手性毛細管柱法測定天然冬蟲夏草中天然超聲波和艾片的含量

天然婆羅洲又稱美片，性質溫和。這是古今常用的中藥。它具有開孔、醒神的功能。主要用于中風、粘液昏迷、痙攣和其他緊急情況的治療。主要成分是右邊的旋轉龍腦。艾片性溫,有溫中、活血、消腫等功能,一般用于治療四肢骨痛。艾片的主要成分是左旋龍腦。藥理研究證明右旋龍腦、左旋龍腦和異龍腦三者的毒性依次增大,由于天然冰片的來源匱乏,合成冰片在臨床上用以代替天然冰片,但某些急救、兒科用的中成藥仍采用天然冰片入藥。合成冰片中龍腦、異龍腦和樟腦的非手性測定已有較多的報道,但過去由于沒有適當的手性分離方法,很多文獻推斷合成冰片是消旋體,這與我們的測定結果不符。工業上以松節油中的α-蒎烯作原料,經有機酸加成反應成酯,再經皂化反應制得合成冰片。合成冰片中右旋龍腦及其異構體的相對含量受反應條件的影響,因此有必要在冰片質量標準中規定右旋龍腦的含量。本研究建立了右旋龍腦及其相關物質含量的手性毛細管氣相色譜測定方法,為完善合成冰片的藥品質量標準和重新認識合成冰片的藥性提供了參考。1實驗部分1.1gc-ms色譜條件意大利CEInstrument公司GC8130氣相色譜儀;FID檢測器,檢測器溫度240℃;分流進樣器,進樣溫度240℃,分流比1∶25;氮氣為載氣,柱頭壓力113kPa;氫氣流速25mL/min;空氣流速280mL/min;澳大利亞SGE公司CYDEX-B手性毛細管柱(25m×0.22mm,0.25μm),柱溫110℃。英國FinniganMassLab公司MD-800氣相色譜-質譜聯用儀,EI源,電子能量70eV,進樣溫度240℃,氦氣為載氣,柱頭壓力40kPa,與GC使用相同的色譜柱。美國PE公司343型旋光儀,鈉光燈,測定溫度30℃。1.2對照品和合成梅片品右旋龍腦對照品為本所中藥室提供;合成冰片對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;艾片、樟腦、異龍腦對照品和合成梅片樣品由廣州市黃浦化工廠提供,其中異龍腦是該廠生產合成冰片的副產品。天然冰片樣品為韶關市藥檢所送檢樣品,其余樣品購自藥品店。無水乙醇、醋酸乙酯均為分析純試劑。1.3gc-ms測定取對照品和樣品各適量,用醋酸乙酯溶解,制成質量濃度為2~5g/L的溶液供GC和GC-MS測定。取對照品和樣品各適量,分別以無水乙醇作溶劑,配成質量濃度為10/L的溶液,供比旋度測定。2結果與討論2.1出峰順序的確定合成冰片和各對照品用GC-MS法測定,根據保留時間和質譜圖確定了樟腦、(±)-異龍腦、右旋龍腦和左旋龍腦的出峰順序,至于(±)-異龍腦中哪一個峰是左旋體、哪一個峰是右旋體,則因未有合適的對照品而未能最終確定。柱溫110℃時合成冰片的色譜圖見圖1。2.2柱溫降至126時色譜峰的分離隨柱溫的下降而得到改善。當柱溫≤120℃時,左旋龍腦與右旋龍腦能達到基線分離;但柱溫降至105℃時,(±)-異龍腦仍然未能完全分離。值得注意的是,隨著柱溫的降低,峰高明顯降低,峰寬明顯增大。太低的柱溫將降低定量檢測的準確性,且延長分析時間。常規分析時,建議柱溫定在110～120℃范圍內。2.4合成冰激凌的質量標準氣相色譜法測得待測物的峰面積,定量采用峰面積歸一化計算各成分的相對面積含量,平行測定3次,結果見表1,其中左旋龍腦和右旋龍腦測定結果的RSD均少于0.5%。30℃條件下比旋度αD30的結果見表1。由表1可知合成冰片的旋光度并不為零,而過去不少文獻認為合成冰片是消旋體。其實α-蒎烯是一手性化合物且橋環上存在兩個甲基,它與有機酸起加成反應以及生成物的皂化反應的反應歷程較為復雜,空間效應起一定的作用,反應條件將會影響各生成物的相對含量。合成冰片中由于異龍腦的旋光異構體的相對含量較為接近,所以其旋光度主要是取決于左旋龍腦與右旋龍腦含量的差值。不同批次的合成冰片中右旋龍腦的含量變化范圍相當大,而且常用的合成冰片生產工藝更傾向于生成較多的左旋龍腦和較少的右旋龍腦,但是現行的藥典標準未對其右旋龍腦的含量加以規定。作者認為合成冰片的質量標準應增加右旋龍腦的含量測定項目。由表1可知合成梅片的主要成分是右旋龍腦,此外還含有少量異龍腦和樟腦。合成梅片的地方質量標準中采用了比旋度測定法控制其右旋龍腦含量,其它具有旋光性的物質可以干擾測定結果,采用手性氣相色譜法則可消除這種干擾。2.5大龍腦可利用1.2%天然“三惡”片由表1中樣品1可知天然冰片未檢出異龍腦和左旋龍腦。樣品2標示為天然冰片,呈淡紅色,溶解后可觀察到少量木屑狀物,外觀性狀較接近天然冰片。但用本法檢驗發現其含有較多的異龍腦和左旋龍腦,故可判定為假冒天然冰片。采用本法鑒定天然冰片與假冒天然冰片,檢定結果準確可靠。3復配片與合成梅片的成分測定用手性色譜法對天然冰片、艾片、合成冰片和合成梅片的成分進行分離測定,為重新認識冰片的藥性、藥效和今后修訂合成冰片的藥品質量標準以及鑒定真偽天然冰片提供了依據2.3結構的影響合成冰片的質量濃度為2g/L,進樣體積為0.5μL,當采用不分流方式進樣時各色譜峰因色譜柱過載而無法分離。因為CYDEX-B固定相是預甲基化環糊精,而龍腦及其異構體都含有羥基,這些羥基與環糊精中的氧原子發生氫鍵作用而產生峰拖尾。右旋龍腦和異龍腦的分子結構是穩定的剛性橋環結構,10個碳原子中有7個參與成環,而在這7個碳原子中又有2個是橋頭碳原子,這些碳原子發生碎裂電離需要較高的能量,因此碎裂電離的效率低;又因為它們在形成離子時電荷得不到分散,故形成分子離子的效率低,最終在EI源質譜中表現為總離子流強度弱。在FID檢測器中燃燒生成離子的能力較差也與其分子結構有關。離子化效率