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1、關(guān)于微生物生理第一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 主要內(nèi)容:生物的酶 微生物的營(yíng)養(yǎng) 微生物的能量代謝 微生物的合成代謝第二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 第一節(jié) 酶 一、酶的概念 催化劑 在化學(xué)中,能改變化學(xué)反應(yīng)的速度而其本身在反應(yīng)前后沒有發(fā)生變化的物質(zhì)稱為催化劑。 例如:蔗糖葡萄糖+果糖,少量鹽酸(HCl)可以大大促進(jìn)該反應(yīng)的速度,即為催化劑。 由催化劑加速反應(yīng)速度的現(xiàn)象稱為催化作用。第三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 一般的化學(xué)催化劑作用往往要求一定的條件,如高溫、高壓等。 如在合成氨工業(yè)中,使用以鐵為主體的多成分催化劑(鐵觸媒),反應(yīng)條件要
2、求:500、2107 5107 Pa(約200500atm),這就對(duì)反應(yīng)的容器等提出較高的要求。 (1atm=101325Pa)第四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 在生物體內(nèi)不斷地進(jìn)行著大量而復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)(生物化學(xué)反應(yīng)),這些反應(yīng)要求以極快的速度進(jìn)行,而且要求十分精確,才能適應(yīng)生物體生理活動(dòng)的要求。另外,生物體內(nèi)的條件是溫和的。為了滿足生物體內(nèi)生物化學(xué)反應(yīng)的要求,必須由特別的催化劑酶來催化。 定義:酶是生物體內(nèi)合成的一種具有催化性能的蛋白質(zhì),它是生物催化劑。 第五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月二、酶的催化特性 1酶積極參與生物化學(xué)反應(yīng),加速反應(yīng)速度,但不能改變
3、反應(yīng)平衡點(diǎn),在反應(yīng)前后無變化;(催化劑的一般特征)2酶的催化作用具有專一性;一種酶只能作用于一種物質(zhì)或一類物質(zhì),或者說只能催化一種或一類化學(xué)反應(yīng);第六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月3酶的催化作用條件溫和;在常溫、常壓和近中性的水溶液中進(jìn)行(生物體內(nèi)環(huán)境);4酶對(duì)環(huán)境條件極為敏感;高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子等會(huì)能使酶喪失活性;由于酶是蛋白質(zhì),容易失活;5酶具有極高的催化效率;如過氧化氫酶的催化效率比鐵離子Fe3+(一般催化劑)要高1010倍。第七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 三、酶的組成 按化學(xué)組成,酶分為單成分酶和全酶兩類。 單成分酶:酶蛋白 ,如淀粉酶、蛋
4、白酶等水解酶。 全酶:酶蛋白+不含氮的小分子有機(jī)物 如多種脫氫酶類 酶蛋白+不含氮的小分子有機(jī)物+金屬離子 如丙酮酸脫氫酶 酶蛋白+金屬離子 如細(xì)胞色素氧化酶第八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 根據(jù)全酶中非蛋白成分與酶蛋白的結(jié)合程度,分為輔酶和輔基,前者是指與酶蛋白結(jié)合比較疏松的小分子有機(jī)物,如輔酶和輔酶等;后者是以共價(jià)鍵與酶蛋白結(jié)合、不容易與酶蛋白分開的一類物質(zhì),如鐵卟啉等。第九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 常見的輔基和輔酶: 1. 鐵卟啉 :細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的輔基,其中含有鐵離子,當(dāng)鐵離子在二價(jià)與三價(jià)之間變化時(shí),電子被傳遞。 2.輔酶A(CoA
5、或CoASH):由腺嘌呤核苷酸、泛酸和氨基乙硫醇等組成,在糖代謝和脂代謝中起重要作用,它通過巰基(-SH)的受酰和脫酰參與轉(zhuǎn)酰基反應(yīng)。第十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月3.NAD(Co)和NADP (Co):輔酶是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸,輔酶是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。兩者是多種脫氫酶的輔酶,在反應(yīng)中起傳遞氫的作用。4.FMN(黃素單核苷酸)和FAD(黃素腺嘌呤二核苷酸):氨基酸氧化酶和琥珀酸脫氫酶的輔基。電子傳遞體系的組成部分,起傳遞氫的作用。第十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 5.輔酶Q(CoQ):又稱泛醌,電子傳遞體系的組成部分,起傳遞氫和電子的作用。 6
6、.硫辛酸(L )焦磷酸硫胺素(TPP):兩者結(jié)合成LTPP,為-酮酸脫羧酶和糖類轉(zhuǎn)酮酶的輔酶,參與丙酮酸和- 酮戊二酸的氧化脫羧反應(yīng),起傳遞酰基和氫的作用。 第十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 7.腺苷磷酸及其他核苷酸類 腺苷磷酸:AMP 、ADP 、ATP; 其他核苷酸類:GTP、UTP 、GTP等。 它們都含有高能磷酸鍵,在轉(zhuǎn)化過程中能量被吸收或釋放,在能量代謝過程中起重要作用。第十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 8.磷酸砒哆醛和磷酸砒哆胺:磷酸砒哆醛是氨基酸轉(zhuǎn)氨酶、消旋酶、脫羧酶的輔酶,磷酸砒哆胺與轉(zhuǎn)氨作用有關(guān)。 9.生物素(維生素H):是很多需要AT
7、P的羧化酶的輔基,催化CO2的固定和和轉(zhuǎn)移及脂肪合成反應(yīng)。 第十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 10.四氫葉酸(輔酶F,THFA):轉(zhuǎn)移一碳基團(tuán),如羥甲基、甲酰基等。 11.金屬離子:酶的輔基,激活劑,許多酶中含有鐵、銅、鎂等離子。 第十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月專性厭氧菌的輔酶: (1)輔酶M:有三種存在形式,即2-巰基乙烷磺酸,2,2-二硫乙烷磺酸和2-甲基硫乙烷磺酸。在260nm處有吸收峰。它為產(chǎn)甲烷菌所特有,是甲基轉(zhuǎn)移酶的輔酶,是活性甲基的載體。第十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(2)F420(輔酶420,CoF420):是一種
8、黃素衍生物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)類似FMN。氧化型的F420的吸收光譜為420nm,可產(chǎn)生熒光,當(dāng)呈還原態(tài)時(shí),熒光消失。F420是甲基轉(zhuǎn)移酶的的輔酶,是活性甲基的載體。(3)F430(輔酶430,Co F430 ): 是含有一個(gè)Ni原子的四吡咯環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物, 在430nm 處有最大吸收峰。是甲基輔酶M還原酶組分C的彌補(bǔ)基,參與甲烷形成的末端反應(yīng)。第十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (4)MPT:即甲烷蝶呤。是一種含有蝶呤環(huán)產(chǎn)甲烷菌輔酶,在342nm處呈現(xiàn)淺藍(lán)色熒光。有多種衍生物,如四氫甲烷蝶呤(THMP)。作用與葉酸相似,參與C1還原反應(yīng),使甲酰基還原為甲基。 (5)MFR:即甲烷呋
9、喃。由酚、谷氨酸、二羧基脂肪酸和呋喃環(huán)四種分子結(jié)合而成。在甲烷和乙酸形成過程中起甲基載體作用。第十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 四、酶蛋白的結(jié)構(gòu) 與所有的蛋白質(zhì)一樣,酶蛋白也是由氨基酸組成的。 在生物體中的蛋白質(zhì),由20種氨基酸組成(極少例外): 第十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月Ala(丙氨酸) Arg(精氨酸) Asn(天門冬酰胺) Asp(天門冬氨酸) Cys(半胱氨酸)Gln(谷氨酰胺)Glu(谷氨酸) Gly(甘氨酸) His(組氨酸) Ile(異亮氨酸)Leu(亮氨酸) Lys(賴氨酸) Met(蛋氨酸) Phe(苯丙氨酸) Pro(脯氨酸)S
10、er(絲氨酸) Thr(蘇氨酸) Trp(色氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(纈氨酸) 第二十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 氨基酸之間通過肽鍵(- NH - CO -)連接成多肽鏈。多肽鏈之間或一條多肽鏈卷曲后相鄰的基團(tuán)之間通過氫鍵、鹽鍵、酯鍵、疏水鍵、范德華引力及金屬鍵等相連接,形成蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)。第二十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 第二十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月一級(jí)結(jié)構(gòu) 是指多肽鏈的氨基酸殘基的排列順序,也是蛋白質(zhì)最基本的結(jié)構(gòu)。它是由基因上遺傳密碼的排列順序所決定的,各種氨基酸按遺傳密碼的順序通過肽鍵連接起來。二級(jí)結(jié)構(gòu)(sec
11、ondary structure) 二級(jí)結(jié)構(gòu)是指多肽鏈借助于氫鍵沿一維方向排列成具有周期性的結(jié)構(gòu)的構(gòu)象,是多肽鏈局部的空間結(jié)構(gòu)(構(gòu)象),主要有螺旋、折疊、轉(zhuǎn)角等幾種形式,它們是構(gòu)成蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)的基本要素。第二十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiary structure) 三級(jí)結(jié)構(gòu)主要針對(duì)球狀蛋白質(zhì)而言的,是指整條多肽鏈由二級(jí)結(jié)構(gòu)元件構(gòu)建成的總?cè)S結(jié)構(gòu)。 蛋白質(zhì)特定的空間構(gòu)象是由氫鍵、離子鍵、偶極與偶極間的相互作用、疏水作用等作用力維持的,疏水作用是主要的作用力。有些蛋白質(zhì)還涉及到二硫鍵。第二十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 四級(jí)結(jié)構(gòu)(qu
12、aternary structure) 亞基是由一條或幾條多肽鏈在三級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上形成的小單位。 四級(jí)結(jié)構(gòu)是指在亞基和亞基之間通過疏水作用等次級(jí)鍵結(jié)合成為有序排列的特定的空間結(jié)構(gòu)。 少數(shù)酶具有四級(jí)結(jié)構(gòu)。第二十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 五、酶的活性中心 酶的活性中心是指在酶蛋白分子中與底物結(jié)合,并起催化作用的小部分氨基酸微區(qū)。 組成酶的活性中心,可以是蛋白質(zhì)多肽鏈上不同位置的氨基酸區(qū)域。第二十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月核糖核酸酶(牛胰)A由124
13、個(gè)氨基酸組成,各氨基酸的排列順序均已確定:第二十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第三十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 活性中心可分為結(jié)合部位和催化部位。 只有酶蛋白保持一定的空間構(gòu)型,酶的活性中心才能存在。 如果酶蛋白發(fā)生變性,構(gòu)成酶活性中心的基團(tuán)互相分開,酶與底物將無法形成結(jié)合,酶促反應(yīng)也就無法進(jìn)行。第三十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 在酶(雙成分酶)的非蛋白成分上,具有催化功能的那一部分,稱為活性基,它決定著催化反應(yīng)的性質(zhì),擔(dān)負(fù)著傳遞電子、原子或化學(xué)基團(tuán)的功能。 單獨(dú)的酶蛋白沒有酶活性或活性很低,只有與活性基結(jié)合,才顯示出酶的高度專一性和
14、強(qiáng)大催化效率。第三十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月酶與底物結(jié)合的機(jī)理第三十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第三十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 六、酶的分類與命名 1、酶的分類 (1)根據(jù)酶所催化反應(yīng)的類型分類 將酶分為六大類,分別用1、2、3、4、5、6的編號(hào)來表示。再根據(jù)底物中被作用的基團(tuán)或鍵的特點(diǎn)將每一大類分為若干個(gè)亞類,每一個(gè)亞類又按順序編成1、2、3、4等數(shù)字。每一個(gè)亞類可再分為若干個(gè)亞亞類,仍用1、2、3、4編號(hào)。 第三十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 所以每一個(gè)酶的分類編號(hào)由四個(gè)數(shù)字組成,數(shù)字間由“”隔開;第一
15、個(gè)數(shù)字指出該酶屬于六個(gè)大類中的哪一類;第二個(gè)數(shù)字指出該酶屬于哪一亞類;第三個(gè)數(shù)字指出該酶屬于哪一個(gè)亞亞類;第四個(gè)數(shù)字則表明該酶在一定的亞亞類中的排號(hào)。編號(hào)之前往往冠以EC(酶學(xué)委員會(huì))之縮寫。如乳酸:NAD+氧化還原酶的編號(hào)EC1.1.1.27。第三十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 六個(gè)大類的酶介紹如下: 1)氧化還原酶類(氧化還原反應(yīng)) AH2+BA+BH2 還可進(jìn)一步分為氧化酶和脫氫酶。2)轉(zhuǎn)移酶類(底物的基團(tuán)轉(zhuǎn)移到另一有機(jī)物上) A-R+BA+B-R R可以是氨基、醛基、酮基、磷酸基等。第三十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 3)水解酶類(大分子有機(jī)物水
16、解) A-B+HOHAOH+BH 4)裂解酶類(有機(jī)物裂解成小分子物質(zhì)) ABA+B 5)異構(gòu)酶類(同分異構(gòu)體之間的轉(zhuǎn)化) AA 6)合成酶類(底物的合成反應(yīng),需要能量) A+B+nATPAB+nADP+nPi第三十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(2)按酶的作用部位分類 可分為胞外酶、胞內(nèi)酶和表面酶等。(3)按酶作用的底物不同分類 可分為淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等。(4)按照酶在生物體內(nèi)存在的狀況分類 可分為組成酶和誘導(dǎo)酶: 組成酶(constitutive enzyme),無論培養(yǎng)基中有無它們的底物,這種酶都能形成。 誘導(dǎo)酶,也稱為適應(yīng)酶(adaptive emzy
17、me),只有在培養(yǎng)基中存在其底物時(shí)才能形成。如在E.coli中的利用乳糖的酶就是適應(yīng)酶。 第三十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2、酶的命名 (1)習(xí)慣命名 原則: 絕大多數(shù)酶依據(jù)其底物命名,如淀粉酶。 某些酶根據(jù)其所催化反應(yīng)的性質(zhì)命名,如水 解酶催化底物分子水解。 有的酶結(jié)合上述兩個(gè)原則,如琥珀酸脫氫酶。 在這些命名的基礎(chǔ)上有時(shí)還加上酶的來源或酶的其他特點(diǎn),如胃蛋白酶,堿性磷酸酯酶。第四十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (2)系統(tǒng)命名 系統(tǒng)命名包括底物名稱、反應(yīng)性質(zhì),加上“酶”字。如草酸氧化酶(習(xí)慣名稱)寫成系統(tǒng)名稱時(shí),應(yīng)將它的兩個(gè)底物,即“草酸”和“氧”同
18、時(shí)列出,并用“:”將它們隔開,它所催化反應(yīng)的性質(zhì)為“氧化”,也需指明,所以它的系統(tǒng)名稱為“草酸:氧氧化酶”。若底物之一是水時(shí),可將水略去不寫,如乙酰輔酶A水解酶(習(xí)慣名),可寫成乙酰輔酶A:水解酶。第四十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月七、 酶活力和影響酶活力的因素 1、酶活力的表達(dá) 酶活力:指酶催化一定的化學(xué)反應(yīng)的能力。 酶活力的大小可用在一定的條件下,酶催化某 一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率來表示。 反應(yīng)速率是用單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量和產(chǎn)物的增加量來表示的。 第四十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 酶活力的高低用酶活力單位來表示。 國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)規(guī)定:在最適條件下,每
19、分鐘能使1mol/L的底物轉(zhuǎn)化所需要的酶量為一個(gè)酶活力單位(IU或U)。 新的酶活力單位“催量”(Katal 簡(jiǎn)稱Kat) 1Kat單位定義為:在最適條件下,每秒鐘內(nèi)催化1mol/L底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。 酶的比活力:在固定條件下,每毫克或毫升酶液所具有的酶活力。第四十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2、酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)米-門公式 (1)酶反應(yīng)機(jī)理中間產(chǎn)物學(xué)說 Michaelis和Menten 提出酶反應(yīng)的 中間產(chǎn)物學(xué)說: 酶與底物先絡(luò)合成一個(gè)絡(luò)合物,此中間產(chǎn)物被看作為穩(wěn)定的過度態(tài)物質(zhì),然后絡(luò)合物再進(jìn)一步分解,成為產(chǎn)物和游離態(tài)酶。 第四十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于20
20、22年6月 k1 k3 E+S ES E+P k2(2)米氏公式 由上述中間反應(yīng),根據(jù)質(zhì)量作用定律,導(dǎo)出酶促反應(yīng)速度方程式:(米-門公式): Km=(k2+k3)/k1 第四十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月米氏常數(shù)Km的含義:(1)當(dāng)V=Vmax/2時(shí),Km=S,故它是反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度; (2)Km=(k2+k3)/k1,表示酶與底物的反應(yīng)完全程度,Km越小,表明酶與底物的反應(yīng)越趨于完全,Km越大,表明酶與底物的反應(yīng)越不完全。對(duì)米氏公式作圖,可以看到下述關(guān)系:第四十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第四十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2
21、022年6月米氏常數(shù)的求法:Lineweaver-Burk圖解法(雙倒數(shù)法)其他的變形法 第四十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 3.影響酶活力的主要因素(1)酶濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 在酶促反應(yīng)中,如果底物的濃度足夠大,則反應(yīng)速度與酶濃度成正比。使用的酶必須是純酶制劑或不含抑制物的粗酶制劑。第四十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第五十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (2)底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)的影響 在生化反應(yīng)中,若酶的濃度為定值,底物的起始濃度較低時(shí),酶促反應(yīng)速度與底物濃度成正比,即隨底物濃度的增加而增加。當(dāng)所有的酶與底物結(jié)合生成ES后,即使再
22、增加底物濃度,中間產(chǎn)物濃度ES也不會(huì)增加,酶促反應(yīng)速度也不增加。 在底物濃度相同的條件下,酶促反應(yīng)速度與酶的初始濃度成正比。酶的初始濃度大,其酶促反應(yīng)速度就大。 第五十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (3)溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 酶有一個(gè)最適溫度,在最適溫度的兩側(cè)反應(yīng)速度都比較低。 溫度系數(shù)Q10:反應(yīng)溫度提高10,其反應(yīng)速度與原來的反應(yīng)速度之比。 不同生物體內(nèi)酶的最適溫度不同。動(dòng)物組織中酶的最適溫度為3740,微生物體內(nèi)的為2560。 第五十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 溫度對(duì)酶活性有雙重影響: 一方面是當(dāng)溫度升高時(shí),反應(yīng)速度加快。另一方面隨溫度的升高
23、而使酶逐步變性,即通過減少有活性的酶而降低酶的反應(yīng)速度。 第五十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第五十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (4)pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 酶反應(yīng)的最適pH:在一定的pH下,酶反應(yīng)具有最大速度,高于或低于此值,反應(yīng)速度下降。 最適pH因底物的種類、性質(zhì)及緩沖液成分等的不同而不同。 pH對(duì)酶活力的影響主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面: 改變底物分子和酶分子的帶電狀態(tài),從而影響酶與底物的結(jié)合; 過高、過低的pH會(huì)影響酶蛋白的構(gòu)象,甚至使酶變性而失活。第五十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第五十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年
24、6月(5)激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 激活作用 無有 低高 能激活酶的物質(zhì)稱為酶的激活劑。 激活劑種類很多,有無機(jī)陽離子、無機(jī)陰離子、有機(jī)化合物等。第五十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 許多酶只有當(dāng)某一種適當(dāng)?shù)募せ顒┐嬖跁r(shí),才表現(xiàn)出催化活性或強(qiáng)化其催化活性,這稱為對(duì)酶的激活作用。例如,金屬離子的激活作用起了某種搭橋作用,它先與酶結(jié)合,再與底物結(jié)合,形成酶-金屬-底物的復(fù)合物。 第五十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 有些酶被合成后呈現(xiàn)無活性狀態(tài),這種酶稱為酶原。它必須經(jīng)過適當(dāng)?shù)募せ顒┘せ詈蟛啪哂谢钚浴H缫鹊鞍酌竸偤铣蓵r(shí),沒有活性,為胰蛋白酶原,需經(jīng)腸激酶激活后
25、才具有活性。又如酵母磷酸葡萄糖變位酶,需1310-3M的 Mg2+ 進(jìn)行激活,其活性可以增加6.6倍。 第五十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(6)抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 能減弱、抑制甚至破壞酶活性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。 它可降低酶促反應(yīng)速度。 酶的抑制劑有重金屬離子、碘化乙酸、生物堿、染料、有機(jī)汞、有機(jī)砷化合物、氰化物、表面活性劑等。 第六十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 競(jìng)爭(zhēng)性抑制 這類抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)與底物的很類似,與底物共同競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心,使酶的活性受到抑制。通過增加底物濃度最終可解除抑制,恢復(fù)酶的活性。如丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的抑制。 第六十一張,
26、PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制 抑制劑與酶活性中心以外的位點(diǎn)結(jié)合后,底物仍可和酶活性中心結(jié)合,但酶不顯示活性。 如亮氨酸是精氨酸酶的一種非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。第六十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第六十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 第二節(jié) 微生物的營(yíng)養(yǎng) 營(yíng)養(yǎng)是指生物體從外部環(huán)境中攝取對(duì)其生命活動(dòng)必需的能量和物質(zhì),以滿足正常生長(zhǎng)和繁殖需要的一種最基本的生理功能。 營(yíng)養(yǎng)物是指具有營(yíng)養(yǎng)功能的物質(zhì),包括輻射能在內(nèi)。 微生物的營(yíng)養(yǎng)物可為它們的正常生命活動(dòng)提供結(jié)構(gòu)物質(zhì)、能量、代謝調(diào)節(jié)物質(zhì)和必要的生理環(huán)境。第六十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于202
27、2年6月一、微生物細(xì)胞的化學(xué)組成 微生物細(xì)胞中最重要的組分是水,約占細(xì)胞總重量的7090%,其余1030%為干物質(zhì)。干物質(zhì)中有機(jī)物占9097%,包括蛋白質(zhì)、核酸、糖類和脂類,其主要化學(xué)元素是C、H、O、N、P、S;其余310%是無機(jī)物,包括P、S、K、Na、Mg、Fe、Cl和微量元素Cu、Mn、Zn、B、Mo、Co、Ni等。第六十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月二、微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有六大類,即碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽和水。 1、 碳源 碳源是在微生物生長(zhǎng)過程中為微生物提供碳素來源的物質(zhì)。碳源物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過一系列復(fù)雜的化學(xué)變化,成為微生物的自身物質(zhì)和
28、代謝產(chǎn)物,碳約占細(xì)胞干重的50%。同時(shí)絕大部分碳源物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)過程中還為機(jī)體提供維持生命活動(dòng)所需的能源,因此碳源物質(zhì)通常也是能源物質(zhì)。第六十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第六十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 微生物的碳源譜雖廣,但異養(yǎng)微生物在元素水平上的最適碳源則是“CH O ”型。具體地說,其中糖類是最廣泛利用的碳源,其次是有機(jī)酸類、醇類和脂類等。在糖類中,單糖優(yōu)于雙糖和多糖,己糖優(yōu)于戊糖,葡萄糖、果糖優(yōu)于甘露糖、半乳糖;在多糖中,淀粉優(yōu)于纖維素或幾丁質(zhì)等純多糖,純多糖則優(yōu)于瓊脂等雜多糖。目前在微生物工業(yè)發(fā)酵中所利用的碳源物質(zhì)主要是單糖、飴糖、糖蜜
29、、淀粉、麩皮、米糠等。第六十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 不同微生物可利用碳源范圍不同。 如洋蔥假單胞菌可利用90多種化合物作碳源,而產(chǎn)甲烷菌僅能利用CO2和少數(shù)1C或2C化合物. 有些微生物可以利用石蠟、酚、氰化物及塑料等高度不活躍的碳?xì)?化合物和有毒物質(zhì)。這些在環(huán)境保護(hù)上有重要意義。 例如:霉菌和諾卡氏菌可以降解氰化物,假絲酵母可以降解塑料,假 單胞菌可以降解酚類化合物。第六十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2、 氮源 氮源物質(zhì)為微生物氮素來源,這類物質(zhì)主要用來合成細(xì)胞中的含氮物質(zhì),一般不作為能源。在碳源物質(zhì)缺乏的情況下,某些厭氧微生物在厭氧條件下可以
30、利用某些氨基酸作為能源物質(zhì)。氮占細(xì)菌干重的12%15%。 第七十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第七十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 異養(yǎng)微生物對(duì)氮源的利用順序:“NC H O”或“N C H O X”類優(yōu)于“N H”類,更優(yōu)于“N O”類,最不易利用的是“N”類。在微生物培養(yǎng)基成分中,最常用的有機(jī)氮源是牛肉膏、酵母膏、植物的餅粕粉和蠶蛹粉等,各種蛋白胨尤為廣泛使用。 第七十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 根據(jù)對(duì)氮源要求的不同,將微生物分為4類: 固氮微生物:固氮菌、根瘤菌等 利用無機(jī)氮作為氮源的微生物:硝化細(xì)菌、大腸桿菌、枯草桿菌、放線菌、霉
31、菌、酵母菌及藻類等 需要某種氨基酸作為氮源的微生物:乳酸細(xì)菌、丙酸細(xì)菌等 從分解蛋白質(zhì)中取得銨鹽或氨基酸的微生物:氨化細(xì)菌、霉菌、酵母菌和一些腐敗細(xì)菌第七十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月3、 能源 能為微生物提供最初能量來源的營(yíng)養(yǎng)物或輻射能,稱為能源。 有機(jī)物:化能異養(yǎng)微生物能源 化學(xué)物質(zhì) 無機(jī)物:化能自養(yǎng)微生物能源能源譜 輻射能 :光能自養(yǎng)和光能異養(yǎng)微生物能源化能自養(yǎng)型微生物:能源為還原態(tài)無機(jī) 物-NH4+、NO2-、S、H2S、H2、Fe2+等。 第七十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 4、無機(jī)鹽 無機(jī)鹽主要可為微生物提供除碳、氮源以外的各種重要元素。 大
32、量元素需要量:10-310-4 mol/L,如P、S、K、Mg、Na和Fe等;微量元素需要量:10-610-8 mol/L。如Cu、Zn、Mn、Mo、Co、Ni、 Sn 和Se等。 無機(jī)鹽的營(yíng)養(yǎng)功能如下:第七十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第七十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 微生物需要的無機(jī)鹽有磷酸鹽、硫酸鹽、氯化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽。 微量元素通常混雜在天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物、無機(jī)化學(xué)試劑、自來水、蒸餾水、普通玻璃器皿中,如果沒有特殊原因,在配制培養(yǎng)基時(shí)沒有必要另外加入微量元素。 第七十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 5、生長(zhǎng)因子 概念:一類調(diào)
33、節(jié)微生物正常代謝所必需、但不能用簡(jiǎn)單的碳、氮源自行合成的有機(jī)物,只需很少量。 生長(zhǎng)因子包括:維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第七十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 生長(zhǎng)因子自養(yǎng)型微生物:不需要從外界吸收任何生長(zhǎng)因子的微生物,如大腸桿菌。 生長(zhǎng)因子異養(yǎng)型微生物:需要從外界吸收多種生長(zhǎng)因子才能維持正常生長(zhǎng)的微生物,如乳酸菌。 生長(zhǎng)因子過量合成的微生物:在代謝過程中能合成并分泌某些維生素等生長(zhǎng)因子的微生物,如阿舒假囊酵母。第七十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 6、 水 水的功能: (1)良好的溶劑,代謝反應(yīng)的媒介。 (2)調(diào)節(jié)細(xì)胞的溫度(3)直接參與蛋白質(zhì)、糖、脂肪的
34、水解反應(yīng)。(4)維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。 細(xì)菌含水量75-85% (芽孢含水量40%) ,酵母菌含水量70-85%,霉菌含水量85-90%(孢子含水量39%)。第八十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月三、微生物的營(yíng)養(yǎng)類型 按能源和碳源不同劃分: 1.光能無機(jī)營(yíng)養(yǎng)型: 以光為能源,無機(jī)物為供氫體,CO2為碳源的一類微生物。 2.光能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型: 以光為能源,有機(jī)物為供氫體,CO2和簡(jiǎn)單有機(jī)碳為碳源的一類微生物。第八十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 3.化能無機(jī)營(yíng)養(yǎng)型: 以無機(jī)物為能源,無機(jī)物為供氫體,CO2為碳源的一類微生物。 4.化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型: 以有機(jī)物為能
35、源,有機(jī)物為供氫體,有機(jī)物為碳源的一類微生物。第八十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第八十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 不同營(yíng)養(yǎng)類型之間的界限并非絕對(duì)的,異養(yǎng)型微生物并非絕對(duì)不能利用CO2,只是不能以CO2作為唯一或主要碳源進(jìn)行生長(zhǎng),而且在有機(jī)物存在的情況下也可將CO2同化為細(xì)胞物質(zhì)。同樣,自養(yǎng)型微生物也并非不能利用有機(jī)物進(jìn)行生長(zhǎng)。 另外,有些微生物在不同生長(zhǎng)條件下生長(zhǎng)時(shí),其營(yíng)養(yǎng)類型也會(huì)發(fā)生改變,如紅螺菌在有光厭氧條件下行光合作用,在黑暗好氧條件下,依靠有機(jī)物氧化產(chǎn)生的化學(xué)能生長(zhǎng)。第八十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 四、微生物的培養(yǎng)基 培
36、養(yǎng)基:人工配制的、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 1. 配制培養(yǎng)基的原則 (1)目的明確 培養(yǎng)自養(yǎng)菌或異養(yǎng)菌、試驗(yàn)用或生產(chǎn)用、一般性研究或生物學(xué)特性研究、積累含氮代謝產(chǎn)物或含碳代謝產(chǎn)物等。 第八十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (2)營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào) 微生物細(xì)胞內(nèi)各種成分間有一較穩(wěn)定的比例。在為化能異養(yǎng)微生物配制的培養(yǎng)基中,除水分外,碳源兼能源的含量最高,其后依次是氮源、大量元素和生長(zhǎng)因子。 碳、氮比(C/N):培養(yǎng)基中C原子與N原子摩爾數(shù)比。第八十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(3)理化適宜 pH 各大類微生物都有其生長(zhǎng)的最適pH范圍,細(xì)菌7.08
37、.0,放線菌7.58.5,酵母菌3.86.0,霉菌4.05.8,藻類6.07.0,原生動(dòng)物6.08.0。 第八十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 滲透壓和水活度滲透壓: 等滲微生物細(xì)胞正常生長(zhǎng),低滲微生物細(xì)胞吸水膨脹甚至破裂,高滲微生物細(xì)胞脫水造成質(zhì)壁分離。水活度aw :在相同的溫度和壓力下,某溶液的蒸汽壓(P)和純水的蒸汽壓(P0)之比,即 aw = PP0 微生物生長(zhǎng)繁殖的aw 值為0.998-0.60,細(xì)菌為0.90-0.98、酵母菌為0.87-0.91、霉菌為0.80-0.87。第八十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 控制氧化還原電位 氧化還原電勢(shì)一般用
38、Eh表示,單位是V或mV。一般好氧菌生長(zhǎng)的Eh值為+0.30.4V,兼性厭氧菌在+0.1 V以上是進(jìn)行好氧呼吸產(chǎn)能,而在+0.1 V以下是進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)能,厭氧菌只能生長(zhǎng)在+0.1 V以下的環(huán)境中。 (4)經(jīng)濟(jì)節(jié)約 (5)滅菌處理第八十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2.培養(yǎng)基的種類及其應(yīng)用(1)按對(duì)培養(yǎng)基的成分了解分 天然培養(yǎng)基 概念:利用動(dòng)、植物或微生物包括其提取物制成的培養(yǎng)基。 優(yōu)點(diǎn):營(yíng)養(yǎng)豐富、種類多樣、配制方便、價(jià)格低廉。 缺點(diǎn):成分不清楚、不穩(wěn)定。 應(yīng)用:實(shí)驗(yàn)室中菌種的培養(yǎng)、發(fā)酵工業(yè)中生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)和某些發(fā)酵產(chǎn)物的生產(chǎn)。第九十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6
39、月 合成培養(yǎng)基 概念:按微生物的營(yíng)養(yǎng)要求精確設(shè)計(jì)后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。 優(yōu)點(diǎn):成分精確、重演性高。 缺點(diǎn):價(jià)格較貴,配制麻煩,微生物生長(zhǎng)一般。 應(yīng)用:營(yíng)養(yǎng)、代謝、生理、生化、遺傳、育種、菌種鑒定和生物測(cè)定等研究。第九十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 半合成培養(yǎng)基 主要以化學(xué)試劑配制,同時(shí)加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。第九十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (2)按培養(yǎng)基的外觀物理狀態(tài)分 液體培養(yǎng)基 外觀呈液態(tài)的培養(yǎng)基。 適用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究方面。 第九十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月固態(tài)培
40、養(yǎng)基 外觀呈固態(tài)的培養(yǎng)基。 A、凝固培養(yǎng)基,在培養(yǎng)基中加入2%瓊脂或12%明膠作凝固劑,加熱融化,冷卻后凝固形成的培養(yǎng)基。 B、非可逆性固體培養(yǎng)基,凝固后不能再融化的培養(yǎng)基,如血清培養(yǎng)基和無機(jī)硅膠培養(yǎng)基。第九十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 C、天然固體培養(yǎng)基,又天然固態(tài)基質(zhì)直接制成的培養(yǎng)基。 D、濾膜,把濾膜制成圓片狀覆蓋在營(yíng)養(yǎng)瓊脂或浸有營(yíng)養(yǎng)液的纖維素襯墊上,就形成了具有固體培養(yǎng)基性質(zhì)的培養(yǎng)條件。 固體培養(yǎng)基用途廣泛,如菌種分離、鑒定、菌落計(jì)數(shù)、檢驗(yàn)雜菌、選種、育種、菌種保藏、抗生素等生物活性物質(zhì)的測(cè)定、獲得大量真菌孢子,以及微生物的大規(guī)模生產(chǎn)。第九十五張,PPT共一百六十
41、六頁,創(chuàng)作于2022年6月 半固體培養(yǎng)基 指液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑而制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。瓊脂的加入量一般為0.5%左右。 可用于細(xì)菌動(dòng)力觀察、菌種保藏和噬菌體效價(jià)測(cè)定等。 第九十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (3)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮陀猛痉?基礎(chǔ)培養(yǎng)基 按照大多數(shù)微生物生長(zhǎng)需要的要求,用基本營(yíng)養(yǎng)成分配制的一種培養(yǎng)基。如培養(yǎng)細(xì)菌用的肉湯培養(yǎng)基。 第九十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 選擇培養(yǎng)基 根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)化學(xué)、物理因素有抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,具有使混合樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能。 第九十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6
42、月 如利用以纖維素或石蠟油作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基,可從混雜的微生物群體中分離出分解纖維素或石蠟油的微生物。 如在培養(yǎng)基中加入青霉素、鏈霉素可抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng),而將酵母菌和霉菌分離出來。 第九十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 鑒別培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達(dá)到只需肉眼就能方便地從近似菌落中找出目的菌落的培養(yǎng)基。 第一百零一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 如EMB培養(yǎng)基(伊紅美蘭乳糖培養(yǎng)基) 含有伊紅和美蘭兩種染料,可抑制G+菌 。 這兩種染料可起產(chǎn)酸指示劑的
43、作用。 大腸桿菌在EMB培養(yǎng)基上生長(zhǎng),可分解乳糖產(chǎn)酸,其菌體與伊紅結(jié)合、伊紅又與美蘭結(jié)合,菌落被染成深紫色,從菌落表面的反射光中還可看到綠色閃光。第一百零二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百零三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百零四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 加富培養(yǎng)基 在基本培養(yǎng)基中加入血、血清、動(dòng)物或植物組織液或其他生長(zhǎng)因子配制而成的營(yíng)養(yǎng)特別豐富的培養(yǎng)基。第一百零五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 五、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的方式 除原生動(dòng)物(吞噬作用)外,有細(xì)胞的微生物都是通過細(xì)胞膜的滲透和選擇吸收作用而從外界攝取營(yíng)養(yǎng)物的。
44、細(xì)胞膜運(yùn)送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有單純擴(kuò)散、促進(jìn)擴(kuò)散、主動(dòng)運(yùn)送和基團(tuán)移位四種方式。第一百零六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月五、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的方式 一、單純擴(kuò)散 二、促進(jìn)擴(kuò)散 三、主動(dòng)運(yùn)輸 第一百零七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 1、單純擴(kuò)散 許多小分子、非電離分子尤其是親脂性分子通過物理擴(kuò)散被動(dòng)通過細(xì)胞膜,如O2、CO2、乙醇等。無蛋白載體參與,不消耗能量,動(dòng)力是細(xì)胞膜內(nèi)外物質(zhì)的濃度差。 第一百零八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2、促進(jìn)擴(kuò)散 一些非脂溶性的物質(zhì)需借助于載體蛋白(滲透酶、移位酶)的協(xié)助通過細(xì)胞膜,如糖、氨基酸等。不消耗能量,動(dòng)力是細(xì)胞膜內(nèi)
45、外物質(zhì)的濃度差。第一百零九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百一十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 3、主動(dòng)運(yùn)輸 微生物吸收營(yíng)養(yǎng)的主要方式,需要消耗能量并通過細(xì)胞膜上特異載體蛋白構(gòu)象的變化,將膜外環(huán)境中低濃度的物質(zhì)運(yùn)送到膜內(nèi)。通過主動(dòng)運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞的物質(zhì)有Na+、K+等無機(jī)離子、糖類、有機(jī)酸等。第一百一十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 4、基團(tuán)轉(zhuǎn)位 概念:一類既需要特異性載體蛋白的參與,又需要消耗能量的一種物質(zhì)運(yùn)輸方式,其特點(diǎn)是溶質(zhì)在運(yùn)送前后分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。 基團(tuán)轉(zhuǎn)位用于葡萄糖、果糖、甘露糖、核苷、脂肪酸等物質(zhì)的運(yùn)輸。第一百一十二張,PPT共一百
46、六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 大腸桿菌運(yùn)送葡萄糖靠磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PTS)進(jìn)行,PTS包括: 熱穩(wěn)載體蛋白(HPr):一種低分子可溶蛋白,位于細(xì)胞膜上。 酶:可溶性細(xì)胞質(zhì)蛋白。 酶:共3種分別為酶a(可溶性細(xì)胞質(zhì)蛋白)、酶b、酶c(底物特異膜蛋白)。第一百一十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(1)熱穩(wěn)載體蛋白(HPr)的激活 細(xì)胞內(nèi)高能化合物磷酸烯醇式丙酮酸在酶I的作用下,將高能磷酸鍵轉(zhuǎn)移給HPr并將其激活。第一百一十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (2)葡萄糖經(jīng)磷酸化而運(yùn)入細(xì)胞膜內(nèi) 膜外環(huán)境中的葡萄糖分子先與酶IIc 結(jié)合,接著葡萄糖分子被由PHPr酶II
47、a酶IIb逐級(jí)傳遞來的磷酸基激活,最后通過酶IIc再把磷酸葡萄糖釋放到細(xì)胞質(zhì)中。 第一百一十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百一十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百一十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百一十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 第三節(jié) 微生物的產(chǎn)能代謝 代謝:微生物細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的各種化學(xué)反應(yīng)的總稱。 微生物的代謝與其他生一樣,可分為物質(zhì)代謝和能量代謝。 物質(zhì)代謝包括:分解代謝、合成代謝 能量代謝包括:產(chǎn)能代謝、耗能代謝 分解代謝與產(chǎn)能代謝緊密相連,合成代謝與耗能代謝緊密相連。 微生物的代謝離不開酶,無論是分解
48、代謝還是合成代謝都需要在酶的催化下才能進(jìn)行。 第一百一十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 一、生物氧化 1、生物氧化的特點(diǎn) 微生物的生物氧化本質(zhì)是氧化與還原的統(tǒng)一過程,細(xì)胞內(nèi)一系列產(chǎn)能代謝的總稱。 生物氧化是在酶的催化下,在溫和的條件下進(jìn)行; 在生物氧化過程中,復(fù)雜有機(jī)物被氧化成二氧化碳、水和其他簡(jiǎn)單物質(zhì); 生物氧化產(chǎn)生的能量供給生物進(jìn)行各種生命活動(dòng)或以熱的形式散發(fā); 生物氧化過程產(chǎn)生許多中間產(chǎn)物。第一百二十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2、生物能量的轉(zhuǎn)移中心ATP 有機(jī)物化能異養(yǎng)菌 ATP 最初能源 日光光能營(yíng)養(yǎng)菌 ATP 還原態(tài)無機(jī)物化能自養(yǎng)菌 ATP 第
49、一百二十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百二十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月ATP中的能量,通過與ADP的轉(zhuǎn)換吸收或釋放:ADP+PiATP 和 AMP+2PiATP由反應(yīng)式可知:ADP是能量的載體,ATP是能量庫。ATP含高能磷酸鍵,它水解釋放出高能鍵,每一個(gè)高能鍵含31.4KJ的能量。 第一百二十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 ATP只是一種短期的貯能物質(zhì)。若要長(zhǎng)期貯能,還需轉(zhuǎn)換形式。 如果有過剩的ATP,大多數(shù)微生物會(huì)將其能量轉(zhuǎn)化到儲(chǔ)能物中去,如PHB(聚-烴基丁酸)、異染粒、淀粉、肝糖、糖原及硫粒等,以備缺乏營(yíng)養(yǎng)和能源時(shí)用。 第一
50、百二十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 生成ATP的具體方式:(1)底物水平磷酸化 物質(zhì)在氧化過程中,產(chǎn)生一些含有高能鍵的化合物,而這些化合物可將高能鍵交給ADP,使ADP生成ATP。 (2)氧化磷酸化 物質(zhì)在氧化過程中形成的NADH2和FADH2可通過位于線粒體內(nèi)膜和細(xì)菌質(zhì)膜上的電子傳遞系統(tǒng)將電子傳遞給氧或其他氧化型物質(zhì),在這個(gè)過程中偶聯(lián)著ATP的合成,這種產(chǎn)生ATP的方式叫氧化磷酸化。第一百二十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(3)光合磷酸化 光引起葉綠素或菌綠素逐出電子,通過電子傳遞產(chǎn)生ATP的過程。 光合細(xì)菌通過環(huán)式光合磷酸化合成ATP, 藍(lán)細(xì)菌和藻類通
51、過非環(huán)式光合磷酸化合成ATP。 第一百二十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 二、生物氧化的類型 根據(jù)最終電子受體(或最終氫受體的不同),可將微生物的生物氧化分為三類:發(fā)酵、好氧呼吸及無氧呼吸。 1、發(fā)酵 發(fā)酵是指在無外在電子受體時(shí),底物脫氫后所產(chǎn)生的還原力H不經(jīng)呼吸鏈傳遞而直接交給某一內(nèi)源性中間產(chǎn)物接受,以實(shí)現(xiàn)底物水平磷酸化產(chǎn)能的一類生物氧化反應(yīng)。此過程中有機(jī)物只是部分地被氧化,因此只釋放一小部分的能量。發(fā)酵過程的氧化是和有機(jī)物的還原偶聯(lián)在一起的。被還原的有機(jī)物來自于初始發(fā)酵的產(chǎn)能代謝,即不需要外界提供電子受體。 第一百二十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 糖酵
52、解:生物體內(nèi)葡萄糖被降解成丙酮酸的過程,主要分為四種途徑:EMP途徑、HMP途徑、ED途徑和磷酸解酮酶途徑。 EMP途徑CAI第一百二十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月以葡萄糖的乙醇發(fā)酵為例,可分為兩大步:(1)不涉及氧化還原反應(yīng)的預(yù)備性反應(yīng):葡萄糖(C6H12O6)3-磷酸甘油醛;(2)有氧化還原的反應(yīng):丙酮酸(CH3COCOOH)乙醛(CH3CHO)(二氧化碳)乙醇(CH3CH2OH)。通過底物磷酸化,得到ATP。1mol的葡萄糖,可以得到2mol的ATP、2mol的乙醇和2mol的二氧化碳。 (圖)第一百二十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百三十張,P
53、PT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月乙醇發(fā)酵的能量利用效率為:231.4/238.3=26%。從丙酮酸開始,通過各種微生物不同的發(fā)酵作用,產(chǎn)生各種不同的產(chǎn)物。如:混合酸發(fā)酵、丁二醇發(fā)酵、丙酸發(fā)酵等等。 第一百三十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 表 不同的發(fā)酵類型及其有關(guān)微生物發(fā)酵類型 產(chǎn)物 微生物乙醇發(fā)酵 乙醇、CO2 酵母菌屬(Saccharomyces)乳酸同型發(fā)酵 乳酸 乳酸細(xì)菌屬(Lactobacillus)乳酸異型發(fā)酵 乳酸、乙醇、乙酸、CO2 明串球菌屬(Leuconostoc)混合酸發(fā)酵 乳酸、乙酸、乙醇、甲酸 大腸埃希氏桿菌 CO2、H2 (Escheri
54、chia coli)丁二醇發(fā)酵 丁二醇、乳酸、乙酸、乙醇、 氣桿菌屬(Aerobacter) CO2、H2丁酸發(fā)酵 丁酸、乙酸、CO2、H2 丁酸梭菌(Clostridium butylicum)丙酮-丁醇發(fā)酵 丁醇、丙酮、乙醇 丙酮丁醇梭菌 (Clostridium acetobutylicum) 丙酸發(fā)酵 丙酸 丙酸桿菌屬(Propionibacterium)第一百三十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百三十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 2、好氧呼吸 好氧呼吸在是有氧的情況下,微生物將底物徹底氧化,脫下的氫完整的呼吸鏈(電子傳遞體系)傳給分子氧并生成水
55、和產(chǎn)生大量ATP的過程。 以葡萄糖為例,葡萄糖丙酮酸TCA (1)三羧酸(TCA)循環(huán)第一百三十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百三十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (2)電子傳遞體系 定義:是位于細(xì)胞膜(原核生物)和線粒體膜(真核生物)上的,由一系列氧化還原電勢(shì)呈梯度差的氫(或電子)的傳遞體。 組成:NAD、FAD、CoQ、Cyt b、Cyt c1、Cyt c、Cyt a和Cyt a3 功能:從電子供體接受電子并將電子傳遞給電子受體。 通過合成ATP把在電子傳遞過程中釋放的一部分能量保存起來。第一百三十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月電子
56、傳遞體系(呼吸鏈)第一百三十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百三十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月電子傳遞體系的電位和ATP的產(chǎn)生第一百三十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 (3)乙醛酸循環(huán) 有的細(xì)菌利用乙酸鹽進(jìn)行乙醛酸循環(huán)。 循環(huán)中的兩個(gè)關(guān)鍵酶:異檸檬酸裂合酶和蘋果酸合酶,前者催化異檸檬酸分解為乙醛酸和琥珀酸,后者催化乙醛酸和乙酰CoA合成蘋果酸。第一百四十張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月(4)好氧呼吸產(chǎn)生的能量 EMP:8molATP TCA: 30molATP 第一百四十一張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一
57、百四十二張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月能量的平衡:1份葡萄糖,轉(zhuǎn)化成2丙酮酸時(shí),產(chǎn)生2 NADH2和4ATP(底物磷酸化),并消耗2ATP;1mol的丙酮酸經(jīng)TCA 循環(huán),生成4mol NADH2、1mol FADH2 (黃素腺嘌呤二核苷酸) 、1molGTP(鳥嘌呤三核苷酸,隨后轉(zhuǎn)化成1mol的ATP)。通過呼吸鏈,1molNADH2產(chǎn)生3mol的ATP,1molFADH2產(chǎn)生2mol的ATP。最后得到的能量:(43+12+1)2+23+4-2=38(mol)ATP。 釋放的總能量約2876KJ,能量利用效率為31.438/2876=42%。其余的能量變成熱能耗散。這個(gè)效率是
58、高的,所以好氧呼吸氧化徹底,能量利用效率高。總反應(yīng)過程:C6H12O6+6 O2 6 CO2+6 H2O +38 ATP第一百四十三張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月3、無氧呼吸(分子外的無氧呼吸) 在電子傳遞體系中,氧化NADH2時(shí)的最終電子受體不是氧氣,而是除O2外的無機(jī)化合物,如NO2-、NO3-、SO42-、CO32-及CO2等。無氧呼吸的氧化底物一般為有機(jī)物,如葡萄糖、乙酸和乳酸等,它們被氧化為CO2,有ATP產(chǎn)生。第一百四十四張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 例如,以NO3-為最終電子受體的情況: C6H12O6+6 H2O 6 CO2+24H 24H+4
59、 NO3- 12 H2O +2N2總反應(yīng):C6H12O6+4NO3-6 CO2+2N2+6 H2O+能量釋放總能量為1756KJ,得到2 ATP。上述過程被稱為反硝化作用,或硝酸鹽還原作用。第一百四十五張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月以其他無機(jī)氧化物為最終電子受體的情況:以SO42-為最終電子受體:如:2CH3CHOHCOOH+ H2SO4 - 2CH3COOH+2CO2+H2S+2H2O+1125kJ以CO2和CO為最終電子受體:如:2CH3CH2OH+CO2-CH4+2CH3COOH 4H2+CO2-CH4+2H2O 3H2+CO-CH4+H2O第一百四十六張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 以延胡索酸為最終電子受體: 在延胡索酸呼吸系統(tǒng)中,琥珀酸是末端受氫體延胡索酸的還原產(chǎn)物。 兼性厭氧菌:埃希氏菌屬,變形桿菌屬等 第一百四十七張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百四十八張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月第一百四十九張,PPT共一百六十六頁,創(chuàng)作于2022年6月 三、發(fā)光現(xiàn)象 發(fā)光細(xì)菌,是一類G-
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