,己酸羥孕酮物理常數的測定,一、試劑及儀器,1.恒溫干燥箱、己酸羥孕酮 2.容量瓶、b形管、毛細管 3.旋光儀,二、實訓內容,1.烘干箱烘至恒重 2.檢查性狀、測定溶解度 3.測定熔點、旋光度 4.計算結果,實驗原理,根據藥物濃度與折光率的關系式： a 對液體供試品 aD d 100 對固體供試品 aD c 式中 a為比旋度； D為鈉光譜的D線； t為測定時的溫度； 為測定管長度, dm； 為測得的旋光度； d為液體的相對密度； c為每100ml溶液中含有被測物質的重量,g（按干燥品或無水物計算）。,熔點：（2005年版）附錄 ） 1.熔點（melting point）：一種物質按規定方法測定，由固體熔化成液體的溫度或熔融同時分解的溫度或在熔化時初溶至全熔經歷的溫度范圍。 2.意義：鑒別藥物，判斷真偽；檢查藥物的純凈程度：不純，熔距增大；晶型。,3.測定法 易粉碎的固體藥品；不易粉碎的固體藥品（石蠟）；油狀（凡士林）。 研成細粉 干燥除水 m.p.135，105干燥；m.p.135或受熱易分解，P2O5干燥24小時。,裝樣 毛細管：長9cm左右，內徑1mm，底部熔封。 裝樣高度：3mm，要裝緊、裝密、便于傳溫。 測定 容器：“b”型管、燒杯 傳溫液： m.p.80 -水 m.p.300 -液體石蠟、硅油 m.p.300 -硫酸鉀硫酸,溫度計： 分浸式具有0.5刻度，傳溫液液面不得超過 刻度，預先校正。溫度校正數值熔點溫度。 加熱： 溫度計距燒杯底部2.5cm以上，樣品在水銀球中部，在低于m.p.10時放入傳溫液，控制升溫速度1-1.5/min。,熔點的判斷 初熔：供試品開始局部液化（出現明顯液滴）時的溫度。 全熔：供試品全部熔化（澄明）時的溫度。 熔融同時分解：變色或產氣。 在某一點上完全液化。 測定三次取平均值。,旋光度： （2005年版）附錄 ） 1.旋光度：偏振光通過含有某些光學活性的化合物液體或溶液時，能引起旋光現象，使偏振光的平面相左或向右旋轉，此種旋轉在一定的條件下，有一定的度數，稱為旋光度。 2.比旋度：在一定溫度下和一定波長下，偏振光透過長1dm，每1ml中含有旋光物質1g的溶液時的旋光度稱為比旋度。 3.意義：判斷純度、含量測定。, c l,=,t, = -比旋度 c：供試品溶液的濃度，每ml溶液中含有溶質的克數。 t：20,c l,t,D,相對密度：（2005年版）附錄 ） 1.相對密度：在共同的特定條件下（如同一溫度等），某物質的密度與另一參考物質的密度之比。即在相同條件下，物質比純化水重的倍數。 2.意義：檢查藥品的純雜程度。,3.測定方法 （1）比重瓶法 適用范圍：一般液體，非揮發性液體 測定法： 精稱干燥潔凈的比重瓶，w1，裝滿供試液（20），裝溫度計，恒溫20擦干。 精稱比重瓶，w2。 液重= w2-w1 供試品相對密度=,供試品重量,純化水重量,注意事項： 比重瓶必須是干燥潔凈的。 確保稱量瓶充滿液體，不得有氣泡。 瓶子外要擦干凈，保持干燥。 溫度保持恒定。 采用新煮沸數分鐘并冷卻的水。,（2）韋氏比重秤法 適用范圍： 測定易揮發液體，方法準確可靠，手續簡便迅速，可直接得到相對密度讀數。 測定法,甾體激素,己酸羥孕酮,甾體激素,腎上腺皮質激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,基本結構與性質,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,環戊烷并多氫菲母核,1.4-3-酮，C20酮基,2.C11： 或,4.A環上的酚羥基,5.鹵素(-F)，酯基,以下主要基團可供分析：,一、腎上腺皮質激素,3,11,17,20,21,氫化可的松 (hydrocortisone),醋酸地塞米松 (dexamethasone acetate),16-甲基,21-酯化,17-羥基,9-氟,3-酮,1,2-雙鍵,11-羥基,20-酮,二、雄性激素及蛋白同化激素,甲睪酮 (methyltestosterone),丙酸睪酮 (testosterone propionate),苯丙酸諾龍 (nandrolone phenylpropionate),17-羥基,三、孕激素,黃體酮 (progesterone),醋酸甲地孕酮 (megestrol acetate ),米非司酮 (mifepristone),四、雌性激素,雌二醇 (estradiol),(炔雌醇),炔諾酮 (norethisterone),結構-性質,官能團的反應, C17-醇酮基還原性,含量測定比色法,2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC (Red tatrazoline RT),甲瓚(Formazan),深紅色 max 480490nm,Blue tetrazoline BT,BT-單甲瓚,BT-雙甲瓚,藍色 max 525nm,氫化可的松軟膏的含量測定,精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，各再精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25的暗處放置40min45min，在485nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得,基團對反應速度的影響,溶劑、水分的影響, 無水乙醇(無醛),O2與光線的影響,堿的種類及加入順序,反應應在強堿性（pH13.75）條件下進行 以氫氧化四甲基銨的結果最佳,溫度與時間,t甲瓚分解%,含量測定異煙肼法(Isonicotinic acid hydrazide),專屬性強,無水,酸、異煙肼的量,鹽酸 : 異煙肼 = 2 : 1,樣品 : 異煙肼 = 1 : 8 , C3酮基和C20酮基,睪酮,異煙腙（黃色）,黃體酮,異煙雙腙（黃色）,UV,醋酸地塞米松, 甲酮基或活潑亞甲基,酚羥基,黃體酮,藍紫色,含量測定 Kober反應比色法,采用本法測定炔雌醇片及復方炔諾酮片、復方炔諾孕酮滴丸、復方左炔諾孕酮片中的炔雌醇的含量,生物樣品中的甾體激素的分析,刺激劑 麻醉劑 -阻斷劑 利尿劑 遮蔽劑 合成類固醇及2激動劑 肽類激素,內源性,興奮劑檢測特點,色譜方法是理想的檢測手段。1976年使用氣相色譜-質譜聯用手段檢測甾體，1980年開始用毛細管氣相色譜法檢測，至1984年大體基本定型。,藥物及其代謝物的種類多，變化大，禁用的百余種藥物以原體或一個或多個代謝產物的形式存在與人體體液中，因此，需要檢測和確證的化合物多達幾百種。除此以外，用藥后的不同時間，這些化合物的濃度不斷的發生變化 藥物在人體體液中的濃度很低，藥物在人體體液中的濃度常常是ng級或更低的水平，因此對檢測的靈敏度要求很高。 要求準確的定性和定量，不能有絲毫的疏漏和差錯。檢測者要對每一種藥的藥物代謝動力學及光譜分析有全面嫻熟的了解及足夠的分析參考資料 ，直到排出體外。,檢測基質,1.尿液,尿樣檢測是興奮劑檢測的理想樣本。其優點在于：取樣方便；對人無損害；尿液中的藥物濃度高于血液中的藥物濃度；尿液中的其他干擾少。,2.血樣,補充尿樣分析方法的不足，目前尚處于研究探索階段，目前僅用于血液回輸，紅細胞生成素，生長激素，絨毛膜促性腺激素，睪酮等的測量。,3.頭發,在法醫，毒性分析中已有較長歷史，但在興奮劑研究中是才興起研究方向。有采樣容易，無損傷，不易作弊的特點，備受關注。皮質類固醇在體內消除很快，如果賽前停藥，尿液分析就檢測不到，而發樣分析仍可檢出。,4.體液,檢測步驟,一、篩選方法 （1）揮發性含氮化合物組： 主要檢測刺激劑。這類藥物多以游離形式排出。 （2）難揮發含氮化合物組： 主要檢測麻醉陣痛劑和-阻斷劑。這兩類藥物多以結合形式排出，因此需先水解，使之游離，再進行衍生化后檢測。 （3）利尿劑組： 藥物經提取后用高效液相色譜法分析檢測，此組同時檢測2種興奮劑、咖啡因和匹莫林。 （4）甾體同化激素組： 此類藥物有的以游離形式，有的以結合形式排出，我們所用的方法為同時檢測。,經篩選判為陽性的尿樣，需進一步加以確證，根據規定，確證結果須給出藥物或其代謝物的質譜圖，因此在確證方法中