第二章血液分析儀檢驗本章目錄第一節(jié)血液分析儀檢測原理第二節(jié)儀器分析臨床應(yīng)用第三節(jié)儀器安裝、使用、保養(yǎng)第四節(jié)校準、性能評價及比對第五節(jié)檢驗結(jié)果的質(zhì)量保證第一節(jié)血液分析儀檢測原理

血液分析儀（hematologyanalyzer,HA）：臨床血液一般檢查最常用儀器。1953年美國Coulter申請了“粒子計數(shù)法”的技術(shù)專利，并成功研發(fā)了世界上第一臺電阻抗式血細胞計數(shù)儀。血細胞計數(shù)功能兩大功能白細胞分類功能第一節(jié)血液分析儀檢測原理

血細胞具有相對非導(dǎo)電性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細胞通過計數(shù)小孔時，可引起小孔內(nèi)、外電流或電壓的變化，形成與血細胞數(shù)量相當、體積大小相應(yīng)的脈沖信號，從而對血細胞進行計數(shù)，并根據(jù)體積大小間接區(qū)分出細胞群。此原理又稱為庫爾特原理（Coulterprinciple）。一、電阻抗檢測原理細胞計數(shù)池中，小孔內(nèi)外兩個電極和稀釋液構(gòu)成一個電流回路，在負壓作用下，細胞通過小孔，電極能感應(yīng)到一個瞬間的電阻變化，并將其轉(zhuǎn)換成脈沖，脈沖的數(shù)量代表細胞數(shù)量，脈沖大小反映細胞體積大小。(一)血細胞計數(shù)原理

（二）血紅蛋白測定原理在被稀釋的血液中加入溶血劑后，使紅細胞釋放出血紅蛋白，后者與溶血劑結(jié)合形成血紅蛋白衍生物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)，在特定波長（一般在530～550nm）下比色，根據(jù)吸光度的變化儀器便可顯示血紅蛋白濃度。稀釋后的血液經(jīng)溶血素處理后，紅細胞迅速溶解，白細胞膜通透性改變使胞質(zhì)經(jīng)細胞膜滲出、脫水，胞膜緊裹在細胞核或顆粒周圍。脫水后的白細胞體積與其自然體積無關(guān)，取決于脫水后白細胞內(nèi)有形物質(zhì)的多少。

（三）白細胞分群原理根據(jù)電阻抗原理，不同體積的白細胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖大小有明顯的差異。依據(jù)脈沖的大小，電阻抗法血細胞分析儀可對白細胞進行分群。

（三）白細胞分群原理

三分群法的第一群為小細胞區(qū)，體積為35～90f1，主要為淋巴細胞；第二群為中間細胞區(qū)也稱單個核細胞區(qū)，體積90～160fl，包括幼稚細胞、單核細胞、嗜酸性細胞、嗜堿性細胞；第三群為大細胞區(qū)，體積160f1以上，主要為中性粒細胞。

（三）白細胞分群原理

（三）白細胞分群原理電阻抗法白細胞三分群示意圖

（一）激光散射法將細胞懸液注入鞘液流中央，單個細胞沿著懸液和鞘液流兩股液流整齊排列，以恒定流速定向通過石英毛細管。當細胞通過激光束被照射時，可阻擋或改變激光束的方向，產(chǎn)生與其特征相應(yīng)的各種角度的散射光。放置在石英毛細管周圍不同角度的信號檢測器可接收特征各異的散射光。二、光（化）學檢測原理

（一）激光散射法

（二）分光光度法主要用于血紅蛋白測定。

紅細胞經(jīng)溶血劑溶解釋放出Hb,并與溶血劑有關(guān)成分形成Hb衍生物，在540nm特定波長下比色，吸光度與Hb含量成正比，可直接反映Hb濃度。

現(xiàn)代血液分析儀主要綜合應(yīng)用了電學和光學2大原理，用以測定血液有形成分（細胞）和無形成分（血紅蛋白）。體積(volume,V)電導(dǎo)(conductivity,C)光散射(scatter,S)應(yīng)用電阻抗原理測量細胞體積采用高頻電磁探針測量細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如細胞核、細胞內(nèi)顆粒采用激光源單色光直接掃描細胞，產(chǎn)生不同角度散射光，提供細胞形態(tài)及胞核結(jié)構(gòu)等光散射信息，鑒別粒細胞。體積、電導(dǎo)和光散射（VCS）法三、聯(lián)合檢測原理（一）體積、電導(dǎo)和光散射（VCS）法

當細胞被激光束照射時，細胞因體積大小、細胞成分、細胞核形狀、染色情況等各種特性的不同，可阻擋或改變激光束的方向，產(chǎn)生與細胞特征相應(yīng)的各種角度的散射光。檢測不同角度的散射光信號，可分辨出各類細胞。（二）光散射與細胞化學法1．過氧化物酶染色通道2．嗜堿性粒細胞/核分葉通道

應(yīng)用固體激光流式細胞熒光技術(shù)，多角度檢測白細胞和分類。（三）多角度偏振光散射法1．白細胞分類通道（DIFF通道）2．白細胞/嗜堿性粒細胞（WBC/BASO）通道3．未成熟髓細胞信息（IMI）通道

采用半導(dǎo)體激光流式細胞技術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)進行白細胞計數(shù)和分類。（四）電阻抗、射頻、流式細胞術(shù)與核酸熒光染色法1/11/2023132

在流式通道中有2個鞘流裝置，細胞經(jīng)第1束鞘流后通過阻抗微孔測定細胞的真實體積，然后經(jīng)第2束鞘流后到達光窗，測定細胞的光吸收，分析細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。（五）雙鞘流技術(shù)和細胞化學染色法第二節(jié)儀器分析臨床應(yīng)用1/11/20231/11/2023血細胞分析儀各項檢測參數(shù)及臨床應(yīng)用一血細胞分析儀細胞分布圖及臨床應(yīng)用二血細胞分析儀常見報警和干擾因素三血細胞分析儀檢測結(jié)果顯微鏡復(fù)查規(guī)則四第二節(jié)血細胞分析儀分析臨床應(yīng)用

（一）紅細胞參數(shù)及臨床應(yīng)用一、血細胞分析儀各項檢測參數(shù)及臨床應(yīng)用

RDW是反映紅細胞體積大小異質(zhì)性的參數(shù)，以標準差或變異系數(shù)來表示（CV%），有助于貧血的診斷與鑒別診斷。⑴紅細胞體積分布寬度（RDW）

HDW是反映紅細胞內(nèi)Hb含量異質(zhì)性的參數(shù)，用單個紅細胞Hb含量的標準差表示。（2）紅細胞血紅蛋白分布寬度（HDW）（二）白細胞參數(shù)（三）血小板參數(shù)血細胞直方圖以測定的細胞體積（大小）為橫坐標，細胞出現(xiàn)的相對頻率（數(shù)量）為縱坐標，可繪制的血細胞直方圖，主要包括白細胞、紅細胞和血小板三種直方圖。二、血細胞分析儀細胞分布圖及臨床應(yīng)用正常紅細胞直方圖幾乎為兩側(cè)對稱、較狹窄的正態(tài)分布曲線，主要分布在50～200fl區(qū)域。（一）紅細胞直方圖的臨床應(yīng)用%

100200300400(fl)正態(tài)分布,峰頂在82~96fl電阻抗型血細胞分析儀白細胞直方圖為具有3個峰的光滑曲線，從左至右分別為：為淋巴細胞（小細胞群）、單個核細胞（中間細胞群）和中性粒細胞（大細胞群）或相當大小的細胞。（二）白細胞直方圖的臨床應(yīng)用35—90f1160fl以上90～160f1正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布，主要集中在2～30fl范圍內(nèi)，主峰在7.6～13.1fl之間。（三）血小板直方圖的臨床應(yīng)用

（三）血小板直方圖的臨床應(yīng)用

102030(fl)%呈偏態(tài)，峰頂5~10fl不同的檢測原理，坐標上的散點所在象限平面圖上的位置，如上下（高低）、左右、前后（可重疊）或散點群的疏密，均與相應(yīng)類別的細胞形態(tài)、體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、胞核、胞質(zhì)及胞質(zhì)顆粒數(shù)量等特性密切相關(guān)。（四）散點圖的臨床應(yīng)用1.白細胞散點圖2.紅細胞散點圖三種形式圖形符號文字標本自身檢測環(huán)境報警Text常見的干擾因素Text三、血細胞分析儀常見報警和干擾因素2005年，國際實驗室血液學學會提出了顯微鏡復(fù)查的41條建議性標準。但由于各臨床檢驗室使用的儀器不同，服務(wù)的患者人群也有差異，“41條建議性標準”尚處于實踐檢驗中，目前還沒有被公認的復(fù)查標準。各實驗室可根據(jù)ISLH建議的41條復(fù)檢規(guī)則，并結(jié)合具體情況來制訂切合實際、可操作的復(fù)查標準。四、血細胞分析儀檢測結(jié)果顯微鏡復(fù)查規(guī)則血液分析儀檢測結(jié)果手工涂片復(fù)查真陽性標準第三節(jié)血細胞分析儀安裝、使用、保養(yǎng)和維護1/11/2023工作環(huán)境工作電壓儀器安裝儀器擺放檢測原理操作程序日保養(yǎng)周保養(yǎng)月保養(yǎng)檢測器維護液路維護機械傳動部分維護安裝使用保養(yǎng)維護第三節(jié)血細胞分析儀安裝、使用、保養(yǎng)和維護第四節(jié)血細胞分析儀校準、性能評價及比對1/11/2023第四節(jié)血細胞分析儀校準、性能評價及比對1/11/2023總體評價性能評價1．校準條件2．校準品定值3．建立儀器校準和校準驗證程序4．保證試劑質(zhì)量應(yīng)對同一實驗室不同血液分析儀測定結(jié)果進行比對，相關(guān)性良好后，定期校準一臺性能較好的血細胞分析儀，將它作為參比儀器校準性能評價比對第五節(jié)血細胞分析儀檢驗結(jié)果的質(zhì)量保證1/11/2023分析前分析中分析后檢驗人員的要求合適的檢測環(huán)境合格的血液分析儀配套試劑合格的檢測標本儀器啟動室內(nèi)質(zhì)控標本檢測儀器清潔檢驗結(jié)果