1、蘆丁的純化及其含量測定【摘要】目的制備高純度蘆丁的目的是用作對照品或滿足其它特殊需要的試劑。方法從槐米中提取蘆丁，并將其制備成對照品。采用既簡便又經濟的酸提堿沉法從槐米中提取蘆丁，經過精致，別離得蘆丁對照品，并用一般方法、薄層層析法、核磁共振法進展鑒定，高效液相法測定其含量。結果經化學法、薄層層析法鑒定，核磁共振鑒定說明蘆丁樣品與蘆丁標準品圖根本一致；高效液相測得含量98.05%。結論此種實驗室制備蘆丁對照品的方法操作簡單易行，產品純度較高可作為對照品代替標準品用。【關鍵詞】蘆丁；別離；純化；高效液相色譜法；含量測定Abstrat：bjetiveTestablishtheethdsfrpuri

2、fiatin,identifiatinanddeterinatinfrutinreferenesubstane.ethdsExtratrutinfrSphrajapniaL.bythealkaliextratinandaidpreipitatin.Thenrefineentandseparatinftherutinreferenesubstaneasdne.Identifiedthesubstanebythenralay.TLandNR.HPLasusedtdeterinethententfrutin.ResultsAfteridentifiedbyheialay,TL,andNR,there

3、sultsshedthatthehartfthesaplefrutinandthehartfstandardsubstaneereunanius,theeanntentas98.05%.nlusinThisayfpreparingrutininthelabissipleandpratial.Theprdutsareverypure,sitanbeusedinplaefsubstanereplaedstandardsubstane.Keyrds：Rutin;Separatin;Purify；HPL；Deterinatin蘆丁是一種分布廣泛的黃酮類化合物，主要存在于槐米，蕓香，蕎麥，沙棘等植物。黃

4、酮類化合物在心腦血管疾病的治療上起到了舉足輕重的作用，蘆丁utin,又稱蕓香苷(rutnside)便是其中的一個典型代表，其效用同維生素P。能降低毛細血管通透性和脆性，促進細胞增生和防止血細胞凝聚以及抗炎、抗過敏、利尿、解痙、鎮(zhèn)咳，降血脂等方面的作用1，臨床上蘆丁主要用于高血壓病的輔助治療和用于防治因蘆丁缺乏所致的其它出血癥，如防治腦血管出血、高血壓、視網(wǎng)膜出血、紫癜、急性出血性腎炎、慢性氣管炎，血液浸透壓不正常恢復毛細血管彈性等癥，同時還用于預防和治療糖尿病及合并高血脂癥2，國內外醫(yī)藥工業(yè)中用蘆丁作原料消費蘆丁片、維腦路通(羥乙蘆丁)、蘆丁鎂、槲皮素等心血管藥物3。蕓香苷廣泛應用于醫(yī)藥，保健

5、食品和化裝品中。在食品工業(yè)中蘆丁除了可作保健品外，還可作為抗氧劑和天然食用黃色素。在化裝品行業(yè)，蘆丁是目前較為理想的一種天然廣譜防曬劑4，本實驗擬探究一種實驗室制備高純度蘆丁的方法，用作對照品或滿足其他特殊需要的試劑。1儀器與試劑1.1儀器高效液相(aters)，電子分析天平(型號BS124S)，JB202-電熱恒溫枯燥箱(上海金忠科學儀器制造)，DL-360超聲波清洗皿(浙江象山縣石浦海天電子儀器廠)，TGL-16臺式高速離心機(上海冠戈實業(yè)制造)，紫外分光光度計2401P-日本島津。1.2試劑蘆丁標準品(中國藥品生物制品鑒定所)，甲醇為色譜醇，其它試劑均為分析醇，水為重蒸水。1.3材料購于

6、石河子大學一附院藥房經鑒定無誤。2方法與結果2.1蘆丁的提取精制采用酸提堿沉法，稱取槐米粉，置500l燒杯中，加沸水、硼砂攪拌，于石棉網(wǎng)上加熱至微沸，然后參加適量飽和石灰水溶液，保持pH89之間，并不斷地攪拌，微沸30in后，過濾，濾液搜集，濾渣在置于500l燒杯中，加沸水l，硼砂攪拌，于石棉網(wǎng)上加熱至微沸，然后在參加適量飽和石灰水溶液，調pH89之間，并不斷的攪拌，微沸30in后，過濾，濾渣棄去，濾液合并，待濾液溫度降至6070之間時用濃鹽酸調pH45之間，當溫度降至室溫時放入冰箱靜置12h，使沉淀完全，抽濾，沉淀用蒸餾水洗至中性，枯燥得粗品蘆丁，蒸餾水重結晶，得精制蘆叮2.2蘆丁的純化用葡

7、聚糖凝膠柱進一步別離純化，稱取精制蘆丁0.25g，用少量甲醇使之溶解，參加葡聚糖凝膠柱頂，用甲醇洗脫，試管搜集，15l/管，共搜集22管，用聚酰胺膜鑒定蘆丁并作如下合并搜集液。第1瓶110管，第2瓶1122管；然后水浴濃縮至原液的一半，冷置，僅第一瓶出現(xiàn)黃綠色微細針狀結晶，再繼續(xù)濃縮，60枯燥即得蘆丁純品。2.3蘆丁的鑒定2.3.1一般鑒定本品為黃色結晶粉末，熔點經梯勒熔點管測定熔程為188190，與文獻報道一致；鹽酸鎂粉反響呈陽性；氨性氯化鍶反響呈陽性顯示有鄰二酚羥基；鋯鹽枸櫞酸反響呈陽性顯示有3及5-羥基存在。水解液用薄層層析鑒定，顯示有葡萄糖及鼠李糖存在。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3.2

8、薄層層析鑒別純度用35的聚酰胺膜，選3種展開劑：分別為A，丙酮水31；B，氯仿甲醇54；，醋酸乙酯甲酸水811。氨熏后噴顯色劑3%的三氯化鋁顯色，經重結晶的蘆丁樣品在上述3種展開劑中均顯兩個斑點，Rf值較低的點與槲皮素標準品的Rf值相等，因此證明蘆丁中含有少量槲皮素。繼續(xù)用葡聚糖凝膠別離純化，結果蘆丁在上述3種展開劑中，只顯一個斑點。結果見圖1。2.3.3氫核磁共振法鑒定由圖可說明蘆丁樣品與蘆丁標準品圖一致，結果見圖2。2.4蘆丁含量測定(HPL法)2.4.1色譜條件流動相為甲醇4.3%乙酸(5545)，應用前經混合纖維素酯微孔濾膜過濾，超聲脫氣，流速為1.0l/in，進樣量為20l，檢測波長

9、為254n，蘆丁的出峰時間為34in，該色譜條件下對照品及樣品的色譜圖結果見圖34。2.4.2最大波長的選擇配置蘆丁標準品溶液，濃度為0.00204g/l在紫外分光光度計中掃描得如下列圖：結果顯示最大吸收波長有214，254，360n，由于在214n處干擾因素多，因此高效液相選擇在254n處測定。結果見圖3。2.4.3供試品溶液的配制精細稱取經變色硅膠枯燥的蘆丁標準品0.01005g，蘆丁樣品1號(為經過葡聚糖凝膠柱別離的)0.01005g，蘆丁樣品2號(未經葡聚糖凝膠柱別離的)0.01002g，分別置于50l容量瓶內，用甲醇定容，在超聲清洗皿中超聲3in，使之全部溶解，然后在分別倒少量入EP

10、管中離心10in，12000r/in。得蘆丁標準品溶液濃度為0.201g/l，蘆樣1號濃度為0.201g/l，蘆樣2號濃度為0.2022g/l。2.4.4標準曲線的制備蘆丁標準品溶液的濃度為0.201g/l，將其稀釋成1，1/2，1/4，1/16，1/64，1/256系列濃度，編號為1，2，3，4，5，6，汲取20l進樣，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線如下，進展線性回歸處理，求出回歸方程：Y=4E+07X-2660.2，r=0.9996，濃度單位是g/l，峰面積的范圍在228710.5Vs7494036.5Vs內，結果說明蘆丁的在0.006281250.201g/l濃度范圍內，濃

11、度與峰面積呈良好的線性關系。結果見圖6。2.4.5樣品含量測定5將配制好的蘆丁樣品1號，2號進樣，測得峰面積，然后代入標準曲線得濃度。結果見表12。表1樣品1號含量測定結果略表2樣品2號含量測定結果略2.4.6加樣回收實驗分別取3份濃度的樣品1號溶液0.8l放入EP管中，在分別加標準品溶液0.1，0.2，0.3l，甲醇0.2，0.1，0l，定于1.1l，離心10in，12000r/in，結果見表3。表3回收率測定結果略2.4.7蘆丁樣品精細度實驗精細量取蘆丁樣品1號溶液1l放入EP管中，離心10in，12000r/in。共測5次。結果見表4。表4精細度實驗結果略2.4.8蘆丁樣品重現(xiàn)性實驗精細

12、量取蘆丁樣品1號溶液0.8l于EP管中，在加0.2l甲醇，分別做5份，離心10in，12000r/in。結果見表5。表5樣品重現(xiàn)性實驗結果略3討論3.1用酸提堿沉法提取蘆丁具有工藝簡單、效率高和較經濟等優(yōu)點，采用高效液相法測定蘆丁的含量，該法使用的試劑常見，方法準確、靈敏、線性范圍寬，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均能滿足要求。測得蘆丁的含量為98.05%，可以代替對照品測定物質的含量和滿足其它特殊需要的試劑。3.2在蘆丁的提取工藝中，由于用的是酸提堿沉法，所以參加的石灰水的量和濃鹽酸的量是本試驗的關鍵，當pH為10時，產品質量為1.5g，當pH為9時，產品質量為2.3g，當pH為8時，產品質量為1.97g，

13、當pH為7時，產品質量為1.10g。3.3經鑒定精致的蘆丁中含有少量槲皮素，再用葡聚糖凝膠柱進一步純化。葡聚糖凝膠對別離黃酮類化合物效果很好，此方法即簡便，又合適實驗室操作。實驗產品純度高，含量達98.05%，可代替蘆丁標準品測定蘆丁制劑中的蘆丁含量。3.4實驗中筆者發(fā)現(xiàn)蘆丁極易被氧化變色，要注意避光枯燥保存。3.5選擇沸水溶液提取以破壞酶，而且在槐米中果膠和黏液質較多。提取液通常因含有大量黏稠的雜質而難以過濾，所以本文直接用水加石灰乳提取蘆丁，方法更加有效，但應注意加硼砂以保護臨二酚羥基，而且整個過程對酸度控制要求較高。3.6柱溫對含量測定的影響較小，隨著柱溫的增加，保存時間有所縮短，峰的擴散有所改善，但對含量測定影響較校【參考文獻】1Patriz,R.etti,etal.,PreventinfDiabetesfInreasedAgingEffetnRatllagen-IinredFlureesenebyAinguanidneandRudin