1、金線蓮抗軟腐病離體鑒定方法的研究摘要以活體噴霧法作對照，研究不同離體接種方法、不同接種濃 度以及不同葉齡對金線蓮抗軟腐病的影響。結果表明離體葉碟滴接法接種 后金線蘭和臺灣金線蓮z間病情指數差異較大，能夠比較明顯區分其抗病 性；當接種濃度為1.0x107 cfu?ml-l時，病情指數差異較明顯，能夠較 好地區分抗、感病品種；在4個月葉齡接種時，金線蘭和臺灣金線蓮間病 情指數冇一定的差異，能相對準確地反映品種間的抗性差異。采用離體葉 碟滴接法，對4個月葉齡的金線蘭與臺灣金線蓮接種濃度為1.0x107 cfu?ml-l的細菌懸浮液，放入14 h光照、28 °c培養箱中培養5 d后進行 鑒定

2、，其鑒定結果與活體噴霧法一致，可用于金線蓮抗軟腐病離體鑒定， 為金線蓮抗軟腐病的新品種選育及種質創新提供依據。關鍵詞金線蘭；臺灣金線蓮；軟腐??；離體鑒定收稿日期2013-05-14基金項目國家自然科學基金項目(81303167)；浙江省自然科學基 金項冃(ly13h280010)通信作者*胡潤淮，tel :( 0571 ) 63741273 , e-mail :hurh57163. com作者簡介邵清松，博士，副教授，主要從事藥用植物栽培與育種研究金線蓮又名金線蘭、金絲草，為蘭科開唇蘭屬多年生名貴中藥材，主 產于福建、浙江、臺灣、江西、貴州等地，具有清熱涼血、除濕解毒等功 效，用于治療糖尿病、

3、腎炎、急慢性肝炎等，在民間享有“藥王”的美稱 1-3 o金線蓮基原植物主要冇2種：金線蘭anoectochilus roxburghii 和臺灣金線蓮a. formosanus。金線蓮軟腐病是金線蓮主要病害z,山軟腐歐文氏菌黑莖病變種 eruinia carotovora var atroseptica (ilellmers et dowson) dye 弓i 起，屬于細菌性病害，主要通過昆蟲、雨水、農具等造成傷口和植株葉片 的水孔和氣孔侵染。金線蓮軟腐病一般可造成產量下降10%30%,嚴重時 可達70%80%,病癥初期表現為黑褐色斑點，猶如水漬狀，繼而擴人，危 及整張葉片，使葉片迅速軟腐，有

4、明顯汁液流，最后造成植株死亡4-5 o 國內外曾報道一些抑制軟腐歐文氏菌黑莖病變種生長的化學藥劑，如鏈霉 素、氧氯化銅、惡唾酸、30. 3%四環霉素可溶粉劑和68.8%多保鏈素(甲基 硫菌靈+鏈霉素)可濕性粉劑、代森猛、代森猛鋅，但目前為止還沒有防 治軟腐歐文氏菌黑莖病變種引起的植物軟腐病的特效藥劑4, 6。日前抗 病品種被認為是防治植物病害的有效手段，金線蓮軟腐病在抗性品種篩選 方面國內外尚未有報道。本研究對金線蓮軟腐病苗期離休接種方法及發病 條件進行研究，以期建立一套金線蓮對軟腐病抗性的苗期快速鑒定的方 法，從而為金線蓮抗軟腐病的新品種選育及種質創新提供依據。1材料軟腐歐文氏菌黑莖病變種，

5、山浙江農林大學森林保護學科提供。供試 材料為金線蘭a. roxburghii和臺灣金線蓮a. formosanus,采自于浙江農林大學百草園金線蓮種質資源圃，由浙江農林大學胡潤雅教授鑒定。2方法 2. 1接種方法選取金線蓮幼苗，參照蒲小明等7方法配置na培養基，將軟腐歐文 氏菌黑莖病變種接種至na培養液中，30-32 °c, 150 r?min-l振蕩培養 24 h時，菌液濃度稀釋至1 x107 cfu?ml-lo接種方法為離體葉碟滴接法 和離體葉碟針刺法，以常用活體噴霧法為對照。每個處理10株苗，3次重 復。2.1.1離體葉碟滴接法參照黃德芬8采用的方法，稍作修改。具體 步驟為：將

6、剪下的葉片經流水沖洗后，95%乙醇處理30 s,無菌水洗凈， 7%次氯酸鈉溶液處理8 min,再用無菌水清洗干凈，用直徑為1. 5 cm的打 孔器對葉片打孔，然后將處理好的葉片放入已滅菌帶濾紙的培養皿內，加 入無菌水保濕。將配好的菌液20 ul滴于葉片中心，以滴無菌水作對照, 放入14 h光照、28 °c培養箱屮培養。接種5 d后調查病情指數，評價詁 種抗病性。2.1.2離體葉碟針刺法葉片處理同離體葉碟滴接法，接種方法參照 黃德芬8釆用的方法，稍作修改。具體方法步驟為：采用10支捆綁在一 起的絹針蘸取菌液接種于處理后的葉片，以蘸取無菌水作対照，放入14h 光照、28 °c培

7、養箱屮培養。接種5 d后調查病情指數，評價甜種抗病性。2. 1.3活體噴霧法參照李永鎬等9采用的方法，稍作修改。具體方 法步驟為：處理前1 d將金線蓮幼苗進行保濕24 h,笫2天用小型噴霧器 將配好的菌液均勻的噴泗在植株葉片表面，以噴無菌水為對照，每1 ml菌液噴接1株，接種后保濕24 h,接種5 d后統計病情指數，評價品種抗 病性。2.2不同接種濃度的比較離體葉碟滴接法將配好的4個不同濃度梯度即1.0x106, 1.0x107, 1.0x108, 1.0x109 cfu?ml-l的菌懸液接種到葉齡為4個月的金線蓮離 體葉片上，放入14 h光照、28 °c培養箱中培養。接種5 d后調查記載發 病情況，從而確定最佳接種濃度。每個處理10株苗，20片打孔葉片，3 次重復。2.3不同接種葉齡的比較釆用2. 2. 2確定的最佳菌液濃度，采用離體葉碟滴接法將菌