1、基因工程1.天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F用基因工程技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是A.提取矮牽牛藍色花的mRNA，經逆轉錄獲得互補的DNA，再擴增基因BB.利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質粒連接后導入玫瑰細胞D.將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞【解析】提取矮牽牛藍色花的mRNA，逆轉錄得到DNA，然后擴增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫中獲取目的基因，只要根據目的基因的相關信息和基因文庫中的信息進行篩選對比即可，不需要用限制酶進行切割，B

2、錯誤；目的基因與質粒的連接需要用DNA連接酶（3端、5端），而不是DNA聚合酶（DNA復制），C錯誤；目的基因需要和運載體連接后形成重組質粒再導入，而且應該用農桿菌進行感染，而不是大腸桿菌，D錯誤?！敬鸢浮緼2.將大腸桿菌的質粒連接上人生長激素的基因后，重新置入大腸桿菌的細胞內，通過發酵就能大量生產人生長激素。下列敘述正確的是A.發酵產生的生長激素屬于大腸桿菌的初級代謝產物B.大腸桿菌獲得的能產生人生長激素的變異可以遺傳C.大腸桿菌質粒標記基因中腺嘌呤與尿嘧啶含量相等D.生長激素基因在轉錄時需要解旋酶和DNA連接酶【答案】B【解析】初級代謝產物是微生物生長必需的，而人的生長激素不是大腸桿菌必需

3、的，A錯；可遺傳的變異有基因突變、基因重組和染色體變異，大腸桿菌獲得的能產生人生長激素的變異屬于基因重組，B對；基因為有遺傳效應的DNA片段，不含U，C錯；轉錄時合成mRNA不需要DNA連接酶，D錯。3.下列關于轉基因生物安全性的敘述，錯誤的是A.種植轉基因作物應與傳統農業種植區隔離B.轉基因作物被動物食用后，目的基因會轉入動物體細胞中C.種植轉基因植物有可能因基因擴散而影響野生植物的遺傳多樣性D.轉基因植物的目的基因可能轉入根際微生物【答案】B【解析】種植轉基因作物應防止對別的植物產生基因污染，所以與傳統農業種植區隔離，A正確；動物取食轉基因作物后，要經過消化吸收才進入身體，目的基因不可能直

4、接進入動物細胞，B錯；轉基因植物可能與野生植物發生雜交而出現基因交流，影響野生植物的多樣性，C正確；目的基因被微生物攝入細胞內后，可能進入這些微生物中，D正確。4.關于大腸桿菌的敘述，正確的是A.四環素能抑制細胞中蛋白質的合成B.經誘變育種可獲得人胰島素高產菌株C.細胞中只含有A、T、C、G四種堿基D.T2噬菌體感染菌體，不會導致菌體裂解【答案】A【解析】四環素通過抑制細菌蛋白質的合成從而抑制細菌繁殖，A正確；要想獲得能產生人胰島素的高產菌株，只有通過基因工程來實現，B錯；大腸桿菌細胞中含有DNA和RNA兩種核酸，含有A、G、C、T、U五種堿基，C錯；T2噬菌體感染菌體后，在菌體內大量增殖，則

5、會使菌體裂解，子代噬菌體釋放出來，D錯。5.（2012 天津）（13分）生物分子間的特異性結合的性質廣泛用于生命科學研究。以下實例為體外處理“蛋白質-DNA復合體”獲得DNA片段信息的過程圖。據圖回答：（1）過程酶作用的部位是_鍵，此過程只發生在非結合區DNA，過程酶作用的部位是_鍵。（2）、兩過程利用了酶的_特性。（3）若將得到的DNA片段用于構建重組質粒，需要過程的測序結果與_酶的識別序列進行對比，以確定選用何種酶。（4）如果復合體中的蛋白質為RNA酶聚合，則其識別、結合DNA序列位基因的_。（5）以下研究利用了生物分子間的特異性結合性質的有_（多選）。A、分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提

6、取rRNA B、用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C、通過分子雜交手段，用熒光物質標記的目的基因進行染色體基因定位D、將抑制成熟基因導入番茄，其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補結合，終止后者翻譯，延遲果實成熟【答案】（1）磷酸二酯肽（2）專一性（3）限制性核酸內切（4）啟動子（5）ACD【解析】（1）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯鍵，蛋白酶作用的部位是肽鍵。（2）過程利用了各種酶催化一種或一類化學反應的特性，即專一性。（3）DNA要構建重組質粒，需要用限制性核酸內切酶切割，再與質粒重組。（4）RNA聚合酶識別和結合在基因的啟動子上，驅動基因轉錄。（5）蛋白酶能特異

7、性的酶解蛋白質，分子雜交手段也是利用各物質分子結合的特異性，抑制成熟基因轉錄出的mRNA與催化成熟酶基因的mRNA堿基互補結合，也具有特異性，光合色素易溶于有機溶劑，與酒精并不是特異性的溶解，所以選ACD。6.毛角蛋白II型中間絲（KIFII）基因與絨山羊的羊絨質量密切相關。獲得轉KIFII基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖。（1）過程中最常用的運載工具是_，所需要的酶是限制酶和_。（2）在過程中，用_處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。在培養過程中，將成纖維細胞置于5%的氣體環境中，的作用是_。（3）在過程中，用_處理以獲得更多的卵（母）細胞。成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行_處理。（4）

8、從重組細胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術是_。在胚胎移植前，通過_技術可獲得較多胚胎?！敬鸢浮浚?）質粒DNA連接酶（2）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）維持培養液的pH（3）促性腺激素（或促濾泡素，孕馬血清）去核（4）（早期）胚胎培養胚胎分割【解析】（1）運載工具（體）包括質粒、噬菌體衍生物及動植物病毒，其中質粒是主要運載體；所需工具酶是限制酶和DNA連接酶。（2）分散皮膚組織塊成單個細胞使用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）。在動物細胞培養過程中，的作用是維持培養液pH的相對穩定。（3）要得到更多的卵（母）細胞需用促性腺激素進行超數排卵處理；成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行去核處理，以保證克隆后代的遺

9、傳性狀主要了來自供體核。（4）把重組細胞培養到早期胚胎叫早期胚胎培養技術；在胚胎移植前，通過胚胎分割技術可獲得較多胚胎。7（15分）根據基因工程的有關知識，回答下列問題：（1）限制性內切酶切割DNA分子后產生的片段，其末端類型有_和_。（2）質粒運載體用EcoR切割后產生的片段如下：為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必須具有的特點是_。（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即_DNA連接酶和_DNA連接酶。（4）反轉錄作用的模板是_，產物是_。若要在體外獲得大量反轉錄產物，常采用_技術。（5）基因工程中除質

10、粒外，_和_也可作為運載體。（6）若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是_?！窘馕觥浚?）限制性核酸內切酶可以將DNA分子切成兩種類型的末端，平末端和黏性末端。（2）兩種不同酶切割之后便于相連，所產生的黏性末端必須相同。（3）大腸桿菌連接酶可以連接黏性末端，DNA連接酶可以連接兩種末端；（4）反轉錄是以mRNA為模板逆轉錄先合成單鏈DNA，再合成雙鏈DNA，利用PCR技術進行大量擴增。（5）基因工程中可以選用質粒，噬菌體、動植物病毒做載體。（6）當受體細胞是細菌時，為了增大導入的成功率，常用Ca離子處理，得到感受態細胞，此時細胞壁和細胞膜的通透性增

11、大，容易吸收重組質粒?！敬鸢浮浚?）平末端黏性末端（2）切割產生的DNA片段末端與EcoR切割產生的相同（3）大腸桿菌（4）mRNA（或RNA）cDNA（或DNA） PCR（聚合酶鏈式反應）（5）噬菌體動植物病毒（6）未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱8、（9分）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請回答下列問題（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之

12、間依次由_連接。（2）若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是_末端，其產物長度為_。（3）若圖1中虛線方框內的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d。從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產物中共有_種不同長度的DNA片段。（4）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是_。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加_的培養基進行培養。經檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是_。【答案】（1）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖（2）平

13、537bp、790bp、661bp （3）4（4）BamH I抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向鏈接【解析】（1）DNA單鏈中相鄰兩個堿基之間通過“脫氧核糖磷酸脫氧核糖”連接。（2）Sma I識別的序列為GGGCCC，切割后會產生平末端；圖1所示的DNA分子中含有兩個Sma I的識別位點，第一個識別位點在左端534bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基對的位置，從這兩個位點切割后產生的DNA片段長度分別為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度分別為537bp、790bp和661bp。（3）在雜合子體內含

14、有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經過SmaI完全切割會產生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經過切割后會產生1327bp和 661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經過切割后會產生4種不同長度的片段。（4）能夠獲取目的基因并切開質粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的Mbo I，若使用Mbo I會同時破壞質粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I來切割目的基因和質粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質粒的大腸桿菌。因為目的基因

15、和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質粒切割后的兩個末端都能進行互補，可能出現目的基因反向連接在運載體上的情況，導致基因D不能正確表達。9.已知甲種農作物因受到乙種昆蟲危害而減產，乙種昆蟲食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質后死亡。因此，可將丙種蛋白質基因轉入到甲種農作物體內，使甲種農作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力?；卮鹣铝袉栴}：（1）為了獲得丙中蛋白質的基因，在已知丙種蛋白質氨基酸序列的基礎上，推測出丙中蛋白質的_序列，據此可利用_方法合成目的基因。獲得丙中蛋白質的基因還可用_、_方法。（2）在利用上述丙中蛋白質基因和質粒載體構建重組質粒的過程中，常需使用_酶和_酶。（3）將含有重組

16、質粒的農桿菌與甲種農作物的愈傷組織共培養，篩選出含有丙種蛋白質的愈傷組織，由該愈傷組織培養成的再生植株可抵抗_的危害。（4）若用含有重組質粒的農桿菌直接感染甲種農作物植株葉片傷口，則該植株的種子_（填“含有”或“不含”）丙種蛋白質基因?！敬鸢浮浚?5分）（1）基因化學基因文庫PCR（每空2分，共8分，其他合理答案也給分）（2）限制 DNA連接（每空1分，共2分）（3）乙種昆蟲（2分）（4）不含（3分）。【解析】（1）在已知蛋白質的氨基酸序列的情況下，可根據氨基酸和堿基的對應關系，推出合成該蛋白質的基因序列，然后用DNA合成儀通過化學方法來合成目的基因。此外也可以從基因文庫中獲取目的基因，也可通

17、過PCR方法獲取目的基因。（2）構建重組質粒時，需要用限制酶將運載體切開，并用DNA連接酶將目的基因連接到運載體上，從而構建基因表達載體。（3）愈傷組織中含有丙蛋白，說明丙蛋白的基因得到了表達，在培養成的植株體內也含有丙蛋白，乙昆蟲食用丙蛋白后會死亡，則該植株可抵抗乙昆蟲的危害。（4）直接用含有重組質粒的農桿菌直接感染甲種農作物植株葉片傷口，僅僅在該葉片內部分細胞中能合成丙蛋白，該植株的種子和其他的營養器官均不含有重組質粒，也就不含有丙中蛋白質的基因。10.肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌

18、細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。請回答：（1）進行過程時，需用_酶切開載體以插入let-7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為_。（2）進行過程時，需用_酶處理貼附在培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養。（3）研究發現，如let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2。據圖分析，可從細胞中提取_進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中_（RASmRNARAS蛋白質）含最減少引起的?！敬鸢浮肯拗菩院怂醿惹校ɑ蛳拗疲﹩幼右鹊鞍識NA RAS蛋白質【解析】（1）過程表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊