1、時間：2021.03. 06賣臉四蛋勺酶活力的測定時間：2021.03. 06創作：歐陽道、賣唸目的1、了解蛋自酶活力測走的原理；2、拿握蛋勺酶活力測定的方比。二、賣驗原理養自酶淮一文條件下不僅能夠水鮮蠱自質中的肽 M,也能夠水鮮lit胺鍵和酯鍵，因此可用養勺質或人工 合成的眥胺及酯類化合楊作為底煬來測定養倉酶的話 力。本賣驗選用酪蛋自為底楊，測；t微生揚養自酶水解 肽鍥的活力。酪蛋自經養自酶作用后，陣鮮成柑對分子 質量較小的肽和氣基酸，淮.反應混合楊中加入三氣醋酸 洽液，才目對分子質量較大的養勺質和肽就沉淀下來，相 對分子質量較小的肽和氣基酸仍紹柱涿液中，涿解于三 氣醋酸溶液中的肽的數量正比

2、于酶的數量和反應時間。 A 280nm波長下測定涿液吸光度的增加，就可計算酶 的活力。三、賣驗試別微生揚卷勺酶萃取液（O.Olg/mlJ :稱取l.Og酶制 利，加100ml蒸館水攪拌30min,柱4C下離心分離 后，將上層請夜置于冰箔中保存，使用前科釋一走信 數；0.02mol/L確酸鹽緩沖液CpH7.5J ；1 %酪蛋勺涿液：取l.Og酪蛋自，加100ml 0.2mol/L 確酸鹽緩沖液（PH7.5丿,加熱并攪拌使它完全分散， 然后置于冰箱中保存；5%三氣睹酸fTCAJ涿液。四、賣驗步驟1、將5%TCA涿液和1%酪養自涿液柱37C下保溫。2、取叨支15ml具塞試管，分別標上記號Al、AO、

3、B1 和BOo亦A1和A0試管中各吸入0.20ml酶液，亦B1 和B0試管中各浹入0.40ml酶液，分別用0.2mol/L璘酸 鹽緩沖液定彖至2.00mlo柱 A0和B0試管中各浹入 6.00ml5%三氣睹酸嫁液，上述四支忒管都置于37C水 浴中保溫。3、柱各試管中狹入2.00ml 1%酪養勺涿液，恵37C下 保溫lOmin（準確計時丿后，再向A1和B1試管中吸入 6.00ml5%三氣醋竣溶液4、將試管從水浴中取出，柱寶溫下放置lh,用少量上 請浚潤濕濾紙j后過謔、，保毎謔、出液。5、淮.280nm波長下，分別以A0和B0誼液為空自，測X A1和B1濾液的狹光度。五、計算1、柱規定的賣驗條件下

4、，以毎分鐘增加0.001狹光度 定義為一個酶單佞2、每克酶制利中酶活力的計算： A X 1000/(t X w) 酶活力單住/克酶制劑 式中，AA樣與空勺吸光度差值卩A1和B1 的狹光值丿；t酶作用時間(本賣驗為lOminJ ； w反應中酶的用量，g六、說朗1、微生物蛋自酶粗提取液柱較寬廣的PH施幽表現出 活力，但是往接近中性條件下最有最嵩活力。2、微生楊蛋勺酶柱45C以下可保持較長時間的稔定 性。七、思考題1、蛋勺酶有哪幾類？2、影響酶活力的因素有哪些？3、使用紫外分光光度計時應注意哪些問題？六、數捱記錄與處理A1 = 0.279 Bl =0.573 酶含量為 0.001 g/ml酶活力 1

5、 = AA x 1000 /(t x w)=0.279x1000/10/0.001/0.20=1.395X105 酶活力單 住/克酶制別酶活力 2= A A x 1000 / (t x w)= 0.573x1000/10/0.001 /0.40= 1.4325 x 1 O酶活力 單伎/克酶制劉平均值=C1.395x105+ 1.4325x105J =141375 酶活力 單住/克酶制劑平均相對相差=f 143250- 139500J /141375 x 100%=2.65%七.思考題1、餐自醉有哪幾類？答：按養勺酶水鮮蛋勺質的方式：A內肽酶：切 開蛋勺質分子內部肽縫，生成相對分子質量較小的多肽

6、 類；B外肽酶：切開蛋勺質或多肽分子氣基或象基末端 的肽錢，而游富出氣基酸的酶類；C水鮮養勺質或多肽 的酯縫；D水鮮養勺質或多肽的猶胺鍵。按酶的來源 可分為：動揚蛋自酶、植物蛋合酶、微生物蛋勺酶微生楊養勺酶又可分為：細菌蛋自酶、霉苗蛋合酶、 酵母蛋合酶和放線茵蛋勺酶按妥自酶作用的最適.PH可以分為fAj PH2.55.0的 酸性蛋自酶，CBJ PH9.510.5的喊性養臺酶，(C) PH78的中性蛋合酶2、影響酶活力的因素有呷些？答：酶活力是酶傕化某一化學反應的速率來表示 的。酶活力的大小即酶含量的多少，可以用毎克酶制劑 或每毫升酶制劉令有多少酶單住來表示，酶活力的測走 也就是測定酶促反應的速

7、率。酶濃度對酶活力的影響：酶促反應速率與酶分子 的濃度呈正比，在一定范爾內，當底楊分子濃度足夠 時，酶分子越多，底揚轉化的速度越快。底物濃度對酶活力的影峋：若酶的濃度為良值， 底揚的起始濃度越低時，酶促反應速度與底物濃度呈正 比，即隨底揚濃度的增加而增加。多所有的酶與底場結 合生成中間產物后，即使再增加底物濃度，中間產物濃 度也不會增加，酶促反應速度也不會增加。溫度對酶活力的彩響：在適宜的溫度范爾內，酶 促反應速度隨溫度升寓而增加，超過最適反應溫度，酶 活力將會下陣。PH對酶活力的影響：酶征最適PH范爾內表現出 活性，大于或小于最適PH,都會陣低酶活性。激話劑對酶活力的影響：某些無機陽禽子、陰富 子、有機化合物可作為激活利，能夠激活酶，使其表現 出催化活性或強化其傕化活性。抑制劑對酶活力的影響：酶的抑制利能夠減弱、 抑制芯至玻壞酶的活力，它可陣低酶促反應速度。3、後用紫外分光光度計對應注意鄧些問題？答：使用的比色皿必須潔凈，并注意配對使用。 手指應拿毛玻璃面的兩側，裝盛樣品量以2/3為度。it 光面要用擦鏡紈擦拭干