1、青蒿葉片愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生【關(guān)鍵詞】青蒿；植物激素；愈傷；再生Keyrds：ArteisiaannuaL；Planthrnes；allus；Regeneratin青蒿(Arteisiaannua)L，又名黃花蒿，是菊科一年生藥用草本植物。提取物青蒿素對(duì)腦瘧疾和氯喹瘧疾具有高效低毒的抗瘧性能，H已經(jīng)認(rèn)定復(fù)方青蒿素成藥為目前最平安有效的抗瘧藥。如今世界上已經(jīng)有51個(gè)國(guó)家和地區(qū)在H推薦下將其列為抗瘧指定用藥。這使得全球?qū)η噍锼卦系男枨竺蜐q，從2022年開(kāi)場(chǎng)已出現(xiàn)了從原料到成品藥各個(gè)環(huán)節(jié)的嚴(yán)重供貨短缺1。目前該藥物雖然能人工合成，但本錢(qián)很高，未能實(shí)際消費(fèi)2，工業(yè)上主要從青蒿植株中提齲目前青蒿因

2、長(zhǎng)期處于野生狀態(tài)，未能選育出高含量的品種，青蒿素含量極低，而且其含量還受土壤營(yíng)養(yǎng)、地理環(huán)境、氣候等多種因素影響34，大大增加了該藥的消費(fèi)本錢(qián)。為此，高青蒿素含量的青蒿品種選育工作重要性日益凸顯，而組織培養(yǎng)正是現(xiàn)代育種技術(shù)的一個(gè)重要組成局部，本實(shí)驗(yàn)初步討論了青蒿葉片的愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生技術(shù)，為進(jìn)一步的育種研究打下基矗1材料與方法1.1材料酉陽(yáng)本地消費(fèi)用種，由重慶市中藥研究院生藥栽培室提供。1.2方法1.2.1培養(yǎng)基配制根本培養(yǎng)基為培養(yǎng)基，附加蔗糖30g/L,瓊脂15g/L，pH調(diào)節(jié)至5.8。附加激素如下：12IAA0.1g/L+NAA1.0g/L1.2.2外植體處理剪取20高青蒿苗上的幼嫩葉

3、片，剪成0.52的小塊，無(wú)菌水中浸泡3h，75%乙醇漂洗1in，于5%次氯酸鈉溶液中浸泡3in，無(wú)菌水漂洗4次，接種。培養(yǎng)條件為25，2000Lx光照、14h/d。2結(jié)果與分析觀察發(fā)現(xiàn)，不同激素組合對(duì)青蒿的愈傷誘導(dǎo)、植株再生和生根均有顯著影響。2.1愈傷組織誘導(dǎo)接種后的葉片呈灰綠色水浸狀，貌似死亡，培養(yǎng)基2和5上的葉片，在接種后第5天葉片邊緣開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)鮮綠色的顆粒，直徑約0.51.0左右，呈致密狀態(tài)，10d后，愈傷生長(zhǎng)到達(dá)頂峰，在多處葉片邊緣出現(xiàn)。培養(yǎng)基5上的愈傷在接種后15d開(kāi)場(chǎng)分化出綠色叢生芽點(diǎn)，但只停留在這一階段，不能進(jìn)一步分化成苗。培養(yǎng)基2上的愈傷一直保持致密顆粒狀。培養(yǎng)基1346上的葉

4、片沒(méi)有愈傷出現(xiàn)，只是葉片邊緣有少局部返綠，返綠局部取下接種于分化培養(yǎng)基上漸漸褐化死亡。不同培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率見(jiàn)表1。表1愈傷組織誘導(dǎo)率略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2芽的分化將培養(yǎng)基2和5上的愈傷分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基789，5d后，8和9上的愈傷均分化出苗，10d后達(dá)頂峰時(shí)期。8上的苗生長(zhǎng)較正常，9上的苗叢生密度過(guò)大，苗型細(xì)弱，生長(zhǎng)緩慢，7上的愈傷只能保持在叢生芽點(diǎn)狀態(tài)，30d后即漸漸褐化死亡。培養(yǎng)基5中產(chǎn)生的愈傷組織分化率明顯大于培養(yǎng)基2中產(chǎn)生的愈傷組織。3種分化培養(yǎng)基中幼苗分化率結(jié)果見(jiàn)表2。表2培養(yǎng)基2和5上的愈傷組織幼苗分化率略2.3根的分化小苗約12高時(shí)轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，3d后即可在小苗基

5、部見(jiàn)到白色新根，不同培養(yǎng)基根分化率如表3。表3幼苗根分化率略可見(jiàn)，隨著NAA濃度增高，根分化率反而降低，以培養(yǎng)基10較適宜。從葉片接種到小苗出瓶移栽，整個(gè)周期約1個(gè)月左右。此外，在實(shí)驗(yàn)期間還用培養(yǎng)了約2個(gè)月的青蒿無(wú)菌苗葉片接種培養(yǎng)基2和5，葉片在培養(yǎng)基上皺縮，邊緣褐化，最后死亡，始終無(wú)愈傷出現(xiàn)。2.4試管苗移栽試管苗揭去瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3d，4h/d；3d后，置于室外弱光蔭蔽處煉苗2d，4h/d；2d后，移栽已高壓滅菌的珍珠巖，澆透定根水，每天葉面噴水保濕12次，約15d后，見(jiàn)苗基部長(zhǎng)出乳白色新根，心葉開(kāi)場(chǎng)生長(zhǎng)，即說(shuō)明成活，帶土移栽大田。移栽成活率93%以上。3小結(jié)無(wú)菌苗葉片接種誘導(dǎo)培養(yǎng)基，無(wú)愈傷出現(xiàn)，初步推測(cè)，可能是缺乏消毒過(guò)程的刺激，不能產(chǎn)生具有補(bǔ)償外界傷害作用的愈傷組織，其詳細(xì)原因有待進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】1中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志通訊員.世界衛(wèi)生組織呼吁中國(guó)增加青蒿素產(chǎn)量J.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2022,12(8)：110.2許杏樣青蒿素及其一類物構(gòu)造和合成的研究J.有機(jī)化學(xué)，1982,6：447.3韋霄，李鋒,許成瓊，等.不同栽培措施對(duì)黃花蒿產(chǎn)量和青蒿素含量的影