1、方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究新方法: “藥效差示血清色譜法” 08-10-13 09:37:00 編輯：studa20 作者：喬逸，文愛東，楊志福，肖芬 【摘要】 中藥現(xiàn)代化研究是促進(jìn)中醫(yī)藥國際化進(jìn)程的重要途徑,制約中藥現(xiàn)代化研究的瓶頸之一是方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究. 迄今仍然沒有一個方劑、甚至沒有一味中藥能被闡明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，阻礙方劑藥效物質(zhì)研究的關(guān)鍵問題在于缺乏行之有效的研究策略和方法，我們在前人研究基礎(chǔ)上提出方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究新觀點(diǎn)，即“藥效差示血清色譜法”，在此方法的指導(dǎo)下研究方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，希望藥效差示血清色譜法的應(yīng)用能進(jìn)一步闡明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對中醫(yī)藥現(xiàn)代化及天然藥物的研究有所裨益. 【關(guān)鍵

2、詞】 方劑；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)0 引言 方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是以藥物化學(xué)與藥理學(xué)為基礎(chǔ)，分析方劑有效部位及有效成份,建立對其質(zhì)量控制的方法和標(biāo)準(zhǔn)；并且為提示中藥復(fù)方配伍規(guī)律、優(yōu)化處方組成、改進(jìn)制劑工藝、提高質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，為闡明中藥及其復(fù)方的作用機(jī)制和代謝過程奠定基礎(chǔ). 方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究目的是以實(shí)現(xiàn)開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新中藥新藥、促進(jìn)中藥臨床療效為新靶標(biāo),為推動中藥現(xiàn)代化、國際化進(jìn)程奠定基礎(chǔ). 現(xiàn)對已取得研究進(jìn)展的思路、方法及學(xué)說進(jìn)行論述,并在此基礎(chǔ)上提出研究藥效物質(zhì)的新思路：“藥效差示血清色譜法”.1 取得一定進(jìn)展的方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究思路和學(xué)說1.1 方劑整體研究 羅國安1提出中藥方劑

3、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究應(yīng)采用“一個結(jié)合、兩個基本講清、三個化學(xué)層次、四個藥理水平”的理論研究體系. 結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)方法和先進(jìn)的分析儀器闡明中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ). 具體方法是將中藥方劑作為一個研究整體，采用現(xiàn)代分離技術(shù)，分離性質(zhì)相近的化合物群(如皂甙類、黃酮類、生物堿類等)，這些化合物群即有效部分，是方劑所有藥物含某類化合物的總合. 劉建勛等2研究認(rèn)為中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)是中醫(yī)證與病相結(jié)合的有效成分，其研究思路是在中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代醫(yī)藥理論的共同指導(dǎo)下，以臨床療效為基礎(chǔ)，建立動物、器官和細(xì)胞模型深入研究，最終闡明中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ). 目前對單味中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，故復(fù)方研究較為緩慢.1.2 方劑的拆方研

4、究 方劑拆方研究目的在于精簡方劑、尋找發(fā)揮增效減毒作用的最佳藥物組合及確定方劑中主要藥物或活性物質(zhì)來源. 劉永剛等3對麻黃湯進(jìn)行拆方研究，考察各配伍對嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的抑制作用，采用體外實(shí)驗(yàn)觀察致敏小鼠抗原攻擊后肺灌洗液（BALF）和外周血中的嗜酸性粒細(xì)胞聚集反應(yīng)，采用離體試驗(yàn)觀察致敏大鼠抗原攻擊后腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng). 結(jié)果顯示： 麻黃湯及拆方減少BALF和外周血嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤不完全相同；麻黃湯及拆方也不同程度抑制致敏大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng). 說明麻黃湯對嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞具有抑制作用，拆方分析顯示麻黃湯全方效果最佳. 給大鼠腹腔注射糖原誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞聚集，分離中性粒細(xì)胞

5、，以花生四烯酸、實(shí)電解質(zhì)鈣刺激離體中性粒細(xì)胞釋放白三烯，再用HPLC法測定中性粒細(xì)胞中白三烯量，并以二甲苯致小鼠耳腫脹研究麻黃湯及拆方的抗炎作用. 結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 麻黃湯及拆方不同程度抑制二甲苯致小鼠耳腫脹和中性粒細(xì)胞釋放白三烯. 拆方分析顯示麻黃湯全方效果最佳，初步驗(yàn)證組方的科學(xué)性和合理性4. 拆方可以驗(yàn)證方劑配伍的一定合理性及優(yōu)缺點(diǎn)，優(yōu)化組方，為尋找真正的藥效物質(zhì)提供相應(yīng)依據(jù).1.3 方劑有效部位藥效物質(zhì)研究 方劑由多味中藥組成，即有多種藥用部位，一種有效部位中有多種藥用成分，同樣可以利用各種現(xiàn)代篩選模型和篩選技術(shù)，發(fā)現(xiàn)23種不同作用的有效部位和每種有效部位中的23種有效成分. 以此為基礎(chǔ)，可

6、以進(jìn)一步在有效部位和有效成分2個層次上以一種藥理作用為主要因素，研究部位間或成分間或部位與成分間的相互促進(jìn)或相互抑制的協(xié)同關(guān)系，初步闡明現(xiàn)代中藥不同與西藥而發(fā)揮綜合治療作用的機(jī)制5. 黃兆勝等6-7用極性由小到大的4種有機(jī)溶劑依次萃取當(dāng)歸補(bǔ)血湯水煎液，所得各部位給饑餓性氣虛模型小鼠灌胃，以T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為指標(biāo)，探討發(fā)揮益氣功效的有效部位；給急性失血性血虛模型小鼠灌胃，以Hb為指標(biāo)，探討發(fā)揮補(bǔ)血功效的有效部位. 結(jié)果證明全方益氣的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)主要存在正丁醇與水層的極性區(qū)間，可能主要是黃芪多糖、苷類及當(dāng)歸水溶性物質(zhì)；補(bǔ)血藥效物質(zhì)基礎(chǔ)主要存在于正丁醇與醋酸乙酯的極性區(qū)間，可能主要是黃芪的苷類、苷元

7、及當(dāng)歸的酚性物質(zhì)等. 此方法揭示了一些中藥的藥用部位，藥效物質(zhì)研究尚處于探索之中.1.4 中藥血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)研究 中藥血清藥理學(xué)主要針對中藥及其復(fù)方復(fù)雜多樣的化學(xué)成分特點(diǎn)，用含藥血清代替煎劑或粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)研究藥效物質(zhì)基礎(chǔ). 莫紅纓等8采用中藥血清藥理學(xué)研究方法，觀察含雙黃連及其拆方的大鼠血清對抗呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用. 結(jié)果顯示雙黃連復(fù)方具有明顯抗RSV的作用，并優(yōu)與各拆方；復(fù)方及拆方的體外和血清藥效學(xué)結(jié)果具有一定的相關(guān)性. 可知雙黃連組方合理，并具有多環(huán)節(jié)抗RSV的作用. 血清藥物化學(xué)主要是發(fā)現(xiàn)并觀測血清中外源性生物活性物質(zhì)以及這些物質(zhì)的作用和代謝規(guī)律. 王喜軍等

8、9-10建立了六味地黃丸及其大鼠口服(po)后在血清中的HPLC指紋色譜，分析比較六味地黃丸、缺味處方、單味生藥以及各組分給藥后所得血清樣品，鑒定po六味地黃丸后大鼠血中移行成分、來源生藥及其代謝產(chǎn)物. 結(jié)果顯示po六味地黃丸后從血中發(fā)現(xiàn)了11個入血成分，其中4個為新產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物；7個成分為六味地黃丸所含成分的原型，其中有一成分雖為地黃中所含成分的原型，但其他兩種藥材也能代謝產(chǎn)生，對其體內(nèi)的量變有共同的貢獻(xiàn)，在此基礎(chǔ)上成功分離8個化合物,并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定,這些都將有助于闡明六味地黃丸的有效成分及作用機(jī)制. 血清藥理學(xué)與血清藥物化學(xué)是日本學(xué)者20世紀(jì)提出的方法，對于研究藥效物質(zhì)有積極意義，

9、對于我們提出新的研究方法起到拋磚引玉的作用.1.5 中藥“藥效團(tuán)藥性假說” 李愛秀11在李石生等人的中藥“分子藥性假說”基礎(chǔ)上提出“藥效團(tuán)藥性假說”，主要論點(diǎn)是： 分子具有藥效，其藥性是有規(guī)律的. 藥物分子的藥性蘊(yùn)含在藥物分子的特定結(jié)構(gòu)中，“特定結(jié)構(gòu)”指藥物分子與某個受體產(chǎn)生相互作用時所具有的“藥效團(tuán)”；中藥所含有效成分具有分子多樣性和藥效團(tuán)多樣性特點(diǎn). “分子多樣性”指中藥中所含化學(xué)成分的多樣性，眾多化學(xué)成分中作用相近或相同的分子具有相同的藥效團(tuán)，作用不同的分子具有不同的藥效團(tuán)，分子多樣性是產(chǎn)生藥效團(tuán)多樣性的前提；中藥藥性多樣性及其多靶點(diǎn)作用機(jī)制. 中藥有效成分所含藥效團(tuán)的多樣性，決定了中藥

10、對肌體作用的多靶點(diǎn)作用機(jī)制. 中藥“藥效團(tuán)藥性假說”的意義在于從分子水平上揭示中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)產(chǎn)生療效的作用機(jī)制.1.6 “分子中藥組學(xué)” 馬增春等12提出“分子中藥組學(xué)”學(xué)說，認(rèn)為中藥復(fù)方是通過化學(xué)成分組合影響信號分子組合，使紊亂的信號分子網(wǎng)絡(luò)恢復(fù)平衡，從而起到治療中醫(yī)的“證”和相關(guān)疾病的作用和效果. 研究路線從構(gòu)建證候本質(zhì)圖譜“證候作用通路信號分子分子網(wǎng)絡(luò)”出發(fā)，考察中藥復(fù)方、作用部位、有效成分、成分組合等不同水平對證候本質(zhì)圖譜的影響. 分子中藥組學(xué)是從分子水平上研究中藥療效的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用原理，使傳統(tǒng)中藥從宏觀認(rèn)識向微觀世界接近. 李鷹飛等13應(yīng)用“分子中藥組學(xué)”策略研究四物湯，結(jié)果發(fā)現(xiàn)

11、: 四物湯補(bǔ)血的物質(zhì)基礎(chǔ)是多糖、川芎嗪、阿魏酸和芍藥苷，補(bǔ)血作用的分子機(jī)制是影響造血相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá). 此種方法有一定成效，但對于中醫(yī)證候信號分子認(rèn)識目前尚沒有明確定論，而用“分子中藥組學(xué)”來探討中醫(yī)機(jī)體的證候，從而確定藥效物質(zhì)還處于初步研究階段.1.7 方劑組織藥理學(xué)新假說及方劑代謝物組學(xué)新假說 唐文富等14-15方劑組織藥理學(xué)以期闡明病變靶組織內(nèi)不同中藥或方劑的主要成分譜及其濃度與靶組織病理形態(tài)學(xué)和療效的關(guān)系；方劑代謝物組學(xué)是在運(yùn)用代謝物組學(xué)理論的整體性特點(diǎn)和系統(tǒng)性思想,以中藥方劑的治療機(jī)制、作用靶點(diǎn)、療效標(biāo)準(zhǔn)、藥效和毒性模型的鑒別和確證、療效和毒性的化學(xué)或生物標(biāo)志物的科學(xué). 方劑組織藥理學(xué)和方劑代謝物組學(xué)是以中醫(yī)理論為