細(xì)胞死亡與衰老演示文稿當(dāng)前1頁，總共39頁。（優(yōu)選）細(xì)胞死亡與衰老當(dāng)前2頁，總共39頁。一、細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡（apoptosis）：是借用古希臘語，意指樹葉或花瓣的凋零脫落;細(xì)胞凋亡是一個由基因決定的主動的生理性自殺行為，即細(xì)胞接受某些特定信號刺激后進行的正常生理應(yīng)答反應(yīng);細(xì)胞凋亡具有典型的形態(tài)學(xué)和生化特征，凋亡細(xì)胞最后以凋亡小體被吞噬消化。當(dāng)前3頁，總共39頁。（一）細(xì)胞凋亡的特征動物細(xì)胞凋亡的過程在形態(tài)學(xué)上可分為3個階段：①凋亡的起始：

細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)如微絨毛消失，細(xì)胞間接觸的消失，但細(xì)胞膜依然完整；線粒體大體完整；核糖體逐漸從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上脫離，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊腔膨脹，并逐漸與質(zhì)膜融合；染色質(zhì)固縮，形成新月形帽狀結(jié)構(gòu)等形態(tài)，沿著核膜分布。②凋亡小體的形成：

凋亡小體（apoptoticbody）是細(xì)胞凋亡過程中斷裂的大小不等的DNA或染色質(zhì)片段與細(xì)胞其它內(nèi)含物一起被反折的細(xì)胞質(zhì)膜包裹，在細(xì)胞表面產(chǎn)生許多泡狀或芽狀突起，然后逐漸分離，形成的單個圓形小體。③凋亡小體的被吞噬：

凋亡小體逐漸被鄰近的細(xì)胞識別并吞噬消化。當(dāng)前4頁，總共39頁。細(xì)胞凋亡的特征：

最重要的特征是凋亡過程中細(xì)胞膜保持完整，細(xì)胞內(nèi)含物沒有泄漏到細(xì)胞外，不引發(fā)機體的炎癥反應(yīng)(這也是細(xì)胞凋亡與壞死的主要區(qū)別)。另一個重要特征是染色質(zhì)DNA在核小體間發(fā)生斷裂，形成長度為200bp倍數(shù)的大小不等DNA片段。此外，凋亡通常是生理性變化，而細(xì)胞壞死是病理性變化。當(dāng)前5頁，總共39頁。細(xì)胞凋亡的過程及特征細(xì)胞皺縮凋亡小體吞噬當(dāng)前6頁，總共39頁。正常胸腺細(xì)胞（左）與凋亡胸腺細(xì)胞（右）比較（注意凋亡小體）當(dāng)前7頁，總共39頁。（二）細(xì)胞凋亡的檢測方法

形態(tài)學(xué)觀察：

DNA電泳：

DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法（TUNEL法）：

彗星電泳法（cometassay）：彗星電泳法的原理是將單個細(xì)胞懸浮于瓊脂糖凝膠中，經(jīng)裂解處理后，再進行短時間的電泳，并用熒光染料染色。凋亡細(xì)胞中的DNA降解片段在電泳時遷移較快，使細(xì)胞核呈現(xiàn)出一種彗星式圖案，而正常細(xì)胞核則保持圓球形。

流式細(xì)胞分析：用流式細(xì)胞儀檢出凋亡的亞二倍體細(xì)胞。

檢測膜成分變化：當(dāng)前8頁，總共39頁。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)凝集B：凋亡細(xì)胞核1、形態(tài)學(xué)觀察：染色法、透射和掃描電鏡觀察。A：正常細(xì)胞核當(dāng)前9頁，總共39頁。2、DNA電泳：DNA片段就呈現(xiàn)出梯狀條帶（DNAladder），即凋亡細(xì)胞的DNA由于在核小體間發(fā)生斷裂，產(chǎn)生200bp及其整倍數(shù)的片段，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳呈現(xiàn)出的梯狀條帶。當(dāng)前10頁，總共39頁。左：正常16體節(jié)期的斑馬魚胚胎在發(fā)育過程中有少量細(xì)胞發(fā)生凋亡；右：突變體的中樞神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生大量凋亡。3、DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法（TUNEL法）：即末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測定法，能對DNA分子中斷裂缺口中的3’-OH進行原位標(biāo)記。當(dāng)前11頁，總共39頁。（三）細(xì)胞凋亡的生物學(xué)及醫(yī)學(xué)意義細(xì)胞凋亡的意義：細(xì)胞凋亡對生物體的正常發(fā)育、自穩(wěn)態(tài)平衡、免疫耐受的形成、腫瘤監(jiān)控以及抵御內(nèi)外各種因素的干擾方面都起著非常關(guān)鍵的作用：如脊椎動物的神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，發(fā)育過程中手和足的成形過程，蝌蚪尾的消失，骨髓和腸的細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡的失調(diào)，包括不恰當(dāng)?shù)牡蛲龅募せ罨蛞种埔约斑^度凋亡等，都會引發(fā)多種疾病。如：對凋亡誘導(dǎo)因子敏感性的降低是多種腫瘤細(xì)胞的基本特征。當(dāng)前12頁，總共39頁。神經(jīng)元細(xì)胞凋亡使得神經(jīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞的數(shù)量相匹配。當(dāng)前13頁，總共39頁。細(xì)胞凋亡與手和足的成形

當(dāng)前14頁，總共39頁。蝌蚪尾的消失

當(dāng)前15頁，總共39頁。（四）細(xì)胞凋亡的分子機制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的因子大致可分為2大類：

①

物理性因子：包括射線（紫外線，γ射線等）、較溫和的溫度刺激（如熱激，冷激）等。

②化學(xué)及生物因子：包括活性氧基團和分子、Ca2+載體、激素、細(xì)胞生長因子、DNA和蛋白質(zhì)合成的抑制劑、細(xì)胞毒素和腫瘤壞死因子α（TNFα）等。當(dāng)前16頁，總共39頁。細(xì)胞凋亡的途徑主要包括2條：①

Caspase依賴性細(xì)胞凋亡途徑；②

非Caspase依賴性細(xì)胞凋亡途徑。當(dāng)細(xì)胞受到凋亡信號的刺激時，這2條途徑一般能夠同時被激活。細(xì)胞凋亡的途徑包括4個小階段：①接收凋亡信號→②凋亡相關(guān)分子的活化→③凋亡的執(zhí)行→④凋亡細(xì)胞的清除Caspases是cysteineasparticacidspecificproteases的縮寫，意指天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白酶，是一組存在于細(xì)胞質(zhì)中的與細(xì)胞凋亡有關(guān)的結(jié)構(gòu)類似的蛋白酶家族，能選擇性裂解靶蛋白中天冬氨酸（Asp）殘基后的肽鍵，使靶蛋白活化或失活。當(dāng)前17頁，總共39頁。生存因子通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族成員的活性及表達抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生生死抉擇：細(xì)胞凋亡的調(diào)控。1、存活信號；2、死亡信號當(dāng)前18頁，總共39頁。二、細(xì)胞壞死細(xì)胞壞死（cellnecrosis）：細(xì)胞受到急性意外強力損傷，如極端的物理、化學(xué)因素或嚴(yán)重的病理性刺激而發(fā)生的細(xì)胞死亡形式。細(xì)胞壞死時，Ca2+升高，ATP水平急降，引起一系列變化，如線粒體外膜腫脹而密度增加；細(xì)胞骨架破壞；溶酶體酶釋放；pH下降；核染色質(zhì)呈絮狀，DNA降解；蛋白質(zhì)合成減慢；最后細(xì)胞膜和細(xì)胞器破裂，大量水進入細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)含物釋放到胞外，引起周圍區(qū)域的炎癥反應(yīng)。當(dāng)前19頁，總共39頁。DNA損傷的積累致使PARP被活化，引發(fā)ATP水平急降導(dǎo)致細(xì)胞壞死。實際上，細(xì)胞壞死也可能是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)引發(fā)的增殖細(xì)胞發(fā)生的“程序性死亡”。細(xì)胞壞死可能在細(xì)胞的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。

聚腺苷二磷酸核糖合成酶（PARP)是DNA損傷的主要感受器。當(dāng)前20頁，總共39頁。細(xì)胞壞死與凋亡的形態(tài)區(qū)別當(dāng)前21頁，總共39頁。三、自噬性細(xì)胞死亡細(xì)胞自噬（autophagy）：是細(xì)胞通過溶酶體與大的雙層膜包裹的細(xì)胞自身物質(zhì)融合，從而降解細(xì)胞自身物質(zhì)的過程。通常，壽命比較短的蛋白質(zhì)（如調(diào)控蛋白）通過泛素-蛋白酶體系統(tǒng)進行降解；而壽命比較長的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)則通過細(xì)胞自噬途徑，由溶酶體進行降解。自噬小體（autophagosome）：細(xì)胞自噬的特征是細(xì)胞中出現(xiàn)大的雙層膜包裹的自噬泡，稱為自噬小體。自噬小體與溶酶體融合形成自噬溶酶體而消化（見圖16-10）。當(dāng)前22頁，總共39頁。細(xì)胞自噬的分子機制目前還不是很清楚：酵母細(xì)胞中磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）信號途徑是了解得比較明確的細(xì)胞自噬途徑（見圖16-11）。細(xì)胞自噬是促使細(xì)胞存活的自我保護機制：一是在非常時期為細(xì)胞生存提供原料或ATP；二是細(xì)胞自噬具有“自我清理”功能。細(xì)胞自噬可能是細(xì)胞凋亡的補充途徑：細(xì)胞依靠降解自身物質(zhì)來產(chǎn)生能量，但最終導(dǎo)致死亡。細(xì)胞自噬不需要吞噬細(xì)胞的協(xié)助就能進行自我銷毀，因此能夠在需要大量細(xì)胞死亡的變態(tài)過程中發(fā)揮作用。

當(dāng)前23頁，總共39頁。細(xì)胞自噬的特征及過程當(dāng)前24頁，總共39頁。酵母中細(xì)胞自噬的信號調(diào)控Akt＝PKBmTor＝PDK2參考圖9-30當(dāng)前25頁，總共39頁。四、植物細(xì)胞與酵母細(xì)胞的程序性死亡（一）植物細(xì)胞的程序性死亡（二）酵母細(xì)胞的程序性死亡當(dāng)前26頁，總共39頁。（一）植物細(xì)胞的程序性死亡植物的正常發(fā)育和對環(huán)境的反應(yīng)都離不開細(xì)胞程序性死亡在正常的植物發(fā)育進程，如導(dǎo)管的分化、通氣組織的形成、糊粉層的退化、絨氈層細(xì)胞的死亡、胚柄的退化、單性植物中花器官的程序性退化等，以及對環(huán)境脅迫，如缺氧、高鹽等的反應(yīng)和病原體入侵引發(fā)的過敏反應(yīng)中，均存在細(xì)胞程序性死亡過程。植物細(xì)胞程序性死亡的最大特點：死亡細(xì)胞的殘余物被細(xì)胞壁固定在原位，不是被周圍細(xì)胞吞噬，而是被自身液泡中的水解酶消化。當(dāng)前27頁，總共39頁。植物細(xì)胞程序性死亡的的形態(tài)學(xué)變化：①在過敏反應(yīng)中，可觀察到染色質(zhì)凝聚，DNA降解為50kb片段，細(xì)胞膜及液泡膜皺縮破裂，質(zhì)壁分離，末期細(xì)胞內(nèi)含物泄漏到質(zhì)外體；②在管狀細(xì)胞分化的凋亡過程中，細(xì)胞壁增厚，隨著液泡膜的破裂，核DNA被迅速降解，細(xì)胞內(nèi)含物被水解消化，最后僅剩下細(xì)胞壁。能夠誘導(dǎo)植物細(xì)胞發(fā)生程序性死亡的因素有多種：主要包括活性氧和植物激素等。水楊酸和NO能夠協(xié)同促進植物過敏反應(yīng)中的細(xì)胞程序性死亡；赤霉素和乙烯能夠促進細(xì)胞程序性死亡，而細(xì)胞分裂素和脫落酸則能夠抑制。當(dāng)前28頁，總共39頁。植物細(xì)胞程序性死亡的形態(tài)學(xué)模式圖A：在過敏反應(yīng)中B：在管狀細(xì)胞分化的凋亡過程中當(dāng)前29頁，總共39頁。（二）酵母細(xì)胞的程序性死亡能夠誘導(dǎo)酵母發(fā)生細(xì)胞程序性死亡的因素：低濃度的H2O2或醋酸，較高濃度的鹽或糖，植物抗真菌多肽等。酵母程序性死亡的形態(tài)學(xué)特征與動物細(xì)胞凋亡類似：DNA發(fā)生凝聚、邊緣化和斷裂，Cyt.c從線粒體釋放等。酵母細(xì)胞程序性死亡機制與動物細(xì)胞的凋亡機制有類似之處：如有caspases、凋亡激活因子或凋亡抑制因子等的類似物。當(dāng)前30頁，總共39頁。酵母程序性死亡的意義：

促進酵母的接合繁殖（未接合者死），形成更優(yōu)勢的“雜合體”；使有限的營養(yǎng)供給具有最佳適應(yīng)性的個體（“衰老”者死）；不同種酵母展開營養(yǎng)源“爭奪戰(zhàn)”時釋放毒素，導(dǎo)致其它種屬的酵母發(fā)生程序性死亡。當(dāng)前31頁，總共39頁。第二節(jié)細(xì)胞衰老一、細(xì)胞衰老的概念與特征二、細(xì)胞衰老的分子機制三、細(xì)胞衰老與個體衰老的關(guān)系當(dāng)前32頁，總共39頁。一、細(xì)胞衰老的概念與特征細(xì)胞衰老（cellageing，cellsenescence）：一般含義是復(fù)制衰老（replicativesenescence），指正常細(xì)胞經(jīng)過有限次數(shù)的分裂增殖后，停止生長，細(xì)胞形態(tài)和生理代謝活動發(fā)生顯著退化的過程。Hayflick界限（Hayflicklimit）：除了干細(xì)胞和癌細(xì)胞，正常的體外培養(yǎng)的細(xì)胞增殖能力和壽命不是無限的，而只能進行有限次數(shù)（約50次）的增殖。1958年Hayflick等人證實人成纖維細(xì)胞的復(fù)制能力是有限的，首次提出了細(xì)胞水平上的“衰老”現(xiàn)象。當(dāng)前33頁，總共39頁。對于體外培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞衰老研究，當(dāng)前常用的生物學(xué)特征有2個：①不可逆的生長停滯：細(xì)胞停止分裂；②衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（SAβ-gal）的活化：衰老細(xì)胞中存在的pH6.0條件下即表現(xiàn)活性的溶酶體β-半乳糖苷酶。當(dāng)前34頁，總共39頁。衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色區(qū)分年輕和衰老的人胚胎成纖維細(xì)胞IMR-90A：第20代的年輕細(xì)胞B：第55代的衰老細(xì)胞

當(dāng)前35頁，總共39頁。衰老細(xì)胞的形態(tài)變化結(jié)構(gòu)形態(tài)變化細(xì)胞核增大、染色深、核內(nèi)有包含物核膜內(nèi)陷染色質(zhì)凝聚、固縮、碎裂、溶解質(zhì)膜粘度增加、流動性降低細(xì)胞質(zhì)色素積聚、空泡形成線粒體數(shù)目減少、體積增大高爾基體碎裂尼氏體消失包含物糖原減少、脂肪積聚當(dāng)前36頁，總共39頁。二、細(xì)胞衰老的分子機制（一）復(fù)制衰老的機制（二）壓力誘導(dǎo)的早熟性衰老（三）單細(xì)胞生物的衰老當(dāng)前37頁，總共39頁。（一）復(fù)制衰老（RS）的機制線性染色體的“末端復(fù)制”問題：在DNA復(fù)制時，由于DNA聚合酶不能從頭合成子鏈，當(dāng)子鏈5’端與母鏈3’端配對的RNA引物被切除后，子鏈5’端會產(chǎn)生末端缺失，使得子鏈的5’端隨著復(fù)制次數(shù)的增加而逐漸縮短。端