薺菜對(duì)乙酰乳酸合成酶抑制劑類除草劑靶標(biāo)抗性檢測(cè)技術(shù)規(guī)程2018-07-27發(fā)布2018-12-01實(shí)施I1薺菜對(duì)乙酰乳酸合成酶抑制劑類除草劑靶標(biāo)抗性檢測(cè)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了薺菜[Capsellabursa-pastoris(L.)Medik.]對(duì)乙酰乳酸合成酶(acetolactatesyn-本規(guī)程適用于薺菜對(duì)乙酰乳酸合成酶抑制劑類除草劑產(chǎn)生靶標(biāo)抗性的有關(guān)檢測(cè)。下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必術(shù)可少的。凡是注地上部生物量受除草劑的抑制程度來(lái)評(píng)價(jià)其對(duì)除草劑敏感性的方法使雜草生物量降低50%的除草劑劑量。抗性指數(shù)resistanceindex(由于靶標(biāo)基因DNA分子中堿基對(duì)的取代，導(dǎo)致mRNA的某一密碼子發(fā)生變化，從而引起編碼的4檢測(cè)程序2m2,成熟種子量不少于2000粒。選擇無(wú)薺菜種子、無(wú)除草劑殘留的農(nóng)田地表土，混合20%～30%的草炭土，混小于10cm的培養(yǎng)缽；待測(cè)種群及敏感對(duì)照種子用0.05%～0.1%的赤霉素溶液浸泡12h～24h后沖洗25℃,光照時(shí)間8h～10h條件下培養(yǎng)。待薺菜長(zhǎng)至2葉期，待植株長(zhǎng)至3葉期，用待測(cè)除草劑(ALS抑制劑類除草劑)進(jìn)行莖葉噴霧處理，除草劑劑量采用敏(1)計(jì)算株防效(%)。E——存活植株數(shù)占總處理植株數(shù)的百分比，單位為百分率(%);4.3.2劑量反應(yīng)曲線法待植株長(zhǎng)至3葉期，用待測(cè)除草劑(ALS抑制劑類除草劑)進(jìn)行莖葉C——待測(cè)指標(biāo)下限，單位為百分率(%);D——待測(cè)指標(biāo)上限，單位為百分率(%);b——斜率。按式(3)計(jì)算抗藥性指數(shù)RI。RI——抗藥性指數(shù)；4.4靶標(biāo)基因檢測(cè)3CpNA=OD?6o×A×50Bank上的登記號(hào)為AY042819.1)和薺菜的ALS(GenBank上的登記號(hào)為HQ88064代；377位精氨酸被組氨酸取代；574位色氨酸被亮氨酸/甘氨酸/精氨酸取代；653位絲氨酸被蘇氨酸/天冬酰胺/異亮氨酸取代；654位甘氨酸被天冬氨酸/谷氨酸取代(氨基酸序列以擬南芥為參照)。靶標(biāo)基因序列的測(cè)序峰圖中這些位點(diǎn)發(fā)生相應(yīng)的突變，即判斷為有靶標(biāo)抗性，薺菜2個(gè)ALS序列的任意一5.4抗藥性判斷如果檢測(cè)結(jié)果中5.1、5.2和5.3均滿足條件，即