葡萄球菌屬的檢驗(yàn)雷曉穎衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)系-9410室Email:leixy@PhoneQ/微信：181807790實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜て咸亚蚓男螒B(tài)、染色及培養(yǎng)特征。掌握葡萄球菌各鑒別試驗(yàn)原理、方法及用途。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)課前一天來(lái)劃線接種（5月12日，下周二）：

用接種環(huán)將三種葡萄球菌（金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌）分別劃線接種普通平板和血瓊脂平板。觀察三種菌分別在兩種平板上菌落形態(tài)，挑取典型金葡菌菌落做革蘭氏染色，鏡下觀察形態(tài)特征。1血漿凝固酶試驗(yàn)2耐熱核酸酶測(cè)定3觸酶試驗(yàn)4甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)5新生霉素敏感試驗(yàn)1血漿凝固酶試驗(yàn)

鑒別葡萄球菌有無(wú)致病性的重要指標(biāo)之一實(shí)驗(yàn)原理凝固酶有兩種：游離凝固酶和結(jié)合凝固酶。玻片法測(cè)定結(jié)合凝固酶步驟1.1生理鹽水三滴，分別滴于潔凈玻片上。1.2以接種環(huán)分別挑取三種葡萄球菌各少許，分別與生理鹽水制成均勻的細(xì)菌懸液，觀察有無(wú)自凝。1.3每滴懸液內(nèi)加入兔血漿各一滴，混勻。如出現(xiàn)顆粒狀凝集即為陽(yáng)性，如不立即發(fā)生凝集，稍待1～2min，并輕輕搖動(dòng)玻片，仍無(wú)凝集為陰性。1.4同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。結(jié)果觀察兩種菌液的凝集情況2耐熱核酸酶測(cè)定

致病性葡萄球菌產(chǎn)生一種耐熱核酸酶，在100℃、15min或60℃、2h不被破壞，對(duì)DNA有較強(qiáng)的降解能力，使DNA長(zhǎng)鏈水解成由幾個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸，水解后的DNA短鏈與甲苯胺藍(lán)結(jié)合，使甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂顯示粉紅色。非致病性的葡萄球菌也能產(chǎn)生DNA酶，但不耐熱。耐熱核酸酶測(cè)定可以作為鑒定致病性葡萄球菌的重要指標(biāo)之一。步驟2.1干凈載玻片上傾注3ml熔化的甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂，待凝固后用2mm打孔器，每片可打4～8孔。2.2取200ul前一天接種剩余的菌液，沸水煮15min，2.3每孔滴入經(jīng)沸水加熱處理過(guò)的培養(yǎng)物一小滴（10μl），37℃放置24h，同時(shí)用液體培養(yǎng)基做陰性對(duì)照。結(jié)果：觀察每個(gè)孔周圍顏色變化情況金葡表皮腐生陰性對(duì)照3觸酶試驗(yàn)

鑒別葡萄球菌和鏈球菌原理

步驟

3.1以接種環(huán)分別挑取3種菌落，置于玻片上；3.2滴加3%H2O21～2滴。結(jié)果：觀察是否有氣泡產(chǎn)生4甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)

原理

致病性葡萄球菌大多能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)基由紫變黃。步驟

三種葡萄球菌分別接種甘露醇發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)24h。結(jié)果：觀察各管培養(yǎng)基顏色新生霉素敏感試驗(yàn)

鑒別凝固酶陰性的葡萄球菌步驟5.1將三種待檢菌（接種時(shí)剩余的菌液）制成0.5麥?zhǔn)媳葷峋鷳乙?.2均勻涂布于血瓊脂平板上，再貼上含5μg/片的新生霉素紙片，37℃孵育16h～20h試驗(yàn)時(shí)應(yīng)以金黃色葡萄球菌