: MCV: 低低 MCH: MCH: 低低 MCHCMCHC：低：低 RDWRDW： 高高 報警報警MPMP治療治療4w后：雙峰，但以正常后：雙峰，但以正常RBC為主為主 MCV: MCV: 低低 MCH: MCH: 低低 MCHCMCHC：低：低 RDWRDW： 高高 報警報警

19、MPMP缺鐵性貧血治療后缺鐵性貧血治療后無無T2： 出現連續體積大小的細胞出現連續體積大小的細胞 RBC : RBC : 低低 Hb: Hb: 低低 HCTHCT： 低低 MCVMCV： 高高 WBC WBC：高：高 M M: 無法得出無法得出 報警報警T2 T2 N N: 無法得出無法得出 報警報警T2 T2 曲線右移曲線右移 大細胞性貧血：大細胞性貧血： 大細胞性貧血（大細胞性貧血（CMLCML）血小板直方圖血小板直方圖p分析范圍：2-30flp正常Plat直方圖： 左偏態左偏態，主要分布在2-15fl2-15flp 3 3條鑒別線條鑒別線： 2條固定鑒別線： PL：2-6fl; PU:12-30fl 1條浮動鑒別線：12flpRBC分析范圍：36-360fl p 對于和Plat大小相似的細胞大小，成為“非Plat顆粒”，包括小RBC、RBC碎片、WBC碎片、細菌、真菌、免疫復合物，誤認為Plat，使得假性增高假性增高；p 對于聚集的Plat因體積增大，而不歸類為Plat，使得假性減低假性減低 PU