ICS65.020.300856-2018青海省地DB63方標準DB/T1692—2018青海省質量技術監督局發布IDBT1692—2018前言GB/T1.1-2009給出的規則起草。海省農牧廳提出并歸口。單位：青海省家畜改良中心。澤、趙青山、、莫常山、王朝風、何得倉、李景、劉于剛。1DBT1692—2018八眉豬細管凍精生產技術規程包裝、標記和貯存、細管凍精質量評價等內容。適用于八眉豬細管凍精的生產。規范性引用文件期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB4143牛冷凍精液GBT5458液氮生物容器NY/T2823八眉豬公豬的選擇和調教種公豬的選擇NY/T2823要求，三代系譜清楚。種公豬的飼養管理清潔飲水。經常刷拭豬體，保持清潔。每天適度運動1h~2h。種公豬的調教~3次。4采精前準備4.1器械4.1.1儀器設備冷凍儀、液氮生物容器、干燥箱。4.1.2器具2DBT1692—2018管、燒杯、量筒、0.25ml細管、管、細管剪。4.2器械的清洗4.2.1儀器設備的清洗和消毒。4.2.2器具的清洗和消毒燥箱，加熱至160℃恒溫60min，自然冷卻后待用。0.25ml細管應置于紫外燈下消毒，其他非玻璃材具洗凈后自然晾干，用75%酒精棉球擦拭消毒。4.3采精場所的衛生和消毒保持安靜，地面保持清潔衛生，采精前應噴灑0.1%高錳酸鉀進行消毒。4.4稀釋液配制4.4.1常溫保存稀釋液配制gg碳酸氫鈉1.25g、氯化鉀0.075g，溶解于雙蒸水中，攪拌均勻，用定性濾紙過濾至另一錐形瓶中，濾15min，待溫度降至常溫，稱取青霉素鈉0.6g、硫酸鏈霉素1g加入濾液中并混勻。4.4.2冷凍基礎液配制溶解于雙蒸水中，攪拌均勻，用定性濾紙過濾至另一錐形瓶中，濾液煮沸15min，待溫度降至常溫，稱g、硫酸鏈霉素1g加入濾液中并混勻。4.4.5解凍液配制ml別稱取葡萄糖50g、二水檸檬酸鈉3g、乙二胺四乙酸1g，溶于雙蒸水中，攪拌均勻，用定性濾紙過濾至另一錐形瓶中，濾液煮沸15min，待溫度降至常溫。5采精5.1臺豬和種公豬的準備3DBT1692—2018臀部和公豬陰莖、包皮及其周圍腹壁，然后用0.01%高錳酸鉀溶液對公豬被清洗過的部位消毒，再用溫水沖洗干凈。5.2采精頻率豬每周采精一次，成年種公豬每周可采精兩次。5.3采精方法從37℃恒溫箱中取出保溫集精杯，杯口覆蓋過濾膜。采精員戴乳膠手套，蹲在臺豬的一側，誘導蓋保溫蓋。液處理.1準備溫度升至37℃。2原精質量要求.1原精外觀要求為乳白色，無皮毛等異物，略帶腥味。.2體積量杯內直讀精液體積。精液體積≥100ml。3密度測定用移液槍吸取3960l生理鹽水于比色皿中，再吸取40l精液，同生理鹽水混合均勻，用密度測.4精子活力和畸形率取一小滴精液于載玻片，加蓋蓋玻片在帶有38℃恒溫裝置的顯微鏡下檢查精子活力和畸形率。精%，精子畸形率≤15%。3精液常溫稀釋4精液離心和上清液體積測定將常溫稀釋后的混合液倒入50ml離心管中，在17℃、重力800g的條件下離心12min，吸取上清直讀體積。5冷凍稀釋液添加量計算4DBT1692—2018.1最終精子總數計算(1)計算： n數，單位為個；v1—精液體積，單位為毫升(ml)。.2精子體積計算子體積按式(2)計算： v位為毫升(ml)；v1—精液體積，單位為毫升(ml)；v積，單位為毫升(ml)。.3最終精液總量計算每毫升精液中精子密度≥3×108個，最終稀釋后精液總量按式(3)計算： sml；n數，單位為個。.4冷凍稀釋液添加量計算III加量按式(4)計算：aa2=sv ()4aI加量，單位為毫升(ml)；a2—冷凍稀釋液II液添加量，單位為毫升(ml)；sml；v位為毫升(ml)。5精液低溫稀釋裝有17℃水的燒杯中，放入5℃冰箱平衡2h。用5℃的冷凍稀釋液II液等溫稀釋,經平衡、溫度降至5釋液I液和II液添加量按照6.5.4計算。凍5DBT1692—2018細管封裝細管要求毒、耐低溫的專用塑料管，0.25ml劑型，保證清潔、無菌。2封裝封口、打印標識。細管標識標識清晰，信息齊全，包括凍精產地、品種、凍精生產日期、豬號。.2上架裝后的細管整齊的碼放在專用細管架上。冷凍-25℃~-140℃(降溫速率30℃/min)，共6min12s；-140℃保持30s。細管凍精收集細管凍精解凍和鏡檢8.1細管凍精解凍支細管凍精迅速浸入38℃水浴鍋中晃動，待溶解后立即取出，用吸水紙或紗布擦干水珠，再用細管剪行稀釋。.2活力檢測.2.4。活力≥30%的細管凍精作為初檢合格品妥善貯存。9包裝、標記和貯存9.1包裝，包裝應在-140℃以下環境中進行。9.2標記外應進行明顯標記。注明公豬號、生產日期、數量、精子活力。6DBT1692—20189.3貯存用液氮生物容器貯存細管凍精，液氮生物容器符合GB/T5458要求。設專人保管，每周定時加一次s。時蓋好容器塞。驗規則和方法每季度每頭公豬細管凍精型