典型實(shí)驗(yàn)教學(xué)案例簡介案例x雙波長分光光度法測定復(fù)方磺胺甲噁唑片中兩組分含量藥物的含量測定是藥物質(zhì)量控制的重要方面。紫外分光光度法以其準(zhǔn)確度、靈敏度高，簡便快速等特點(diǎn)，成為藥物含量測定的重要方法。紫外法測定含量時(shí)，常選擇被測組分的最大吸收波長最為測定波長，以提高檢測的靈敏度。當(dāng)用紫外法測定復(fù)方制劑多組分中一種組分的含量時(shí)，共存組分常常也會(huì)有吸收干擾，此時(shí)，消除干擾就成為準(zhǔn)確測定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。雙波長分光光度法作為計(jì)算分光光度法的一種，就是消除干擾、實(shí)現(xiàn)多組分含量同時(shí)測定的一種有效手段。本實(shí)驗(yàn)就以復(fù)方磺胺甲噁唑片為實(shí)驗(yàn)對象通過雙波長分光光度法測定其兩組分的含量，從而達(dá)到學(xué)習(xí)雙波長法的原理和操作的目的。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．掌握雙波長分光光度法的測定原理。2．熟悉雙波長分光光度法在復(fù)方制劑分析中的應(yīng)用。二、實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)吸收光譜重疊的ab兩組分共存時(shí)，若要消除a組分的干擾測定b組分，可在a組分的吸收光譜上選擇兩個(gè)吸收度相等的刀和0測定混合物的吸光度差值。然后根據(jù)從值計(jì)算b的含量。SMZ在257nm波長處有最大吸收,TMP在此波長吸收最小并在304nm波長附近有一等吸收點(diǎn)，故選定257nm為SMZ的測定波長（圖1）,在304nm波長附近選擇參比波長。TMP在239nm波長處有較大吸收，此波長又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波長附近有一等吸收點(diǎn)，故選定239nm為測定波長（圖2），并規(guī)定在此波長附近選擇供測定的參比波長。由于參比波長對測定影響較大，故采用對照品溶液來確定。此波長可因儀器不同而異，測定時(shí)應(yīng)仔細(xì)選擇。

圖ISMZ紫外吸收圖譜1.TMP(0.2圖ISMZ紫外吸收圖譜1.TMP(0.2卩g/ml);2.SMZ(10.0卩g/ml);3.SMZ+TMP;4■輔料圖2TMP紫外吸收圖譜1.TMP(5.0卩g/ml);2.SMZ(25.0卩g/ml);3.SMZ+TMP;4■輔料三、儀器與試劑主要儀器：紫外-可見分光光度計(jì)；100mL容量瓶主要試劑：磺胺甲噁唑和甲氧芐啶對照品；0.4%氫氧化鈉溶液；0.1mol/L鹽酸溶液；氯化鉀四、實(shí)驗(yàn)步驟磺胺甲噁唑的含量測定平均片重測定：10片，精密稱定供試品溶液配制：精密稱取片粉片劑過濾(約50mgSM乙10mg片劑過濾研憐溶解、定容100m

50mgSMZ對照品50mgSMZ對照品100mL0.4%NaOH定容2.00ml100mL10mgTMP對照品乙醇、亠 0.4%NaOH定谷2.00ml ■對照液（20.4%NaOH定容2.00ml100mL10mgTMP對照品乙醇、亠 0.4%NaOH定谷2.00ml ■對照液（2）L（3）取對照品溶液（2）的稀釋液，以257nm為測定波長（在304nm波長附近（每間隔0.5nm）選擇等吸收點(diǎn)波長為參比波長（入），要求△A=A入2（2）—A入?!⑵=0,再在22與九兩波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶液（1）的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（4A），計(jì)算，即得。甲氧芐啶的含量測定（1）稀釋液配制：取上述供試品溶液與對照品溶液（1）、（2）各，分別置于100mL容量瓶中，各加HCI-KCI溶液（0?1mol/LHCI75mL+6?9gKC，力卩水至1000mL），稀釋至刻度，搖勻。（2）參比波長選定：取對照液（1）的稀釋液，以239nm為測定波長（入2），在295nm附近（每間隔0.2nm）選擇等吸收點(diǎn)波長為參比波長（入1），使厶A=A入2(1)—A/1=0。（3）雙波長測定：在艇與入兩波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶液（2）的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（4A），計(jì)算，即得。3.結(jié)果計(jì)算■:Auu被測藥物標(biāo)示量％=—Asu被測藥物標(biāo)示量％=—As100wv標(biāo)示量式中Aau為供試液的Aa值，從為對照液的從值，Cs為對照液濃度（mg/mL）D為稀釋倍數(shù)，W為取樣量。五、注意事項(xiàng)1.測定之前應(yīng)