基因工程的補充第1頁/共15頁補充第2頁/共15頁載體DNA用BamHⅠ切割同一限制酶切位點連接

GGATCCCCTAGGBamHⅠ切割反應+目的基因用BamHⅠ切割載體DNA用BamHⅠ切割GCCTAGGATCC

G載體DNA用BamHⅠ切割目的基因用BamHⅠ切割T4DNA連接酶15oC重組體載體自連目的基因自連第3頁/共15頁議一議2、能否用SARS病毒作為基因載體？3、作為載體，若沒有切割位點將怎樣？4、攜帶目的基因的載體是否進入了受體細胞，如何鑒定？5、假如目的基因導入受體細胞后不能復制，將怎樣？1、從化學本質來看，載體應該是什么？雙鏈DNA不能不能進行DNA的重組載體上應有標記基因可能造成基因丟失第4頁/共15頁

“λ噬菌體的衍生物”的解釋由于野生型λ噬菌體DNA對大多數目前在分子克隆中常用的限制酶有多個切點，而且有些位點恰巧定位于與噬菌體生長繁殖關系密切的必需基因之中，這些位點的剪切重組必然嚴重影響噬菌體的繁殖。因此野生型λDNA不能直接用作載體而需經過改造才能成為有價值的克隆載體。天然λ噬菌體載體改造的關鍵是去除或改變其基因組必需區段內多余的限制酶切位點。改造方法包括點突變、基因組的置換和缺失。由天然λ噬菌體改建獲得的就是λ噬菌體的衍生物。第5頁/共15頁p7思考與討論：1。提示：不能。因為一般基因有上千個堿基對2.提示：可能是剪切位點或連接位點選得不對（也可能是其他原因）第6頁/共15頁補：原核細胞的基因結構非編碼區非編碼區編碼區編碼區上游編碼區下游與RNA聚合酶結合位點啟動子終止子RNA聚合酶能夠識別調控序列中的結合位點，并與其結合。

轉錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。

轉錄完畢后，RNA鏈釋放出來，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來。第7頁/共15頁①不能轉錄為信使RNA，不能編碼蛋白質。：能轉錄相應的信使RNA，能編碼蛋白質編碼區非編碼區原核細胞的基因結構②有調控遺傳信息表達的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區上游的RNA聚合酶結合位點。非編碼區非編碼區編碼區編碼區上游編碼區下游啟動子終止子第8頁/共15頁補：真核細胞的基因結構編碼區非編碼區非編碼區與RNA聚合酶結合位點內含子

外顯子

能夠編碼蛋白質的序列叫做外顯子不能夠編碼蛋白質的序列叫做內含子啟動子終止子編碼區上游編碼區下游內含子：外顯子：第9頁/共15頁真核細胞的基因結構編碼區非編碼區外顯子：能編碼蛋白質的序列內含子：不能編碼蛋白質的序列：有調控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區上游的RNA

聚合酶結合位點。非編碼序列：包括非編碼區和內含子編碼區非編碼區非編碼區與RNA聚合酶結合位點內含子外顯子啟動子終止子編碼區上游編碼區下游第10頁/共15頁2.基因文庫的構建方法供體細胞中的DNA許多DNA片段運載體限制酶與載體連接載入受體細胞產生特定性狀導入外源DNA擴增目的基因分離(一)從基因文庫中獲取目的基因一、目的基因的獲取基因工程的基本操作程序①鳥槍法(直接分離法)第11頁/共15頁

以目的基因轉錄成的信使RNA為模板，反轉錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA單鏈DNA反轉錄酶DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)2.基因文庫的構建方法(一)從基因文庫中獲取目的基因一、目的基因的獲取基因工程的基本操作程序②反轉錄法第12頁/共15頁③根據已知的氨基酸序列合成DNA法

根據已知蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結構基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結構基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學合成(一)從基因文庫中獲取目的基因一、目的基因的獲取基因工程的基本操作程序第13頁/共15頁上述三種目的基因提取的方法有何優缺點？優點缺點鳥槍法反轉錄法根據已知氨基酸合成DNA法操作簡便廣泛使用工作量