腎氣虛證模型的宏觀癥征改變

模型的不足主要體現(xiàn)在兩個方面：模型的生物學特性與臨床的差異，以及系統(tǒng)研究的缺乏。本實驗在脾氣虛證動物模型規(guī)范化的初步研究中,探討其宏觀癥征改變。生大黃,廣豆根,旋覆花,生檳榔,購自北京同仁堂集團。川厚樸,枳實,購自北京北新中藥店。經(jīng)鑒定均為正品。利血平注射液(批號970505),上海醫(yī)科大學紅旗制藥廠生產。體溫檢測儀器為WMZ-03溫度指示儀。1.3飼料及造模方法體質篩選、苦寒瀉下加耗氣破氣降氣法。1.3.1造模方藥制作方1為生大黃∶厚樸∶枳實=2∶1∶1比例,大黃后下,常規(guī)制成200%煎劑。方2為廣豆根∶旋覆花∶檳榔=3∶1∶1比例,常規(guī)制成250%濃度煎劑。藥化飼料:用方1,常規(guī)制成濃度750g/600ml煎液。每600ml藥液加入6000g原飼料粉中,按SPF飼料規(guī)范制成藥化飼料。藥化飲水:旋覆花∶檳榔=1∶1。常規(guī)制成16.7%(50g/300ml)煎液。1.3.2造模方法先采用游泳時間法測定體質,體質弱者用于造模(詳后)。方1和方2分別于4℃交替灌喂,每次4ml/只,方1和方2灌喂次數(shù)按3∶2比例,造模前18d3次/d,后12d4次/d,每2次灌喂間隔≥3.5h。同時以藥化飼料自由喂飼,藥化飲水自由飲用。造模30d。1.4管道模型均造模12d。大黃模型:生大黃,后下,常規(guī)制成200%煎劑。室溫下灌喂,6ml/(只·d),1次/d。耗氣破氣模型:厚樸∶枳實∶生大黃=3∶3∶2比例,常規(guī)制成200%煎劑。室溫下灌喂,6ml/(只·d),1次/d。限量營養(yǎng)模型:按對照組食量的半量,9g/(只·d),以籠為單位,飼料喂飼。勞倦過度模型:游泳消耗體力法,22℃水溫,動物游泳至連續(xù)“冒泡”5次終止。2次/d,兩次間隔5h。利血平模型:利血平注射液,腹側皮下注射,0.15mg/(kg·d),1次/d。1.5平均血漿內表達情況WistarⅡ級大鼠,雄性,體重180～220g,198只,來自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所繁育場,飼養(yǎng)于本所實驗動物室。按體重配對隨機分組,先分出大黃、耗氣破氣、限量營養(yǎng)、勞倦過度、利血平模型5組各26只。余下的動物以游泳法測定體質,方法同前(5min為1個等級),記錄游泳時間。短者(平均約4min)分至初步規(guī)范模型組(38只),長者(平均約6.5min)分至對照組(30只)。實驗前30d為造模期,然后自然恢復。對照組和初步規(guī)范組自然恢復期為78d,但部分動物于第12天取樣。其余5組的自然恢復期為12d。對照組:正常飼養(yǎng)30d,然后取樣14只;余下動物第12天取樣8只,至第78天實驗結束。初步規(guī)范組:改進法造模30d,然后取樣15只;余下動物自然恢復,第12天取樣8只,至第78天實驗結束。大黃、耗氣破氣、限量營養(yǎng)、勞倦過度、利血平5組:前18d均正常飼養(yǎng),后12d依上述方法分別造模,然后取樣(5組分別為13只、14只、13只、13只及14只)。余下動物自然恢復,至第12天取樣。造模期30d中,各組以初步規(guī)范組為標準用Ⅱ級飲用水均衡灌喂次數(shù)和液體量,后12d,各組以利血平組為標準用0.9%氯化鈉溶液均衡皮下注射次數(shù)和液體量。1.6動物的幼血壓檢測在造模和恢復過程中檢測癥狀,大便,舌象,體重,體溫,體長,食量,游泳時間。檢測方法:受激排便率指動物接受抓取動作后短時間內排便的幾率。體溫為腋溫。體長指從鼻尖至尾根長度。食量以組為單位,計量給飼料,過若干天后減去剩余量,再平均為這段時間本組每只動物每天食量。游泳時間為22℃水溫,動物放下至“冒泡”5次的時間。在自然恢復第16天和45天兩次體溫檢測前以17℃環(huán)境寒冷負荷11h。一些具體指標的檢測方法本身就具有負荷因素,如游泳時間測定,受激排便試驗等。1.7統(tǒng)計處理方法采用Execl表單因素方差分析法。2結果2.1動物一般情況實驗前各組、實驗期間對照組大鼠外觀及大便均正常,舌淡紅有苔。2.1.1初步規(guī)范組①造模期:造模6h后有個別泄瀉,20h外觀即有異常改變。第4天,全面出現(xiàn)脾氣虛證一般癥狀體征(除耳尾色白外),泄瀉。第5天腹面被毛開始憔悴。8d出現(xiàn)脾氣虛證嚴重階段的癥狀體征。12d見耳尾色白。舌淡嫩,少苔。15～18d有所恢復,19d后又逐漸加重,21d又出現(xiàn)如前較嚴重的脾氣虛證表現(xiàn),并持續(xù)至造模結束。造模期間,本組動物死亡8只。②恢復期:大便異常于第4天恢復,但受激排便至44d仍未恢復。脾氣虛證一般癥狀體征和舌象21d恢復,毛色31d恢復,尾色至37d恢復。2.1.2大黃組①造模組:造模2d便軟,以后一直是介于便軟和稀便之間,便軟為主。第10天開始顯露輕度脾氣虛證一般癥狀體征(除耳尾色白外)。舌淡紅有苔。②恢復期:大便異常于第4天恢復,但受激排便至11d仍未恢復。脾氣虛證一般癥狀體征5d恢復。舌象、毛色11d恢復。2.1.3耗氣破氣組①造模期:造模第2天開始以軟便為主,程度不及大黃組。整個造模期癥狀體征和舌象基本正常。②恢復期:大便4d天恢復。2.1.4限量營養(yǎng)組①造模期:造模第10天開始顯露輕度脾氣虛證的一般癥狀體征(除耳尾色白外),整個造模期大便和舌象基本正常。②恢復期:脾氣虛證一般癥狀體征11d前恢復。2.1.5勞倦過度組①造模期:造模第10天開始顯露輕度脾氣虛證一般癥狀體征(除耳尾色白外)。怕冷。整個造模期大便和舌象基本正常。②恢復期:脾氣虛證一般癥狀體征第11天前恢復。2.1.6利血平組①造模期:造模第2天開始顯露輕度脾氣虛證一般癥狀體征(除耳尾色白外)。5d起較為明顯,持續(xù)至造模結束。9d開始便軟。整個造模期間舌象變化不明顯。②恢復期:大便異常于第1天恢復。但受激排便至11d仍未恢復。4d脾氣虛證一般癥狀體征恢復。2.2各組體重比較結果見表1。由表1可見,造模結束時各模型組體重均顯著低于對照組,以初步規(guī)范組最為明顯;自然恢復10d時各模型組間體重也以初步規(guī)范組最低。至自然恢復57d,初步規(guī)范組體重[(355±25)g]仍顯著低于對照組[(394±36)g]。自然恢復78d,初步規(guī)范組體重[(385±25)g]仍未恢復至對照組水平[(408±51)g]。2.3各組主要參數(shù),總體溫結果見表2。造模第12天和18天,雖初步規(guī)范組體溫[(37.3±0.4)℃和(37.0±0.4)℃],顯著低于對照組[(38.4±0.4)℃和(37.6±0.3)℃](均P<0.01),但造模結束時,各模型組體溫均無顯著低于對照組。自然恢復11d,利血平組體溫顯著低于對照組,整個自然恢復期,初步規(guī)范組體溫(包括低溫負荷后)總體上無明顯低于對照組趨勢。2.4兩組體長比較自然恢復第46天,初步規(guī)范組體長為(21.0±0.8)cm,對照組體長為(22.1±1.3)cm,前者有減少趨勢,但差異無顯著性意義(P>0.05)。2.5各組、初步規(guī)范組、初步規(guī)范組的量表結果見表3。整個造模期,初步規(guī)范組食量明顯少于對照組,大黃組、特別是利血平組也明顯減少。自然恢復3～9d,各模型組食量多有所“反彈”,以初步規(guī)范組最為明顯。初步規(guī)范組食量至自然恢復21～30d開始趨于平穩(wěn)[18.7g/(只·d)]。2.6造模結束后,各模型組游泳時間的比較結果見表4。因勞倦過度組使用游泳造模,故其游泳時間不作統(tǒng)計。造模結束時,除利血平組外,各模型組游泳時間均呈降低趨勢,以初步規(guī)范組最為顯著。自然恢復第16天時,初步規(guī)范組游泳時間有低于對照組的趨勢。3傳統(tǒng)的和現(xiàn)代的造模方法在自然期長、神脾氣虛證模型生物學特性與臨床的差異,包括功能和“精氣未奪”(能量)兩個方面,且主要在后者。本實驗首先完善脾氣虛證模型的診斷標準,注意診斷標準的系統(tǒng)性和客觀性,并吸收證候實質的現(xiàn)代研究成果。在脾氣虛證模型的“慢性”屬性上,既要求慢性形成,更注重緩慢的自然恢復,因為后者能反映出虛性病理的內在性。虛證病理往往在負荷情況下才得以表現(xiàn),這一規(guī)律在證候現(xiàn)代研究中已受重視。診斷標準注意具備氣虛和脾虛兩個方面。在具體宏觀癥征上,動物脾虛證如持續(xù)時間較長或程度較深,會影響身體發(fā)育,類似疳癥,以前實驗中也有同樣結果。受激排便率增高為我們以前脾虛證造模中發(fā)現(xiàn)的指標,并被引用。本指標類似臨床脾虛證患者易受飲食、寒冷等因素的刺激而產生便意的表現(xiàn)。本標準還從體溫角度與脾陽虛證進行鑒別。為使脾氣虛證模型的生物學特性與臨床更為符合,我們從多方面改進造模方法,如:將體質篩選法運用于建立證候模型;在耗氣破氣法的基礎上,將降氣法運用于建立脾虛證模型;將廣豆根、檳榔、旋覆花等藥物運用于建立脾虛證模型;采用“滿負荷”造模方法以求在有限時間內使動物達到“精氣奪”程度;根據(jù)動物對一定量的造模因素應用一定時間后,會有所適應,此時應加大造模量,才能達到同樣造模效果的特性,采用前輕后重的兩階段造模方法等。本實驗結果顯示,初步規(guī)范組的宏觀癥征與脾氣虛證診斷標準基本符合。同時,符合度也明顯高于其他5種脾(陽)氣虛證模型。實驗發(fā)現(xiàn)動物受驚動時無神、抓取時掙扎無力、腹面被毛憔悴三個方面表現(xiàn)可作為動物精氣損傷程度較深的指標。身體其他部位被毛的色澤較腹面被毛在致虛過程中更早受影響,其他部位被毛失澤變黃時,腹面被毛可依然豐腴。動物如體弱,則被抓取時也呈含胸曲背狀態(tài),與靜止時的拱背相似,應為虛證時動物保護身體陰面的本能。各模型組中,只有初步規(guī)范組具有此三方面表現(xiàn)。本實驗初步規(guī)范組多數(shù)指標的自然恢復期較長,部分指標超過雙倍造模時間,為以前脾虛證模型研究所未見。目前一般以在脾氣虛證基礎上體溫降低明顯作為脾陽虛證的診斷標準,本實驗初步規(guī)范組在造模階段體溫降低不明顯,在自然恢復階段大多數(shù)檢測顯示體溫與對照組無顯著差異,在兩次低溫負荷后體溫與對照組比較也無顯著下降,說明其無明顯陽虛表現(xiàn)。1材料和方法1.1負荷