1、XXXXXX 醫院檢驗科免疫室 分析項目作業指導書Elecsys E 170/E 411腦利鈉肽前體(proBNP)文件編號：LAB OP- MY020第1頁，共6頁版差A/0生效日期：2008-02-011. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程18分鐘完成。 第1步：201d標本、生物素化的抗腦利鈉月t前體單克隆抗體和釘(Ru)標記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體混勻，形成夾心復合物。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應結合到微粒上。 第3步：反應混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結合的物質被清洗液洗去，電極加電壓后產生化學發光，

2、通過光電倍增管進行測定。Elecsys自動將標本產生的光電信號與從腦利鈉肽前體定標液得出的Cutoff值相比較。2. 標本要求血清：按標準常規方法采集或用含有分離膠的試管。血漿：含肝素鋰或肝素胺抗凝劑。標本穩定性：20C25c穩定3天，在2 8度可穩定6天，-20oC可穩定12個月。含沉淀的標本使用前需離心；不要使用加熱 滅活的標本；標本和質控品禁用疊氮鈉防腐。標本、定標液和質控品在測定前的溫度應與室溫平衡；放入儀器后應在2小時內測定以避免蒸發的影響。標本、定標液和質控品在測定前應預溫到室溫。3. 試劑、校準品、質控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試齊I：M 鏈霉親和素包被的微粒(透明瓶

3、蓋)，1瓶，6.5ml o粒子濃度0.72mg/ml ,含防腐劑。R1:生物素化的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體(灰蓋)，1瓶，9ml,濃度1.5ug/l ,磷酸緩沖液40mmol/l , pH7.4含防腐劑。R2： Ru(bpy)32+標記的抗腦利鈉肽前體單克隆抗體(黑蓋)，1瓶，9ml。濃度高于1.7ug/ml ,磷酸緩沖液40mmol/l , pH7.4含防腐劑。校準品：Cal 1陰性定標液(白蓋)，2*1mlCal 2陽性定標液(黑蓋)，2*1ml質控品：Elecsys 腦利鈉肽前體質控品 1和2 (PreciControl Cardiac )貨號 03530477其他所需材料：Elecsy

4、s2010/cobas e 411分析儀需要：貨號 11662988, Elecsys 系統緩沖液(ProCell ) 6X380S升貨號 11662970, Elecsys 測量池清洗液(CleanCell ) 6X380毫升貨號 11930346, Elecsys 添加劑液(SysWash 1X500S升貨號 11933159, Elecsys 系統清洗液支架(Adapter for SysClean )貨號 11706802, Elecsys 2010 反應杯(Assay Cup)貨號 11706799, Elecsys 2010 吸樣頭(Assay Tip )E170/cobas e

5、601分析儀需要：貨號 12135019,Elecsys系統緩沖液(ProCell M )貨號 12135027,Elecsys測量池清洗液(CleanCell M ')貨號 03023141,Elecsys系統緩沖液/測量池清洗液預熱杯(PC/CC-Cup貨號 12102137,Elecsys反應杯 / 吸樣頭盒(AssayCups/AssayTips CombimagazineM)貨號 03023150,Elecsys廢物盒(wasteliner)XXXXXX 醫院Elecsys E 170/E 411文件編號：LAB OP- MY020檢驗科免疫室第2頁，共6頁版本：A/0分析項

6、目作業指導書生效日期：2008-02-01貨號 03027651, Elecsys 系統清洗液支架(SysClean Adapter M)各種分析儀均適用的材料貨號11298500, Elecsys系統清洗液(SysClean) , 5X 100ml系統洗液4.儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產Elecsys 2010/E 170/E 411/e 601全自動電化學發光免疫自動分析儀儀器校準：每批腦利鈉肽前體試劑盒必須用新鮮試劑和腦利鈉肽前體Cal 1,Cal 2 定標一次。另外，以下情況需要再次定標：Elecsys2010 : 一個月（同一批號試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種

7、分析儀均適用的情況：根據要求進行標定：如質控結果超出范圍時；根據規定進行多次標定。5.操作步驟（以E 170為例）5.1校準操作步驟：在編緝各項目的參數時，已經在 Application Calib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時，只需在定標菜單 Calibration 中進行即可。3.2進入Calibration Status菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據需要點單點定標（BLANK®）或兩點定標（TWCPOINT鍵）、跨距定標（SPAN!）、多點定標（FULL鍵）,再選擇其它項目進行相應選擇，最后點SAVE將定標物放入在 CalibrationCal

8、ibrator中定義好的位置，點Start,再點Start ,儀器開始定標。在 Calibration 一Status菜單中看定標結果，點Calibration Result鍵看定標結果，點Reaction Monitor 鍵看每個定標物的反應曲線。5.2樣本檢測程序：單個樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ,在Sequence No欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點 SAVE®,樣本號自動累加。批量常規標本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ,在Sequence No欄輸入起始標本號，然后

9、選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點 REPEA T輸入該批標本的最后一個標本號，點OK即可。進樣分析，將標本按在 Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內，按START®,輸入該批上機標本的起始標本號，再點START®,儀器自動開始推架檢測標本。6.質量控制用Elecsys腦利鈉肽前體質控品1和2（PreciControl ）。質控品1和質控品2至少每24小時或每一次定標后測定一次。質控間隔期應適用于各實驗室的具體要求。檢測值應落在確定的范圍內，如出現質控值落在范圍以外，應采取校正措施。7. 計算方法儀器會自動根據Cal 1和Cal 2的測

10、定值計算Cut-off值。每一個標本的結果以有反應性或無反應性以及Cutoff指數形式（標本信號/ Cutoff ）報告。8.參考范圍從參考組的信息中得出最合適的域值125pg/ml。9.分析性能精密度嚴格按照修訂方案的NCCLSEP-5A文件規則：每天6次，1伏；E170上批內精確性，n=21。使用試劑，人血清和質控測定得到重復性。SDR CV直如下表所示：Elecsys2010/e411批內精密度總精密度XXXXXX 醫院檢驗科免疫室 分析項目作業指導書Elecsys E 170/E 411文件編號：LAB OP- MY020第3頁，共6頁版本：A/0生效日期：2008-02-01均值標準

11、差CV% 標準差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol/l人血清117520.74.670.563.2人血清235541.98.6812.4人血清31068126人血清4496258686.910.31.811413.52.3proBN艱控143451.27.690.911.8proBN艱控2678180011813.91.814617.22.2E170批內精密度總精密度均值標準差CV%標準差標準差CV%pg/mlpmol/lpg/mlpmol/lpg/mlpmol

12、/lpg/mlpmol/l人血清147455.94.330.510.949458.328.73.395.8人血清2800594585101.1782792432137.884.1人血清3136821614118.513.980.913143155149057.83.7proBN艱控120825.51.740.210.820023.68.951.064.5proBN艱控23786447114.513.534002472144173.6分析靈敏度5pg/ml（0.6pmol/L）分析靈敏度只能區分空白與最低限。功能靈敏度50pg/ml （5.9pmol/L）功能靈敏度指NT-proBNP僉測在Cf

13、y20%寸的最低限。分析特異性Elecsys proBNP檢測時，對于下列物質無交叉反應10 .干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素35mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.4g/dl ）、脂血（脂質4000mg/dl）和生物素30ng/ml干擾；接 受高劑量生物素（5mg慶）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時后才能采血；不受類風濕因子干擾（1500U/ml）; proBN琳度在300,000ng/ml以內無鉤狀效應；在51種常用藥上進行體外測試，未發現干擾。測試品和少數血清間潛在免疫相互作用引起的干擾風險已通過合適的添加劑降到最小。極少情況下，由極高濃度 Streptavidin 和ruthe

14、nium引起的干擾可發生。ProBN哈添加劑減小這些影響。11 .臨床意義左心室功能不全發生在冠心病，動脈高血壓，瓣膜疾病，原發性心臟病等疾病之后。如果左心室功能不全得不到治療或進展，由于心臟猝死的原因，其潛在的死亡率較高。慢性心功能不全是由心臟泵功能受損引起的臨床綜合征。可以根據臨床癥狀 進行分級。如：紐約心臟協會（NYHA分級為I, II , III , IV。臨床檢測及影像檢測用于診斷左心室功能不全。利鈉肽類物質 在心血管系統功能的控制中的意義已經得到證實。早期的研究顯示利鈉肽類物質可用于診斷與左心室功能不全相關的疾病。該類物質如下列：心鈉肽（ANP ,腦鈉肽（BNP , C-型利鈉肽（

15、CNP o ANPBNP通過其促尿鈉排泄、利尿的作用，以及作為 腎素-血管緊張素-醛固酮的拮抗物質，從而影響人體的電解質 -體液平衡。ProBN他108個氨基酸構成，主要由心室分泌。然后XXXXXX 醫院檢驗科免疫室 分析項目作業指導書Elecsys E 170/E 411文件編號：LAB OP- MY020第4頁，共6頁版本：A/0生效日期：2008-02-01被裂解為具有生物活性的BNP （77-108氨基酸）和N-端proBNP （1-76氨基酸）。Elecsys proBNP式劑含有多克隆抗體，可以識別N-端proBNP （1-76氨基酸）上的抗原決定簇。左心室功能不全的患者血清/血漿

16、中的BN膿度增高，作為BN降解產物，無生物活性的NT-proBNFW度也同樣增高。研究表明，NT-proBN阿以用于以下的診斷目的：提示左心室功能不全的預后；心源/非心源性疾病的鑒別診斷；血清/血漿NT-proBN冰平的變化，還可用于評價左心室功能不全的療效；以及心肌重塑的評估。13.參考文獻H留電士楠1. 廿一三1可丁制三Lflih y6NP 3PC MT-pr5etiF r由LpmHC斗慟 黑了巾巾小京F 口精二。reaft cih cn n Few卡.Pmitra二m"她七出匚七廠幻關 卻s d罵yxn s就工racy討a*uiy-aj3i5d mecttociVtUfnxao

17、e廣 心力 士中號 N-ierr-jraJTgtrer- or;飛 卬pepru cf物r饞加田 f甲雄h 曄mwt i3re cryuarry. ecfi.xcr *try笠卻eojs 舊c哈natru？rc 即口？ 5r口 sirs 飛tnrt” 隨b撫 cm cren g 峨 zcc*4c#>w3 pn= " 曾3 心 cf NT-rzBNP m mu甘箕ctnj ano emsroenie BS- EurJ-lear =3 2CC4 6，；軍入家4二日帆 y 曰曰+口 samn tf NT-p_cBP j'li BhP -feSBjnerr： 儂內城立泥 3 t

18、re碑cixefihj nr郭前 七匚m 花阻tttoi arc箝用里口' 仃 rta/T'alLre EurJ Hmr? Fad 20O:6.Gl;2&-e.5g"F拆r JCl： CLCrcR K ='1Pifi ire 招rES d LV ayudien cemjrryJ tadM Fa I Jie 2t0*:l0；4 ：Lpo. 4E Fjn»C 叮 st Sfdjt* !：* 三NP 泅3 NTuromiP 力 二內i用：； 仃 Peart 相口臣 Fev Pert Csnzict 二久二 2J；7,事總時i7 l-jr P. i.

19、 -tTurzrear1 arirc lei" nal rayljren： f4g imT-=10=nPi: 3r*r* -naner c（ sn:鱉 rpinenr. ctr iEcflrK：iT-二就G 'rtjjncr F力.笆 3 TTeatn'Ert cf rr taHuT ；u=e:明 F *F4 ari-ettr-n h fah istflinrc. xm iN-fiMi CCrctrfta>Tt=. Lfirc&t 2Ctt.S55.V25-33g 'rojjrrr tn er si Funs .旬rrt-飛rF v 5-T.肆

20、Fta-uri: 廿矍ty e ？l：'/：累t uwm： r i Msl ：T mirsem打巧包 -neimtri 如 ntsn Faiuf* ciiicxrr 金.也.710.建fuh 7,j, zij：ecg K er i TT EJftpai 匚“冷、前 C三；心心變 pco =i*E：r Gui Jt rt: rtr :ne cisgrtii： arfiTrywit irchRtc reat fs iur*.h髓u jouna :cci：e2 ，伯依it F.erif t 兇，Micro I： gvl vai: =G. fmpih j E：phtr 曰悵北 k al. =l

21、asTia 'JJeTrinal =f j-Era n harljnEftc XcMe *d Aoremir皿 I n h* Ne-jxrcmcriii P'W 內巾 cf 責 uierrcugr =箱丁 6 3慟 Pxcrocia 占箕 r/yotandgj irfc/con c岷u期5 J口at S7：i93V12. r* 日門口 aj. AJlsJ Mrrlurecc csr A rirrona今me defence i«529C5eT-770.俱 N G®r< A, 5a翼3梏L "4 CT悅推立仁01 Tifd門曲J2 N 仃如1叮

22、$什5m七 Fp-M ：T1 srttl 罵y J U£| Gl匕* 1 門招:fQ二4”14.1工 0 BCl J. 5W年<y拒W H9 esnge; AT Sgnn«r0?-j H. A rapd ana r” rem啪：前離饞 屹 E府ms neertor討 exiracr： i ran Ll俅 S ' 能 1 學:給荊.15. Efsien M LwiSefhlw” 4 E, RM Csrr MJF, 工地4 A Helahox-ip -3, 門二華營口 Nm二tq Altai Mn用tb F9Eyd Ren >jj ."i Hurt

23、ing h。lrrr3：ir-門二x七:：二Edrs ":電）$ ?ni in htci-ta I-L-13UCln n*«r 16£7 79 '385.15. -K>e EuraMsn Ccct -/ MF門勘，EITLT'號號 AC Tm Miesct佬迷:，m犯：3 卯達I： Eu rmarr博打工三強鏘17. MjTPJ FIdisx: am. Nncs VG,。九如？用 E2eE?一門J"i二nei?t歸 irrnritnri 丁：-yal三*1庭-1環Fw ：r*7-pnOBN-& '- rrir+EMr

24、ara: mparteiLc n Ercccfln；1二優XXXXXX 醫院Elecsys E 170/E 411文件編號：LAB OP- MY020第5頁，共6頁版本：A/0生效日期：2008-02-01二，-.7.- :，"二 二 1二.f.F =i-r-r ?=. N; I Pl.-ri N4*rmina- pro-arain natiiuiecic piptide and the ECG rn the assessment M I針-"中說陽。1寸 的寸Hk爪 a high riskpopdabwi EuHtirt J 19990:1736*1744.19 . As

25、her C. et al. MT pr&BNP Predicts Prognosis in Patients with Chronic Fteart Railufe. Heart 200339:879*8120 James SK. et al. NT pcoBNP and cttier Risk for the Separate Prediction of Mortality and S此eequenl Mccarcial Har廿ion in Patients with IhEtable Coronary Artery Disease GUSTO IV Siibsludy. Circ

26、ulation 2OG3j0a：275-2&l21 DaibarD. Davidson MCh Giltespe N, Oioy A4U. Lang CC, S+vr Y.etal. Diagnostic 咐Iue oi B-7ype Hatriire伍 Peptide Concefltralions in Patients With Acute Myocardal Infarcban. A J Candiol l996;7B-564-2fl7.22 . Mcorrag TA, Robb SO, Murdoch DR, Morton JJF Ford I, Morison CE. et ai. Biccnemical detect on 4 eft-venfriculaF systolic dnf'stjrc：i<jfl Lancet 1990.35l:&-13.23 veoKT et 1, Muticenfer evaluion or te Roche NT'ptoBNF atsay 三nd compui&on Io :hs G oei:& Tnigfi BMP as&sy Clr Chim Acta 2003,338:107-115.倒.C