1、血小板糖蛋白特異性抗體在骨髓增生異常綜合征患者中的表達及其意【摘要】本研究討論血小板糖蛋白特異性抗體在骨髓增生異常綜合征ds患者發病中的作用。采用改良的aipa法檢測血漿血小板糖蛋白特異性抗體(抗gpb/a抗體和抗gpb/抗體)。假設患者的d值大于正常d值的均數+3倍標準差那么為陽性。結果說明：ds組總陽性率為16.67%(5/30)，itp組總陽性率為46.67%(14/30)，兩者之間差異有顯著性p0.05。結論：部分ds患者的糖蛋白特異性抗體為陽性，這說明部分ds患者的血小板減少與免疫因素有關；血小板糖蛋白特異性抗體所致的血小板破壞在ds患者的血小板減少中可能具有一定作用，這為ds患者的

2、免疫抑制劑治療提供了新的根據。【關鍵詞】骨髓增生異常綜合征血小板特異性抗體expressinfspeifiantibdiesagainstplateletglyprteinsinpatientsithdsanditssignifianedepartentfheatlgy,1departentfbstetris,2departentfediallabratryexainatin,thesendhspitalfshandnguniversity,jinan250033,hinakeyrdsyeldysplastisyndre;plateletspeifiantibdy;glyprteinjexph

3、eatl2022;15(1):95-98材料和方法一般資料血小板糖蛋白特異性抗體的檢測血漿的別離及保存edta抗凝血2l離心后取上清，置80保存。多孔板抗體包被準備包被液10l,抗體終濃度為3g/l，加樣,100l/ell，塑料薄膜覆蓋,4過夜，用0.01l/lpbs+teen洗滌2次，每孔參加封閉液(0.01l/lpbs+teen+3%bsa)200l,置室溫下30分鐘，去除封閉液，控干，即用。單克隆抗體俘獲制備單克隆抗體sz2或hip8稀釋液(4g/l)，每孔參加50l單克隆抗體稀釋液，室溫孵育60分鐘(搖床)，用pbs+teen洗板3次，待用于aipa。改良aipa取型全血50l,edt

4、a抗凝，離心別離血小板，用pbs+edta洗滌2次，以2lpbs+edta重新懸浮血小板，調節血小板濃度至1109/l，移至ep管中,每管血小板1108個，每管參加100l待測血漿,在室溫下孵育60分鐘，pbs+edta洗滌3次，然后用溶解緩沖液(含蛋白酶抑制劑)110l溶解血小板,置于搖床上,4孵育30分鐘,離心30分鐘，取100l上清液以400l稀釋緩沖液稀釋，加樣于羊抗鼠俘獲單克隆抗體包被的96孔板上,設雙復孔,每孔參加100l稀釋上清，室溫孵育60分鐘(搖床)，0.01l/lpbs+teen洗滌4次，每孔參加100l堿性磷酸酶標記的羊抗人igg13000，室溫孵育60分鐘(搖床)，0.

5、01l/lpbs+teen洗滌6次，加100lpnpp/底物緩沖液,孵育15-60分鐘,至顯色，全自動酶標儀分別于405n、495n波長處觀察結果，405n處d值減去495n處d值為患者的d值,取2復孔的平均值為測定值，每板設4個正常對照,假設患者的d值大于正常d值的均數+3倍標準差那么為陽性。統計學處理結果以陽性率表示。兩個率的比較采用卡方檢驗。d值采用t檢驗。結果各組血漿gp特異性抗體程度抗gpb/ad值：ds組為0.2730.026；itp組為0.4870.732；正常對照組為：0.2640.013。抗gpb/d值：ds組為0.3530.032；itp組為0.5390.733；正常對照組

6、為：0.3190.024。抗gpd值ds組與正常對照組相比，p0.01，差異具有顯著性；itp組與正常對照組相比，p0.05，無顯著性差異表1。血漿gp特異性抗體aipa法檢測結果血漿gp特異性抗體ds組中抗gpb/a陽性者4例，抗gpib/陽性者2例，雙陽性者1例；itp組中抗gpb/a陽性者10例，抗gpib/陽性者7例，雙陽性者3例；正常對照組陽性者為0表2。抗gpb/a特異性抗體陽性率ds組為13.33%(4/30)，itp組為33.33%(10/30)，兩組比較：2=3.35，p0.05，差異無顯著性。與正常對照組比較：ds組p0.05，差異無顯著性；itp組p0.05，有顯著性差異

7、表2。抗gpb/特異性抗體陽性率ds組為6.67%(2/30)，itp組為23.33%(7/30)，兩組比較：2=2.09，p0.05，差異無顯著性。與正常對照組比較：ds組和itp組p值均大于0.05，無顯著性差異表2。總陽性率ds組為16.67%(5/30)，itp組為46.67%(14/30)，兩組比較：2=6.239，p0.05，兩組之間有顯著性差異。與正常對照組比較：ds組p0.05，差異無顯著性；itp組p0.05，有顯著性差異。表2。討論在巨核細胞和血小板外表存在著大量的糖蛋白(gp)，其中最重要的是gpb/a、gpib/。這些gp分子不僅是血小板發揮功能所必需的成分，而且可以作

8、為血小板自身抗體的靶抗原。改良aipa法對免疫性血小板減少的的診斷具有極高的特異性,可達95%，對血漿gpb/a和gpib/抗體檢測的敏感性達40%2。近年來的研究說明，部分ds患者存在自身抗體和單克隆免疫球蛋白病，表現為多種免疫球蛋白程度升高和多種自身抗體的產生3，4，提示部分ds患者存在體液免疫方面的異常。ds的血小板減少的原因通常認為是中樞性的，而burgeis等5對61例血小板減少的ds患者的血小板壽命進展了觀察，結果發現15%9/61的患者血小板壽命縮短3.5天，對其中6例病人行脾臟切除術，術后患者血小板均增高。這些結果提示，在某些病例可能同時有外周血血小板降低是由血小板破壞造成的，

9、那么，外周血小板的破壞是否有免疫因素參與、與血小板gp特異性自身抗體是否有關，目前國內有關這方面的研究較少。為了明確血小板gp特異性自身抗體是否與ds患者的血小板減少有關。我們應用先進的改良aipa法檢測了30例ds患者血漿中血小板gp特異性自身抗體抗gpb/a抗體和gpib/抗體的表達。結果顯示，部分ds患者血漿中血小板gp特異性抗體為陽性，提示部分ds患者的血小板減少與免疫因素有關,是由血小板gp特異性抗體所致的血小板破壞造成的。這種破壞可能通過血小板gp特異性自身抗體與血小板膜外表糖蛋白結合完成的，一方面被抗體包被的血小板可通過巨噬細胞上的f受體與巨噬細胞相連，被巨噬細胞吞噬；另一方面抗

10、原抗體復合物可激活補體，直接破壞血小板，或通過3b與巨噬細胞上的3b受體結合，使血小板破壞增多。另外，巨核細胞外表亦表達gpb/a和gpib6，自身抗體與巨核細胞上相應的抗原結合，可干擾巨核細胞的增生、成熟和血小板的產生，或在骨髓內血小板即被活化的補體或巨噬細胞破壞，結果不僅使血小板破壞增加，而且使血小板生成減少7。這為ds的免疫抑制劑治療提供了新的根據。本實驗結果顯示，ds組與itp組抗gp特異性抗體總陽性率的比較有顯著性差異，提示改良aipa法檢測患者血漿中血小板gp特異性抗體的表達有助于鑒別免疫性血小板減少和非免疫性血小板減少。致謝感謝山東大學齊魯醫院侯明教授及朱媛媛教師的支持與幫助！【參考文獻】5burgeise,auliert,rse,etal.rlefsplenetyinthetreatentfyeldysplastisyndresithperipheralthrblytpenia:areprtnsixases.leukeia,2001;15:950-9536vainhenker,deshapsjf,bastinj,etal.tnlnalant